項目4生化技術(shù)生產(chǎn)生物藥物.pptVIP

項目4：生化技術(shù)生產(chǎn)生物藥物,任務(wù)1：生化提取法生產(chǎn)木瓜蛋白酶,教學(xué)安排： 1. 員工培訓(xùn) 由老師講解肝素生產(chǎn)的理論基礎(chǔ)及應(yīng)用范圍。 分配實操任務(wù)：肝素的生產(chǎn)。,2. 學(xué)生模擬組建運營一個肝素生產(chǎn)企業(yè)，撰寫計劃書(在理論教學(xué)期間完成)。 市場部：肝素的結(jié)構(gòu)、功能、用途，肝素市場狀況與銷售預(yù)測，原料來源狀況，競爭對手狀況與分析。 技術(shù)部：確定肝素生產(chǎn)的工藝流程及工藝參數(shù)，編制生產(chǎn)操作規(guī)程，確定生產(chǎn)車間的布局。,品控部：制定肝素的質(zhì)量標準，生產(chǎn)取樣分析操作規(guī)程，質(zhì)量檢測標準和操作規(guī)程。 總經(jīng)理：協(xié)調(diào)監(jiān)督各部工作，最后拿出完整的計劃書。,3. 計劃書實施。 計劃書要先經(jīng)過老師的審核，然后實施。 實施過程中考核操作技能。 實施后及時進行實訓(xùn)報告的撰寫也總結(jié)。,第一節(jié)糖類藥物的類型及生物活性簡介,一 糖類藥物的類型 （1）單糖； （2）糖的衍生物； （3）低聚糖； （4）多聚糖。,二 糖類藥物的生理活性,（1）調(diào)節(jié)免疫功能； （2）抗感染作用； （3）促進細胞DNA、蛋白質(zhì)合成可促進細胞增殖和生長； （4）抗凝血作用； （6）降血脂、抗動脈粥樣硬化作用； （7）其他作用。,第二節(jié) 糖類藥物原料與制 備方法,一 動植物來源的糖類藥物的生產(chǎn) （一）單糖、低聚糖及其衍生物的制備 單糖及小分子寡糖溶于冷水及溫乙醇，可用水或中性50%乙醇提取。 一般流程：粉碎植物材料，醚脫脂，拌加碳酸鈣，50%乙醇溫浸，浸液于40-45減壓濃縮，用醋酸鉛去雜蛋白，再用HS去多余的醋酸鉛，再濃縮至稠狀，用乙醇溫浸，去不溶物，醇液經(jīng)活性炭脫色，濃縮冷卻，干燥得產(chǎn)品。,（二）多糖的分離純化,材料：（1）防止水解酶降解； （2）材料新鮮或及時干燥保存。 提取方法： （1）昆布多糖、果聚糖、糖原用水提； （2）殼多糖與纖維素用濃酸提； （3）酸性黏多糖常與蛋白質(zhì)結(jié)合，需先用蛋白酶或濃堿、濃中性鹽水解蛋白質(zhì)與糖的結(jié)合鍵。,1 多糖的提取 先行脫脂，以便多糖釋放，方法：材料粉碎后，以甲醇或乙醇乙醚（1：1）加熱攪拌溫浸13h。 （1）稀堿液提取 木聚糖、半乳聚糖等溶于稀堿的糖，先用水溶漲，再用0.5mol/LNaOH提，提取液用鹽酸中和，濃縮后，用乙醇沉淀。,（2）熱水提取 冷水浸泡溶漲，8090熱水提取，提取液除蛋白，離心，透析或離子交換除鹽后，用乙醇沉淀。 （3）黏多糖的提取 各種黏多糖可用乙醇分級沉淀純化。, 堿解； 酶解。 2 多糖的純化 （1）乙醇沉淀法； 多糖的濃度12%為佳，加入部分鹽，對乙醇沉淀有促進作用。沉淀經(jīng)乙醇脫水，真空干燥。,（2）分級沉淀法 二價金屬離子有促進作用。 （3）季銨鹽絡(luò)合法 能與十六烷基溴化銨和十六烷基氯化吡啶等表面活性劑在低鹽濃度下沉淀，在高鹽濃度下溶解。 