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實驗三 細菌的簡單染色和革蘭氏染色,一 細菌的簡單染色,(一)目的要求 (二)基本原理 (三)實驗材料 (四)無菌操作過程 (五)簡單染色操作步驟,(一)目的要求 學習制染色片技術,學習簡單染色的原理。 2 學習并掌握無菌操作的技術。 3 掌握簡單染色方法、。 4 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法。,(二) 基本原理,細菌細胞微小,且含水量較多,在普通光鏡下表現(xiàn)為無 色透明,不易觀察,所以必須進行染色處理,使細胞著 色,便于觀察。 簡單染色是使用單一染料染色,可用于觀察細菌形態(tài)、 大小、及排列方式。 染色前一般要將細胞固定,其目的是殺死菌體并使之粘 附于玻片上,還可以增強菌體的著色能力。固定有加熱 法和化學法兩種,無論采用何種方法均應維持細胞原有 形態(tài)。,(三) 實驗材料,大腸桿菌(24 h 培養(yǎng))斜面菌種 枯草桿菌(12h 培養(yǎng))斜面菌種,(四)無菌操作過程,無菌操作:不讓除我們接種的微生物以外 其它微生物侵入,同時也不污染 環(huán)境的技術。,(五) 簡單染色操作步驟,1 涂片: 載玻片、無菌水、斜面菌種、無菌操作、均勻的薄層 2 干燥: 3 固定:加熱固定 4 染色: 結晶紫染1min,或石炭酸復紅染1min。 5 水洗: 6 干燥: 7 鏡檢: 低倍鏡觀察以確定目標和范圍,再換用油鏡觀察繪圖。,二 細菌的革蘭氏染色,(一)目的要求 (二)基本原理 (三)實驗材料 (四)操作步驟,(一) 目的要求,1 學習革蘭氏染色原理,理解著色機理。 2 掌握革蘭氏染色的方法,并能正確染色。 3 學習并掌握無菌操作技術 4 鞏固顯微鏡油鏡的使用方法,(二) 基本原理,革蘭氏染色是用于細菌鑒別的一種重要染色方法。它是根據(jù)革蘭氏陽性細菌、陰性細菌細胞壁結構、組成的不同而使用一系列的染色處理使之差別顯色。其染色方法是先將細菌分別用結晶紫和碘液初染媒染后,乙醇脫色,再經(jīng)復染劑復染。最終被染成紅色的是革蘭氏陰性細菌;被染成紫色的是革蘭氏陽性細菌。,1,2,3,4,?,革蘭氏染色原理: 第一步:結晶紫使菌體著上紫色 第二步:碘和結晶紫形成大分子復合物,分子大,能被細胞壁 阻留在細胞內。 第三步:酒精脫色,細胞壁成分和構造不同,出現(xiàn)不同的反應。 G+ 菌:細胞壁厚,肽聚糖含量高,交聯(lián)度大,當乙醇脫色 時,肽聚糖因脫水而孔徑縮小,故結晶紫-碘復合物 被阻留在細胞內,細胞不能被酒精脫色,仍呈紫色。 G- 菌:肽聚糖層薄,交聯(lián)松散,乙醇脫色不能使其結構收 縮,因其含脂量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結 晶紫-碘復合物溶出細胞壁,酒精將細胞脫色,細 胞無色,蕃紅復染后呈紅色。,(三)實驗材料,大腸桿菌(24h培養(yǎng))斜面菌種 枯草桿菌(12h培養(yǎng))斜面菌種,(四)操作步驟,1 涂片:方法同單染色,然后干燥、固定。 2 初染:滴加結晶紫染色1min,后用水沖洗。 3 媒染:滴加碘液染色1-2min,后用水沖洗,甩盡殘余水 4 脫色:用95%乙醇沖洗30秒(需要嚴格控制時間和濃度), 然后立即用水沖洗。 5 復染:用石炭酸復紅覆蓋涂片進行復染,石炭酸復紅 染1min。水洗,晾干。 6 鏡檢:先用低倍鏡觀察,后用油鏡觀察。,1,2,3,4,三 實驗報告,1 寫出簡單染色、革蘭氏染色的實驗目的。 2 寫出簡單染色、革蘭氏染色的基本原理。 3 根據(jù)實驗結果繪出簡單染色和革蘭氏染色的結果圖。,菌名: 放大倍數(shù):,細菌簡單染色結果圖,細菌革蘭氏染色結果圖 要求: 標出菌名、顏色、陽性或
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