GB4789.2-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定.pdf

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.22010 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定 National food safety standard Food microbiological examination：Aerobic plate count 中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實(shí)施GB 4789.22010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T 4789.2-2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T 4789.2-2008相比，主要修改如下： 修改了標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱； 修改了菌落總數(shù)計(jì)算公式中的解釋； 修改了培養(yǎng)基和試劑； 刪除了第二法 菌落總數(shù)PetrifilmTM 測(cè)試片法。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： GB 4789.2-1984、GB 4789.2-1994、GB/T 4789.2-2003、GB/T 4789.2-2008。GB 4789.22010 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)（Aerobic plate count）的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測(cè)定。 2 術(shù)語和定義 2.1 菌落總數(shù) aerobic plate count 食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。 3 設(shè)備和材料 除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下： 3.1 恒溫培養(yǎng)箱：36 1 ，30 1 。 3.2 冰箱：2 5 。 3.3 恒溫水浴箱：46 1 。 3.4 天平：感量為 0.1 g。 3.5 均質(zhì)器。 3.6 振蕩器。 3.7 無菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。 3.8 無菌錐形瓶：容量 250 mL、500 mL。 3.9 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。 3.10 pH 計(jì)或 pH 比色管或精密 pH 試紙。 3.11 放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器。 4 培養(yǎng)基和試劑 4.1 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：見附錄 A 中 A.1。 4.2 磷酸鹽緩沖液：見附錄 A 中 A.2。 GB 4789.22010 2 4.3 無菌生理鹽水：見附錄 A 中 A.3。 5 檢驗(yàn)程序 菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。 圖 1 菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序 6 操作步驟 6.1 樣品的稀釋 6.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min10000 r/min 均質(zhì) 1 min2 min，或放入盛有 225 mL 稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。 6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 36 1 48 h2 h 檢 樣 25 g(mL)樣品+225 mL 稀釋液，均質(zhì) 10 倍系列稀釋 選擇 2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取 1 mL 分別加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi) 培 養(yǎng) 計(jì)數(shù)各平板菌落數(shù) 計(jì)算菌落總數(shù) 每皿中加入 15 mL20 mL 平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻 報(bào) 告 GB 4789.22010 3 6.1.3 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL，沿管壁緩慢注于盛有 9 mL 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。 6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次 1 mL 無菌吸管或吸頭。 6.1.5 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋時(shí)，吸取 1 mL 樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取 1 mL 空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。 6.1.6 及時(shí)將 15 mL20 mL 冷卻至 46 的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46 1 恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。 6.2 培養(yǎng) 6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 1 培養(yǎng) 48 h2 h。水產(chǎn)品 30 1 培養(yǎng) 72 h3 h。 6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約 4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按 6.2.1 條件進(jìn)行培養(yǎng)。 6.3 菌落計(jì)數(shù) 可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。 6.3.1 選取菌落數(shù)在 30 CFU300 CFU 之間、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于 30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 CFU 的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。 6.3.2 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。 6.3.3 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。 7 結(jié)果與報(bào)告 7.1 菌落總數(shù)的計(jì)算方法 7.1.1 若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每 g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。 7.1.2 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算： （1） 式中： N樣品中菌落數(shù)； C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； d稀釋因子（第一稀釋度） 。 dnnCN)1 . 0(21+=GB 4789.22010 4 示例： 稀釋度 1:100（第一稀釋度） 1:1000（第二稀釋度） 菌落數(shù)（CFU） 232，244 33，35 上述數(shù)據(jù)按7.2.2數(shù)字修約后，表示為25000或2.5104。 7.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.1.4 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.1.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長(zhǎng)，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU300 CFU之間， 其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU 時(shí)，則以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 7.2 菌落總數(shù)的報(bào)告 7.2.1 菌落數(shù)小于 100 CFU 時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。 7.2.2 菌落數(shù)大于或等于 100 CFU 時(shí)，第 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。 7.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。 7.2.4 若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無效。 7.2.5 稱重取樣以 CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告。 dnnCN)1 . 0(21+=24727022. 054410)21 . 0(235332442322=+=GB 4789.22010 5 附錄A （規(guī)范性附錄） 培養(yǎng)基和試劑 A.1 平板計(jì)數(shù)瓊脂（plate count agar，PCA）培養(yǎng)基 A.1.1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 瓊 脂 15.0 g 蒸餾水 1000 mL pH 7.00.2 A.1.2 制法 將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。分裝試管或錐形瓶，121 高壓滅菌15 min。 A.2 磷酸鹽緩沖液 A.2.1 成分 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 34.0 g 蒸餾水 500 mL pH 7.2 A.2.2 制法 貯存液： 稱取34.0 g的磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中， 用大約175