鹽濃度決定于聚陰離子密度，與多糖的硫酸化程度有關(guān)。,低pH抑制陰離子，有利于增強硫酸黏多糖的選擇性沉淀。 （4）離子交換層析法 用陰離子交換樹脂交換吸附，吸附時以低鹽濃度，洗脫時逐步提高鹽濃度，可實現(xiàn)梯度洗脫。,第三節(jié) 重要糖類藥物的生 產(chǎn)工藝,一 甘露醇 靜脈注射后，可降低顱內(nèi)壓，使由腦水腫引起休克的病人清醒。也可用于大面積燒傷及燙傷產(chǎn)生的水腫，并有利尿作用，防止腎衰竭，治療急性青光眼，還用于中毒性肺炎、循環(huán)虛脫癥等。,（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 又名已六醇，為白色針狀結(jié)晶，不潮解，易溶于水和熱乙醇，不溶于有機溶劑，在無菌水中比較穩(wěn)定。 （二）生產(chǎn)工藝 海帶和海藻中含量高。也可用發(fā)酵法和葡萄糖電解法生產(chǎn)。,1 提取法 （1）工藝流程,（2）工藝過程及控制要點 浸泡提取、堿化、中和 加20倍量自來水，浸泡4批，每批23小時，然后用30%NaOH調(diào)pH1011，靜置8h，凝集沉淀多糖類黏性物，虹吸上清液，用50%中和至pH67，進一步除打，得中性提取液。 濃縮、沉淀 沸騰濃縮，除去膠狀物，至含甘露醇30%以上，冷卻至6070，加2倍量乙醇。,精制 沉淀物懸浮于8倍94%乙醇中，攪拌回流30min，出料，冷卻過夜，離心得粗品，含量7080%，重復(fù)操作一次，含量大于90%，氯化物含量小于0.5%，取此樣品重溶于適量水中，加入1/8-1/10活性炭，80保溫30min，濾清，結(jié)晶得精品甘露醇。,二 1,6二磷酸果糖 是急性心肌梗死、心功能不全、冠心病、心肌缺血、休克等癥的急救藥物。 生產(chǎn)工藝（酶轉(zhuǎn)化法） （1）工藝流程,（2）工藝過程及控制要點 取經(jīng)多代發(fā)酵應(yīng)用過的酵母渣，凍融，加入低物（8%蔗糖，4%NaH2PO4，30mmol/L MgCl2，pH=6.5)于30反應(yīng)6小時； 除雜蛋白 煮沸； 陰離子交換樹脂 上柱，用蒸餾水洗至pH7，分步洗脫，生成鈣鹽； 轉(zhuǎn)酸 鈣鹽懸浮于水中，用732樹脂轉(zhuǎn)酸，用2mol/LNaOH調(diào)pH5.35.8，除菌，凍干。,三 肝素 抗凝血藥，還有澄清血漿脂質(zhì)，降低血膽固醇和增強抗癌藥物等作用。 （一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 基本單位：三硫酸雙糖和二硫酸雙糖，以2：1交替聯(lián)結(jié)。,（二）生產(chǎn)工藝（鹽解離子交換工藝） （1）工藝流程,（2）工藝過程及控制要點 提取 反應(yīng)鍋內(nèi)，3%加NaCl，30%NaOH調(diào)pH9.0，5355保溫2h，升溫至95 ，維持10min，冷卻至50 以下，過濾； 吸附 加入氯型714樹脂，用量為提取液的2%，攪拌吸附8h，靜置過夜； 洗滌 樹脂用水洗至清，濾干，用2倍量1.4mol/LNaCl攪拌2h；,洗脫 用2倍量3mol/LNaCl攪拌洗脫8h，濾干，再用1倍量3mol/LNaCl攪拌洗脫2h ； 沉淀 等量95%乙醇過夜，收集沉淀，丙酮脫水； 精制 15倍量1%NaCl溶解，用6mol/LHCl調(diào)pH1.5，過濾至清