SC1042-2000奧利亞羅非魚.pdf

s C 1 0 4 2 -2 0 0 0前言 奧利亞羅非魚， 原產(chǎn)于非洲， 8 0 年代引進(jìn)我國(guó)。為保護(hù)和保存引進(jìn)的奧利亞羅非魚的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀， 防止苗種生產(chǎn)中種質(zhì)混雜和性狀退化， 并開展該魚種質(zhì)的有效監(jiān)測(cè)， 特制定本標(biāo)準(zhǔn)。 本標(biāo)準(zhǔn)是“ 七五” 、 “ 八五” 科技攻關(guān)成果的總結(jié)。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、 附錄B , 附錄C都是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部漁業(yè)局提出. 本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 潘鋒、 王和海、 胡玫。中華人民共和國(guó)水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)奧利亞羅非魚s c 1 0 4 2 一2 0 0 0B l u e t i l a p i a1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)給出了奧利亞羅非魚( O r e o c h r o m i s a u r e a ) 主要生物學(xué)性狀、 生長(zhǎng)與繁殖、 遺傳學(xué)特性及檢測(cè)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于奧利亞羅非魚的種質(zhì)檢測(cè)。2 名稱與分類2 . 1 名稱2， . ， 學(xué)名 奧利亞羅非魚( O r e o c h r o m i s a u r e a ) e2 . 1 . 2 別名 藍(lán)羅非魚、 奧利亞非娜、 奧利亞麗繃等。2 . 2 分類位置 屬妒形目( P e r c i f o r m e s ) ， 麗魚科( C i c h l i d a e ) , 孵光鰓羅非魚屬( O r e o c h r o mi s ) ,3 主要生物學(xué)性狀3 . 1 外部形態(tài)特征3 . 1 . 1 形態(tài)特征 體形側(cè)扁， 背部隆起， 腹部呈弧形， 無腹棱。吻圓鈍， 突出?？谛《宋唬?口裂不達(dá)眼前緣， 無口須。體披櫛鱗。體色藍(lán)灰色， 鰓蓋后部有一深藍(lán)色斑塊。咽喉部呈銀灰色。體側(cè)上鱗片中央的色素較邊緣深，魚體兩側(cè)有垂直暗帶。 成魚背部略帶藍(lán)黑色， 腹部顏色較淡。背鰭邊緣紅色。 胸鰭淡灰色透明。 臀鰭深藍(lán)色。尾鰭終生有藍(lán)綠色斑點(diǎn)， 不形成明顯的縱向或橫向暗帶條紋， 其末端平截不分叉， 呈現(xiàn)橙紅色， 腹鰭深藍(lán)色， 長(zhǎng)有生殖突起。 稚魚青灰色帶金色光澤， 體側(cè)有深灰色垂直暗帶， 背鰭硬棘幼魚前期有一較大黑點(diǎn)， 以后逐漸消失。各齡魚體色因環(huán)境改變而迅速變淡或加深。奧利亞羅非魚外形見圖1 aS C 1 0 4 2 一2 0 0 03 . 1 . 2 可數(shù)性狀3 . 1 . 2 . 1 背鰭鰭式: D . X V -XV 0 , 1 1 -1 3 ,3 . 1 . 2 . 2 胸鰭鰭式: P . 0, 1 1 -1 4 .3 . 1 . 2 . 3 腹鰭鰭式: V. 1 , 5 .3 . 1 . 2 . 4 臀鰭鰭式: A. 1 , 9 -1 1 .3 . 1 . 2 . 5 左側(cè)第一鰓弓外側(cè)鰓耙數(shù): 2 5 - - 2 9 03 . 1 . 2 . 6 側(cè)線斷折， 呈不連續(xù)兩行。側(cè)線鱗數(shù): 上段為 1 8 - 2 9 ， 下段為 1 2 1 8 ,3 門. 2 . 了 領(lǐng)齒 上下領(lǐng)有圓錐狀領(lǐng)齒各為三列， 最外一列為“ Y 型。3 . 1 . 3 可量性狀 可量比例性狀變動(dòng)值見表 t o 表 1 可量比例性狀變動(dòng)值項(xiàng)目范圍全長(zhǎng)， c m2 0 . 5 - 3 4 . 5體長(zhǎng) ， c m1 7 . 0 - 2 9 . 6體長(zhǎng)/ 體高2 . 5 3 - 2 . 9 4體長(zhǎng)/ 頭長(zhǎng)2 . 5 6 . 4 . 2 9體長(zhǎng)/ 尾柄長(zhǎng)5 . 