實驗三細菌的簡單染色和革蘭氏染色.ppt

實驗三 細菌的簡單染色和革蘭氏染色,一 細菌的簡單染色,（一）目的要求 （二）基本原理 （三）實驗材料 （四）無菌操作過程 （五）簡單染色操作步驟,（一）目的要求 學(xué)習(xí)制染色片技術(shù)，學(xué)習(xí)簡單染色的原理。 2 學(xué)習(xí)并掌握無菌操作的技術(shù)。 3 掌握簡單染色方法、。 4 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法。,（二） 基本原理,細菌細胞微小，且含水量較多，在普通光鏡下表現(xiàn)為無 色透明，不易觀察，所以必須進行染色處理，使細胞著 色，便于觀察。 簡單染色是使用單一染料染色，可用于觀察細菌形態(tài)、 大小、及排列方式。 染色前一般要將細胞固定，其目的是殺死菌體并使之粘 附于玻片上，還可以增強菌體的著色能力。固定有加熱 法和化學(xué)法兩種，無論采用何種方法均應(yīng)維持細胞原有 形態(tài)。,（三） 實驗材料,大腸桿菌（24 h 培養(yǎng)）斜面菌種 枯草桿菌（12h 培養(yǎng)）斜面菌種,（四）無菌操作過程,無菌操作：不讓除我們接種的微生物以外 其它微生物侵入，同時也不污染 環(huán)境的技術(shù)。,（五） 簡單染色操作步驟,1 涂片： 載玻片、無菌水、斜面菌種、無菌操作、均勻的薄層 2 干燥： 3 固定：加熱固定 4 染色： 結(jié)晶紫染1min，或石炭酸復(fù)紅染1min。 5 水洗： 6 干燥： 7 鏡檢： 低倍鏡觀察以確定目標和范圍，再換用油鏡觀察繪圖。,二 細菌的革蘭氏染色,（一）目的要求 （二）基本原理 （三）實驗材料 （四）操作步驟,（一） 目的要求,1 學(xué)習(xí)革蘭氏染色原理，理解著色機理。 2 掌握革蘭氏染色的方法，并能正確染色。 3 學(xué)習(xí)并掌握無菌操作技術(shù) 4 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法,（二） 基本原理,革蘭氏染色是用于細菌鑒別的一種重要染色方法。它是根據(jù)革蘭氏陽性細菌、陰性細菌細胞壁結(jié)構(gòu)、組成的不同而使用一系列的染色處理使之差別顯色。其染色方法是先將細菌分別用結(jié)晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脫色，再經(jīng)復(fù)染劑復(fù)染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細菌；被染成紫色的是革蘭氏陽性細菌。,1,2,3,4,？,革蘭氏染色原理： 第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色 第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，分子大，能被細胞壁 阻留在細胞內(nèi)。 第三步：酒精脫色，細胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)。 G+ 菌：細胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色 時，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物 被阻留在細胞內(nèi)，細胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。 G- 菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收 縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié) 晶紫-碘復(fù)合物溶出細胞壁，酒精將細胞脫色，細 胞無色，蕃紅復(fù)染后呈紅色。,（三）實驗材料,大腸桿菌（24h培養(yǎng)）斜面菌種 枯草桿菌（12h培養(yǎng)）斜面菌種,（四）操作步驟,1 涂片：方法同單染色，然后干燥、固定。 2 初染：滴加結(jié)晶紫染色1min，后用水沖洗。 3 媒染：滴加碘液染色1-2min，后用水沖洗，甩盡殘余水 4 脫色：用95%乙醇沖洗30秒（需要嚴格控制時間和濃度）， 然后立即用水沖洗。 5 復(fù)染：用石炭酸復(fù)紅覆蓋涂片進行復(fù)染，石炭酸復(fù)紅 染1min。水洗，晾干。 6 鏡檢：先用低倍鏡觀察，后用油鏡觀察。,1,2,3,4,三 實驗報告,1 寫出簡單染色、革蘭氏染色的實驗?zāi)康摹?2 寫出簡單染色、革蘭氏染色的基本原理。 3 根據(jù)實驗結(jié)果繪出簡單染色和革蘭氏染色的結(jié)果圖。,菌名： 放大倍數(shù)：,細菌簡單染色結(jié)果圖,細菌革蘭氏染色結(jié)果圖 要求： 標出菌名、顏色、陽性或