DB51T 725-2007 蜜柑大實蠅監(jiān)測與鑒定技術規(guī)程.docVIP

DB/T 四川省質量技術監(jiān)督局 發(fā)布2007-12-1實施2007-11-1發(fā)布蜜柑大實蠅監(jiān)測與鑒定技術規(guī)程Rule of Monitoring and Identification of Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis (Miyake)DB/T 7252007DB51四川省地方標準ICS 65.080.20B 161DB/T 7252007目 次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 術語14 原理15 儀器及用具16 試劑及溶液配制27 蟲情監(jiān)測28 室內檢驗鑒定29 結果判定310 樣品保存及處理3附錄A4附錄B6附錄C7附錄D8II前 言本標準附錄A和附錄B為規(guī)范性附錄，附錄C和附錄D為資料性附錄。本標準由四川省農業(yè)廳提出并歸口。本標準起草單位：四川省農業(yè)廳植物檢疫站。本標準主要起草人：蔣輝、郭迪金、李剛、曾亮華、余堅志、黃玲、曾大兵。蜜柑大實蠅監(jiān)測與鑒定技術規(guī)程Rule of Monitoring and Identification of Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis (Miyake)1 范圍本標準規(guī)定了蜜柑大實蠅的蟲情監(jiān)測、室內檢驗鑒定、結果判定、樣品處理及標本保存的技術要求。本標準適用于蜜柑大實蠅的監(jiān)測與鑒定。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB15569- 農業(yè)植物調運檢疫規(guī)程3 術語下列術語和定義適用于本標準。3.1圍蛹 coarctate pupa附肢和翅不貼附在身上，可以自由活動，同時腹部節(jié)間也能自由活動，且蛹體被幼蟲所脫的皮構成的蛹殼所包圍。3.2McPhail誘捕器 McPhail trap為玻璃或塑料的扁平型誘捕器，有口容器，其中可以放置引誘劑。誘捕器約140 mm高，瓶底最寬處為160 mm，底部孔口約45 mm，實蠅從瓶底部進入后難于逃逸。4 原理蜜柑大實蠅Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis (Miyake)，屬雙翅目（Diptera），實蠅科（Tephritidiae）、寡毛實蠅亞科（Dacinae）、離腹寡毛實蠅屬（Bantrocera）、大實蠅亞屬（Tetradacus），主要以幼蟲隨被害果實作遠距離傳播，其卵也可隨果實傳播，蛹則可隨果實的包裝物或寄主植物所附土壤傳播。蜜柑大實蠅的形態(tài)特征、傳播途徑及生物學特性及受害寄主果實癥狀，為制定監(jiān)測鑒定技術規(guī)程提供了依據(jù)。5 儀器及用具5.1 儀器體視顯微鏡、干燥箱、冰箱、溫濕度計。5.2 用具McPhail誘捕器、手持放大鏡、測微尺、量筒、燒杯、培養(yǎng)皿、小型干燥器、解剖刀、解剖針、載玻片、蓋玻片、標簽紙、玻璃棉、養(yǎng)蟲箱、40目防蟲網(wǎng)罩、白瓷盤。