8 9 - 9 . 8 7體長(zhǎng)/ 尾柄高6 . 0 6 . 1 0 . 2 1頭長(zhǎng)/ 吻長(zhǎng)2 . 3 9 - 3 . 5 0頭長(zhǎng)/ 眼徑3 . 7 2 - 5 . 2 4頭長(zhǎng)/ 眼間距2 . 0 6 - 2 . 3 5注: 此表為無錫地區(qū)2 至 3 齡奧利亞羅非魚的實(shí)側(cè)數(shù)據(jù)，3 . 2 內(nèi)部結(jié)構(gòu)特征3 . 2 . 1 縹 縹分二室， 前室較大， 后室細(xì)長(zhǎng)。3 . 2 . 2 肋骨 肋骨數(shù) 1 3 對(duì)。3 . 2 . 3 下咽齒 左、 右下咽骨愈合， 其上有濃密的蓖齒。3 . 2 . 4 脊椎骨 脊椎骨總數(shù)( 顱后椎數(shù)、 腹椎數(shù)、 尾椎數(shù)之和) 為2 9 - 3 0 ,3 . 2 . 5 腹膜 黑色。4 生長(zhǎng)與怪殖4 . 1 生長(zhǎng) 池塘飼養(yǎng)條件下， 不同年齡組魚的體長(zhǎng)和體重的理論值見表2 。S C 1 0 4 2 一 2 0 0 0表 2 不同年齡組魚的體長(zhǎng)和體重理論值年齡， 齡123體長(zhǎng)， c m1 3 . 0 6 士 0 . 4 71 9 . 4 9 士1 . 2 32 3 . 9 3 士1 . 4 9體重. 98 5 . 6 9 士1 0 . 1 72 3 1 . 9 5 士 3 7 . 64 1 7 . 1 4 士4 4 . 9 9注: 主要根據(jù)鱗片上的年輪數(shù)。 在同等飼養(yǎng)條件下， 雌魚的生長(zhǎng)率僅為同齡雄魚的5 4 %-9 0 %.4 . 2 繁殖4 . 2 . 1 性成熟年齡 雌、 雄魚初次性成熟為4 - 6 月齡。4 . 2 . 2 產(chǎn)卵 越冬魚種在水溫 2 4 - 2 6 條件下， 飼養(yǎng) 1 - 1 . 5個(gè)月即可繁殖， 年產(chǎn)卵 3 -5次， 每次間隔 1 5 -3 0 d o4 . 2 . 3 繁殖水溫 繁殖最適水溫為2 4 2 6 0C. 水溫低于 2 0 或高于3 0 0C 繁殖減少。4 . 2 . 4 懷卵量 不同年齡組魚的個(gè)體懷卵量見表 3 , 表 3 不同年齡組魚的個(gè)體懷卵量年齡， 齡123體重, g5 0 - 1 5 02 0 0 3 5 04 0 0 - 6 0 0絕對(duì)懷卵量日 ， 粒2 5 0 - 6 0 08 0 0 - 1 2 0 01 3 0 0 2 5 0 0相對(duì)懷卵ta , 粒5 - 34 - 33 - 21 ) 絕對(duì)懷卵f, 指直觀可數(shù)的卵位數(shù)2 ) 相對(duì)懷卵t, 指單位體重( 9 ) 所含卵粒數(shù)。5 遺傳學(xué)特性5 . 1 同功酶 醇脫氫醇( A D H) 電泳圖譜， 肝中AD H有 2 個(gè)位點(diǎn)， 2 條譜帶， 無多態(tài)( 見圖 2 )邸 即 靡 一辱0 圖 2 奧利亞羅非魚肝組織A D H同工酶電泳圖譜5 . 2 染色體數(shù) 體細(xì)胞染色體數(shù)2 攤 =4 4 ,5 . 3 核型 雌、 雄魚核型完全一致， 有亞中部著絲粒染色體( s m組) 3 對(duì)， 亞端部著絲粒染色體( s t 組) 1 2 對(duì)， 端部著絲粒染色體( t 組) 7 對(duì)， 染色體育數(shù)( N F ) 5 0 ( 見圖3 ) eS C 1 0 4 2 一 2 0 0 0八人幾井古住p.nU入 八滬 、側(cè) . .辦 介八 滬 i t 幾八晚八 八六 扣介 八圖 3 奧利亞羅非魚染色體組型核型公式: 6 s m+ 2 4 s t + 1 4 t ,6 檢測(cè)方法6 . 1 生化遺傳分析6 . 1 . 1 電泳樣品制備 將魚殺死， 取肝臟組織0 . 3 g ， 以4 倍體積0 . 3 %的氧化型輔酶I 液勻漿. 在冷凍離心機(jī)中以1 7 0 0 0r / m i n離心 2 次， 第一次離心后， 去除上層油膜， 再第二次離心， 至上層溶液澄清為止， 取上清液點(diǎn)樣。6 . 1 . 2 電泳步驟 使用水平平板電泳儀和濃度為7 . 5 Y o 聚丙烯酞胺凝膠。 電極緩沖液采用E B T緩沖液 見附錄A( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄) 。步驟為: a )預(yù)電泳。恒溫 5 時(shí)， 將預(yù)先制備好的象丙烯酸胺凝膠放在冷卻板上， 在 5 0 mA電流下， 預(yù)電泳3 0 mi n , b ) 前電泳。