華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科課程考試試卷

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科課程考試試卷 考試課程與試卷類型：基因操作原理 姓名：學(xué)年學(xué)期：2003-2004-2 學(xué)號： 考試時間：2004-05-28 班級： 一、填空題（每小題2分，共24分）1. 限制性內(nèi)切酶的命名主要根據(jù)_來確定，以下各種書寫方式中哪種或哪幾種是正確_。 A: SalI; B: SmaI; C: HindIII; D: HindIII; E: Tth111I; F: Bsp1286I; G: NotI2. RNA polymerase 可識別啟動子并啟動基因的轉(zhuǎn)錄從而合成mRNA，_和_方法可用來檢測mRNA合成的起始位置。3. 在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的，它們可在DNA的特定位點(diǎn)作甲基化修飾，而許多限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)對甲基化是敏感的，如ClaI (AT/CGAT)。請問ClaI能切割以下哪個或哪些來自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列_。 （A） ATCGATA; （B） ATCGATG; （C） ATCGATC; （D） ATCGATT.4. 從高溫嗜熱細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)高溫DNA polymerase后，使得PCR技術(shù)得以廣泛應(yīng)用，在高溫下有活性的DNA polymerase有_、_、_、_。其中具有3-5外切活性的高溫DNA polymerase有_和_。5. DNase I 切割DNA的方式受條件的影響, 在Mn+存在下_ _，在Mg+存在下_。6. 限制性內(nèi)切酶有其特定的識別位點(diǎn)，如EcoRI 的識別位點(diǎn)為 _；_限制性內(nèi)切酶 與 _限制性內(nèi)切酶切割DNA形成的末端相同。7. Lambda phage 的基因組在噬菌體顆粒中是_，在感染宿主細(xì)胞后主要以_形式存在。 8. Sequenase 是用于_的工具，與_最相似，但不同之處在于_ 。9. 在基因操作過程中有許多對人體有害的物質(zhì), 應(yīng)小心使用, 常用的有害物質(zhì)有 : _, _, _, _。10. Splicing by overlap extension 是一種_ 工作方式，可用于對兩個DNA片段作_連接。11. Competent cells 是一種處于_狀態(tài)的細(xì)胞, electroporation 是指一種將_（物質(zhì)）通過_方式_遺傳轉(zhuǎn)移方法。12. 用于基因克隆的載體種類繁多，從克隆片段的大小來看，可分為常規(guī)克隆載體和大容量克隆載體。常見的大容量克隆載體有_，_，_，_。二、名詞解釋（每小題3分，共24分）1Klenow fragment2. BAC vector3. CIP4. IPTG/X-gal5. M13KO76. Site preference7. Nick translation8. Plateau effect ( in PCR)三、分析簡答題（每小題5分，共25分）1當(dāng)利用質(zhì)粒載體從基因組中克隆得到含有目標(biāo)基因的DNA片段后，通過限制性內(nèi)切酶切割該重組DNA可制作該目標(biāo)DNA片段的物理圖譜。例如，選用3種內(nèi)切酶切割重組pBlue-A，通過agarose電泳分析，得到如下大小的DNA片段。請標(biāo)出酶切位點(diǎn)A的相對位置。EcoRI：10kb HindIII：10kbA酶：4kb, 3.5kb, 2.5kbHindIII和EcoRI ：4kb, 6kbA酶和EcoRI：3.5kb, 2.5kb, 2.5kb, 1.5kbA酶和HindIII：4kb, 2.5kb, 1.0kb, 2.5kbpBlue-A10000 bps200040006000800010000/0EcoRI30005000700090001000HindIII2右圖是一個常用克隆載體的遺傳圖譜。請問該載體有何主要特點(diǎn)，利用該特點(diǎn)可作何用途，舉出一種構(gòu)建該特點(diǎn)的方法。3 許多限制性內(nèi)切酶切割DNA后可產(chǎn)生相同的突出末端，這些產(chǎn)物彼此之間可進(jìn)行粘端連接。但在連接產(chǎn)物中相應(yīng)位置的酶切位點(diǎn)就不存在了。例如某DNA片段用ClaI (AT/CGAT)酶切后，可與AccI (GT/CGAC)切割的載體連接，但在連接點(diǎn)處的ClaI和AccI位點(diǎn)都消失了，相應(yīng)的序列變成了ATCGAC。右圖最上面的序列為ClaI/ AccI連接處的DNA序列。通過右邊步驟可在連接點(diǎn)處恢復(fù)ClaI位點(diǎn)，請指出每一步所用的關(guān)鍵酶和底物。SphI位點(diǎn)：GCATG/CRecovering ClaI-ATCGA CAAGCTT-TAGCTGGCC AA-ATCGA TT-TAGCT AA-ATCGATT-TAGCTAA-ATCGACCGGCATGCAAGCTT-TAGCTGGCCGTACGTTCGAA-ATCGACCGGCATG CAAGCTT-TAGCTGGCC GTACGTTCGAA-( )( )( , )( )4右圖是一個典型的E.coli表達(dá)載體，利用T7噬菌體的啟動子可達(dá)到高效表達(dá)的目的。在利用T7噬菌體的啟動子表達(dá)時，一般對宿主菌有一定要求，通常使用BL21(DE3)菌株。請問該載體利用T7噬菌體的啟動子高效表達(dá)外源基因的工作原理。5. 下圖是通過Kunkel法進(jìn)行DNA定點(diǎn)誘變的流程示意圖。請結(jié)合流程步驟，簡述其工作原理。四、問答題 （每小題9分，共27分）1. 截至2004年5月17日，有9種真核生物、144種細(xì)菌和18中古細(xì)菌完成了基因組測序工作。在某一植物基因組測序過程中，通過生物信息分析發(fā)現(xiàn)一個全新的ORF，試問如何檢測該植物是否表達(dá)出相應(yīng)ORF的蛋白質(zhì)產(chǎn)物？如果存在該蛋白產(chǎn)物的話，請問如何找到與之發(fā)生相互作用并結(jié)合的其他蛋白質(zhì)的編碼基因。2. 通過生物化學(xué)的的方法從某植物中分離到一個蛋白質(zhì)活性因子，若要在E.coli中大量表達(dá)該蛋白質(zhì)，試問如何分離得到該基因。3. 禽流感(AI) 是正粘病毒科流感病毒屬A 型流感病毒(AIV)引起的禽類的烈性傳染病。禽流感病毒中能引起AI 暴發(fā)流行的高致病力AIV 毒株僅有H5和H7兩個血清型。其基因組由8 條單鏈(-)RNA 組成, 編碼10 種蛋白(PA、PB1、PB2、HA、NA、N P、M1、M2、NS1、NS2)。目前已經(jīng)測定了許多不同來原AIV的蛋白基因，其核苷酸序列在GenBank上注冊。從廣東分離到一株名為GD1/96(H5N1)的AIV，提取病毒基因組總RNA ,運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR) 技術(shù)分