6 試劑及溶液配制除非另有說明，在檢驗中僅使用確認的分析純試劑和蒸餾水或去離子水或相當純度的水。6.1 苯酚（C6H6O）6.2 10 %氫氧化鈉（NaOH）或10 %氫氧化鉀（KOH）溶液 取10 g無水氫氧化鈉或無水氫氧化鉀溶于100 mL水中。6.3 封片膠 取阿拉伯樹膠粉30 g于燒杯中，加入50 mL溫水溶解后，再加入200 mL水合三氯乙醛（C2H3Cl3O2）及20 mL丙三醇（C3H8O3），置于55 60 的干燥箱內。24小時后，在55 60 的干燥箱內用玻璃棉過濾，貯存?zhèn)溆谩?.4 保存液 取無水乙醇（C2H6O）75 mL加入25 mL水，再加入1 mL丙三醇（C3H8O3）混勻備用。6.5 餌劑 水解蛋白90 %敵百蟲（C4H8Cl3O4P）500倍液，（2100）。7 蟲情監(jiān)測7.1 監(jiān)測范圍及重點監(jiān)測范圍包括各柑桔生產基地、果園、水果市場及其周圍種植有蜜柑大實蠅寄主植物的農田。重點是桔類和橙類，尤其是紅桔和蜜柑生產基地或果園。7.2 監(jiān)測方法7.2.1 田間監(jiān)測7.2.1.1 成蟲的監(jiān)測5月上旬9月下旬在柑桔果園中,每667 m2隨機懸掛3個McPhail誘捕器，誘捕器距地面1.5 m，將餌劑注入誘捕器的底部，每7 d加注一次，并收集誘集的成蟲，帶回室內檢驗鑒定。7.2.1.2 幼蟲和蛹的監(jiān)測9月上旬11月中旬，在柑桔果園中采集未熟先黃果和落地果，查看果皮上有無產卵孔、脫果孔，并檢查落地果周圍5 cm深的表土中有無幼蟲和蛹。將符合附錄C描述癥狀的果實和收集到的蟲體帶回室內檢驗鑒定。7.2.2 水果市場監(jiān)測7.2.2.1 成蟲的監(jiān)測5月上旬9月下旬在水果市場及其周圍農田和垃圾堆積場懸掛McPhail誘捕器，誘捕成蟲，誘捕方法同7.2.1.2。7.2.2.2 幼蟲和蛹的監(jiān)測按GB15569-農業(yè)植物調運檢疫規(guī)程5.2進行抽樣，用肉眼或手持放大鏡對樣品果實逐個進行檢查，查看果皮上有無產卵孔、脫果孔，發(fā)現(xiàn)符合附錄C描述癥狀的果實，帶回室內檢驗鑒定。8 室內檢驗鑒定8.1 蟲源培養(yǎng)8.1.1 卵或幼蟲的培養(yǎng)8.1.1.1 培養(yǎng)至老熟幼蟲將采集到的帶有卵或幼蟲的寄主果實放在小號白瓷盤里，然后將小號白瓷盤放在裝有自來水的大號白瓷盤內，再用防蟲網(wǎng)罩蓋住小號白瓷盤，罩的下方邊緣浸沒于大號白瓷盤內的水中，置于溫度為22 28 ，濕度為50 %90 %的環(huán)境中培養(yǎng)5 d10 d，卵或幼蟲發(fā)育至老熟幼蟲（三齡幼蟲）時彈跳入大號白瓷盤的水中。收集水中的老熟幼蟲浸于75 %乙醇溶液中，待鑒定。8.1.1.2 培養(yǎng)至成蟲在燒杯中加入半干濕潔凈細砂，將采集到的帶有卵或幼蟲的寄主果實置于細砂表面，再置于養(yǎng)蟲箱中，在溫度為22 28 ，濕度為50 %90 %條件下培養(yǎng)，待成蟲羽化后，懸掛相應寄主果實切片于養(yǎng)蟲箱內供其取食，待成蟲斑紋的色澤和大小穩(wěn)定后（約需5 d），收集成蟲并置于冰箱冷凍層0.5 h1 h，待鑒定。