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專題1 基因工程基因工程的概念基因工程是指通過 ,對生物的基因進行 ,然后導(dǎo)入 ,并使 在受體細胞中 ,產(chǎn)生人類所需的基因產(chǎn)物的技術(shù)?;蚬こ逃直环Q為 。(一)基因工程的基本工具 1.“分子手術(shù)刀” (1)來源:主要是從 中分離純化出來的。(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種 的核苷酸序列,并且使每一條鏈中 部位的兩個核苷酸之間的 斷開,因此具有 。(3)結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式: 和 。2.“分子縫合針” (1)兩種DNA連接酶(EcoliDNA連接酶和T4-DNA連接酶)的比較:相同點:都縫 鍵。區(qū)別:EcoliDNA連接酶來源于 ,只能將雙鏈DNA片段互補的 之間的磷酸二酯鍵連接起來;而T4DNA連接酶能縫合 ,但連接平末端的之間的效率 。(2)與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接 的末端,形成磷酸二酯鍵。3.“分子運輸車” (1)載體具備的條件: (2)最常用的載體是 ,它是一種 (3)其它載體: (二)基因工程的基本操作程序第一步: 1.目的基因是指: 。2方法1 ;2 ;3 .原核基因最好采取 獲得,真核基因最好利用 。3.PCR技術(shù)擴增目的基因(1)原理: (2)過程:第一步:加熱至9095 第二步:冷卻到5560, 第三步:加熱至7075, 第二步: 1.目的:使目的基因在受體細胞中 。2.組成: (1)啟動子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 ,是 識別和結(jié)合的部位,能啟動基因 ,最終獲得所需的 。(2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 ,位于基因的 。使 終止。(3)標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定受體細胞中 ,從而將 篩選出來。常用的標(biāo)記基因是 。第三步: 轉(zhuǎn)化的概念: 2.常用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛毎翰捎米疃嗟姆椒ㄊ?,其次還有 等。將目的基因?qū)雱游锛毎鹤畛S玫姆椒ㄊ?。此方法的受體細胞多是 。將目的基因?qū)胛⑸锛毎涸松镒鳛槭荏w細胞的原因是 ,最常用的原核細胞是 ,其轉(zhuǎn)化方法是:先用 處理細胞,使其成為 ,再將 溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合,在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。3.重組細胞導(dǎo)入受體細胞后,篩選含有基因表達載體受體細胞的依據(jù)是 。第四步: 1.首先要檢測 ,方法是采用 。2.其次還要檢測 ,方法是采用 。3.最后檢測 ,方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 ,用相應(yīng)的 進行 。4.有時還需進行 的鑒定。如 。(三)基因工程的應(yīng)用1.植物基因工程: 2.動物基因工程: 3.基因治療: (四)蛋白質(zhì)工程的概念1.概念蛋白質(zhì)工程是指以 作為基礎(chǔ),通過 ,對現(xiàn)有蛋白
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