預(yù)電泳后， 用微量加樣器在每個(gè)點(diǎn)樣孔內(nèi)加人 8 K L樣品， 在2 5 m A電流下， 前電泳1 0 m i n ， 再進(jìn)行正式電泳. c )正式電泳。在 2 7 5 V電壓下， 電泳時(shí)間為3 -5 h , d ) 染色。將電泳后的電泳膠板放人在恒溫箱3 7 保溫的染色液中染色， 至酶帶清晰顯示為止。染色液配方見附錄 B ( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄) 。62 染色體檢測(cè)6 . 2 - 1 標(biāo)本制備 采用腎組織細(xì)胞加植物血凝聚素( P H A) 短期培養(yǎng)法及空氣自然干燥法， 制片， 吉姆薩( G i e m s a ) 染色。吉姆薩染色液配方見附錄C ( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄) 。6 . 2 . 2 計(jì)數(shù) 在光鏡下， 選取染色體鋪散良好、 完整的中期分裂相計(jì)數(shù)染色體數(shù)目， 確定 2 n 數(shù)。6 . 2 . 3 形態(tài)分類 選擇 1 0 個(gè)以上的分裂相， 進(jìn)行顯微拍照， 按放大照片對(duì)染色體組型分析， 按形態(tài)歸類。6 . 3 結(jié)果判定 各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果， 對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)， 綜合分析判定， 是否符合標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)， 計(jì)算出符合標(biāo)準(zhǔn)的百分?jǐn)?shù)。s C 1 0 4 2 一 2 0 0 0 附錄A ( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄)E B T電極級(jí)沖液的配制A l 原液配制 三輕甲基氛基甲烷( T r i s ) 6 5 . 4 g 乙二胺四乙酸鈉鹽( N a , E D T A) 3 . 5 1 g 蒸餾水1 3 0 0 m L 另稱硼酸約2 7 g ， 用來調(diào)節(jié)p H值至8 . 6 ， 并稀釋至1 5 0 0 m L ,A 2 電極用液正極用液: 取原液 7 9 . 4 mL稀釋至 1 0 0 0 mL, 濃度為 。 . 0 2 8 6 m o l / L ,負(fù)極用液: 取原液 1 1 1 m L稀釋至 1 0 0 0 m L ， 濃度為0 . 0 4 m o l / L . 附錄B( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄)染 色 液 配 方B l 0 . 2 5 m o l / L T i r s - H C I 染色級(jí)沖液的配制 稱取T i r s 3 0 . 2 9 g ， 加燕餾水 9 0 0 m L ， 和鹽酸調(diào)節(jié)p H值至8 . 0 ， 再稀釋至1 0 0 0 m L ,B 2 染色液配方。 . 2 5 m o l 染色緩沖液氧化型輔酶I抓化硝基四氛哇蘭( N B T )吩喃甲醋硫酸鹽( P MS )9 5 %乙醇1 4 0 mL2 2 mg1 0 . 5 mL1 0 . 5 mg4 . 5 mL 附最C ( 標(biāo)準(zhǔn)的附錄)古姆薩( G i e m s a ) 染色液配制C l G i e m s a 染色母液的配制 稱取。 . 5 g G i e m s a 粉， 量取3 3 m L甘油， 在研缽中先用少I甘油與G i e m s a 粉混合， 研磨至無顆粒時(shí)再將剩余甘油加人， 在5 6 條件下保溫2 h ,-后， 加人3 3 m L申醇， 保存于棕色瓶?jī)?nèi)。C 2 0 . 2 m o l 確瞼級(jí)沖液配制C 2 . 1 A液 0 . 2 mo l / L磷酸氫二鈉( N a 2 H P O , ) 液液、 稱取磷酸氫二鈉( N a , H P O , H z 0 ) 3 6 . 6 1 g 定容于1 L蒸餾水中. 或稱取磷酸氫二鈉( N a z H P O , s c 1 0 4 2 一2 0 0 02 H 2 0) 7 1 . 6 4 g 定容于1 L蒸餾水中。C 2 . 2 B液 0 . 2 mo l / L磷酸二氫鈉( N a H 2 P O, ) 溶液 稱取磷酸二氫鈉( N a H , P O , H , 0 ) 2 7 . 6 g 定容于1 L蒸餾水中， 或稱取磷酸二氫鈉( N a H , P O