8.1.2 圍蛹的培養(yǎng)將收集的圍蛹埋入距細砂表面3 cm5 cm處，置于養(yǎng)蟲箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)方法同8.1.1.2。8.2 鑒定8.2.1 成蟲的鑒定8.2.1.1 干燥成蟲軟化處理取一小型干燥器，加入干凈細砂約2 cm，加水至漫過細砂表面約1 cm，并滴加數(shù)滴苯酚，上層放待還軟的成蟲標本，密閉1 d，待鑒定。8.2.1.2 外生殖器標本制作用解剖刀取成蟲標本腹節(jié)，置于預先配制好的10 %氫氧化鈉或10 %氫氧化鉀溶液的小燒杯中，浸泡12 h或煮沸3 min后取出，用蒸餾水洗凈，在體視顯微鏡下，用解剖針挑取陽莖或產卵器置于載玻片上展開，蓋上蓋玻片，待鑒定。需做保存的標本，在蓋蓋玻片前應滴上封片膠。8.2.1.3 鑒定將還軟的成蟲及制備的標本置于體視顯微鏡下，觀察其形態(tài)特征，按附錄A.1、附錄B.1和附錄D進行鑒定。8.2.2 幼蟲的鑒定將獲得的老熟幼蟲置于體視顯微鏡下，觀察其形態(tài)特征，按附錄A.2、附錄B.2和附錄D進行鑒定。9 結果判定成蟲符合附錄A.1形態(tài)特征，可判定為蜜柑大實蠅。老熟幼蟲符合附錄A.2形態(tài)特征，可判定為蜜柑大實蠅。10 樣品保存及處理10.1 標本保存10.1.1 成蟲標本及外生殖器玻片標本的保存將制好的成蟲標本或相應的外生殖器玻片標本，置于干燥箱中干燥數(shù)日，移入標本柜中保存。10.1.2 幼蟲、蛹標本的保存將采集到的幼蟲或蛹用水清洗后，投入60 （5 ）熱水中浸泡殺死，在室溫下冷卻后，置于保存液中保存。10.1.3 樣品處理樣品檢驗完成后，除用作標本保存的樣品外，其它樣品連同寄主果實及其培養(yǎng)介質進行滅活處理。（規(guī)范性附錄）蜜柑大實蠅的形態(tài)特征A.1 成蟲A.1.1 體型體大型，黃褐色。雌蟲體長（不包括產卵器）10.0 mm12.0 mm，翅長8.8 mm10.1 mm。雄蟲體長9.9 mm11.0 mm，翅長8.2 mm10.1 mm。A.1.2 體色主要為橙色至褐色。A.1.3 頭部頭部黃色或黃褐色，單眼三角區(qū)黑色，顏面斑棱形或長橢圓形，黑色；觸角黃褐色，觸角芒暗褐色，其基部近黃色。具1對上額眶鬃和2對下額眶鬃，內、外頂鬃各1對。A.1.4 胸部A.1.4.1 中胸背板中胸背板紅褐色，中央有“人”字形的褐色縱紋，肩胛和背側板胛以及中胸側板條均為黃色，中胸側板條寬，幾乎伸抵肩胛的后緣，縫后側黃色條始于中胸背板縫并終于翅內鬃之后，呈內弧形彎曲，具縫后中黃色條。A.1.4.2 小盾片小盾片黃色。A.1.5 翅翅膜質透明，前緣帶寬，與R4+5脈匯合，并在翅端R4+5脈的下方和M1+2脈之間略擴展；在R2+3脈與R4+5脈之間的暗褐色前緣帶上有一空白透明長形條，無臀條。A.1.6 足足近紅褐色，脛節(jié)色較深。A.1.7胸部的鬃序小盾鬃1對，無小盾前鬃。后翅上鬃及翅內鬃各1對，前翅上鬃兩對（有時1對，或有時一側2根而另一側僅具1根），中側板鬃缺，背側鬃2對，肩板鬃2對（內對常較外對弱小）。A.1.8 腹部腹部橢圓形，黃褐色至紅褐色，背面具一暗褐色到黑色中橫帶，自腹基部延伸到腹部末端或在末端之前終止；第三腹節(jié)背板前緣有一暗褐色到黑色橫帶，與上述中縱帶相交呈“十”字形；第一節(jié)呈長方形，第四和第五節(jié)背板兩側各有1對暗褐色到黑色短帶，第二至四節(jié)背板側緣均有黑色短條斑紋。雌蟲第六節(jié)背板陷于第五節(jié)的下方。第七至九節(jié)形成產卵器，第七節(jié)為基節(jié)，形如瓶狀，暗褐色；第八節(jié)為中節(jié)，具銼區(qū)；第九節(jié)為產卵管節(jié)，端呈三葉狀，長度在2.5 mm以下，具端前剛毛4對。產卵器基節(jié)長度約等于腹部第二至五節(jié)長度之和，其后端狹小部分短于腹部第五背板長。雄蟲第三腹節(jié)背板具櫛毛，第五腹板后緣向內凹陷的深度達此腹板長度的1/5。陽莖端暗褐色，其上透明的蘑菇狀物端半部密生透明小刺。A.2 幼蟲A.2.1 體型三齡幼蟲體長5.0 mm15.5 mm；二齡幼蟲體長3.4 mm8.0 mm；一齡幼蟲體長1.25 mm3.50 mm。A.2.2 口鉤三齡幼蟲口鉤發(fā)達，黑色，長0.21 mm0.38 mm。二齡幼蟲口鉤長0.16 mm0.17 mm。一齡幼蟲口鉤小形，長0.04 mm0.07 mm。A.2.3 氣門三齡幼蟲前氣門丁字形，外緣呈較平直，略彎曲，有指突33個35個。后氣門具氣門裂3個，氣門毛5叢。二齡幼蟲前氣門外緣中央深凹，有指突28個30個。后氣門具氣門裂3個，氣門毛5叢。一齡幼蟲前氣門尚未發(fā)現(xiàn)，后氣門甚小，由2片氣門裂組成，裂孔呈馬蹄形，氣門毛4叢。附錄B（規(guī)范性附錄）蜜柑大實蠅與柑桔大實蠅形態(tài)特征比較B.1 成蟲表B.1 成蟲形態(tài)特征比較蜜柑大實蠅Bactrocera (Tetradacus) tsuneonis柑桔大實蠅Bactrocera (Tetradacus) minax具前翅上鬃1對2對。無前翅上鬃。肩鬃通常2對，中對較粗、發(fā)達、黑色。肩鬃通常僅具側對，中對缺或極細微。產卵器基節(jié)長度約等于腹部第四與第五節(jié)長度之和；產卵管端呈三葉狀，長不足2.5 mm。產卵器基節(jié)長度約等于腹部第二至五節(jié)長度之和；產卵管端尖不呈三葉狀，長達3.5 mm以上。雄蟲腹部第五腹板后緣向內凹陷的深度達此腹板長度的五分之一。雄蟲腹部第五腹板后緣向內凹陷的深度達此腹板長度的三分之一。B.2 二、三齡幼蟲表B.2 二、三齡幼蟲形態(tài)特征比較蜜柑大實蠅柑桔大實蠅前氣門寬闊，呈“T”字形，外緣較平直，微曲；具指突33個35個。前氣門甚寬大，扇形，外緣中部凹入，兩側下彎；具指突30 多個。后氣門裂周圍具細毛群5叢。后氣門裂外側具細毛群4叢，排列成放射狀。附錄C（資料性附錄）蜜柑大實蠅為害癥狀描述D.1被害果實蜜柑大實蠅幼蟲孵化后，在柑桔果實瓤瓣中取食果汁果肉和種子。果實小時，易被幼蟲食空瓤瓣，全果外表發(fā)黃，易辨識；果實大時，僅局部變黃，輕時難辨。一般每果有幼蟲1頭2頭，極少數(shù)有數(shù)頭的。受害果實通常發(fā)育不正常，失去生長平衡，生理過程受到干擾，生長素減少，導致形成離層，易發(fā)生落果。D.2產卵孔產卵孔外觀為一黑色小點，周圍果皮細胞緊密光滑，呈乳狀突起，中央內陷，四周具木栓化灰白色小裂紋，手觸摸有頂手感。果實未熟先黃，橫剖產卵孔處，可見白皮層油浸狀，有明顯褐色暈圈，環(huán)紋整齊，其中心硬結可達果瓤，瓤瓣被蛀成干枯，有脫果孔或