循環(huán)腫瘤標(biāo)志物(CTC)檢測(cè)技術(shù)在肺部小結(jié)節(jié)診斷中的最新進(jìn)展1.ppt

循環(huán)腫瘤標(biāo)志物（CTC）檢測(cè)技術(shù)在肺部小結(jié)節(jié)診斷中的最新進(jìn)展,格諾生物 劉雙,Lung Cancer in Solid Tumor in China,LDCT篩查降低肺癌死亡率,NLST research team. NEJM, 2011,胸部CT篩查與過度診療的悖論,大部分非實(shí)性成分的結(jié)節(jié)為良性疾病,26.2% 自行消失,僅3% 確診為肺癌,將所有肺部結(jié)節(jié)計(jì)算在內(nèi)，假陽性率為21.8%-26.6%左右,Pinsky FR, et al. Ann Intern Med, 2015,比較了兩個(gè)大型臨床研究的假陽性率 NEJM發(fā)表的NLST研究中假陽性率第一次篩查為26.6%，第二次篩查為21.8%,如何解決？,第1-3次胸部CT篩查相比，第4次行胸部CT時(shí) I期肺癌的比例下降20%,如何解決？,PET-CT對(duì)于肺部良性結(jié)節(jié)，假陽性率約45%,Veronesi G, et al. Ann Int Med 2012,如何解決？,創(chuàng)傷性檢查 不良反應(yīng)大 部分患者無法耐受,肺癌病理活檢局限性,成本高,術(shù)后并發(fā)癥 對(duì)于部分年老或合并基礎(chǔ)疾病的患者,如何解決: 能否有更敏感的腫瘤標(biāo)志物來幫助診斷,液態(tài)活檢在肺癌中的應(yīng)用,治療策略,事件,疑似肺癌,輔助診斷,早癌肺癌,晚期肺癌,癌癥耐藥,復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè),治療方案選擇,耐藥機(jī)理 新藥研發(fā),CTC的臨床應(yīng)用價(jià)值,療效評(píng)估,CTC(數(shù)量） (負(fù)向富集+靶向PCR）,ctDNA (基因變異）,1、K. Pantel, et al. Nat Rev Clin Oncol, 2009;2、K. Pantel and MR. Speicher, Oncogene 2015,什么是循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cell，CTC）？,腫瘤釋放如外周血中CTCs數(shù)量的多少，可間接反應(yīng)腫瘤發(fā)生發(fā)展的功能狀態(tài),CTC：在腫瘤發(fā)生過程中，具有干細(xì)胞特征的腫瘤細(xì)胞和不具有干細(xì)胞特征的腫瘤細(xì)胞，均由原發(fā)腫瘤脫落釋放入外周血，兩者統(tǒng)稱循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cell）CTC1,CTC有轉(zhuǎn)移：侵入第二器官CTCs，稱之為DTC（disseminated Tumor Cell），只有由具有干細(xì)胞特征的DTC所形成的微轉(zhuǎn)移灶，逃避免疫識(shí)別才可能發(fā)展成為腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移2,CK+ cells,HER-2+ cells,第9周的乳腺管組織切片：乳腺管周圍非典型性增生,第30周的腫瘤組織切片：新生的腫瘤上皮細(xì)胞形成牙槽并侵襲周圍基質(zhì),什么時(shí)候可以檢測(cè)到CTC？,早期腫瘤外周血中即可檢出CTC,W He, et al. Proc Natl Acad Sci, 2007,早期腫瘤外周血中即可檢出CTC,表達(dá)中等量FR的M109鼠肺癌細(xì)胞通過皮下注射的方式被移植到BALB/c小鼠的背部側(cè)面 移植2周后，在小鼠耳部的血管中每分鐘可以檢測(cè)到大約1.4個(gè)CTC細(xì)胞 移植后第3和第4周，則每分鐘可分別檢測(cè)7個(gè)和18個(gè)CTC，隨著腫瘤逐漸增大數(shù)量呈指數(shù)上升 在腫瘤移植的前4周內(nèi)，沒有在任何組織切片中發(fā)現(xiàn)到存在轉(zhuǎn)移性癌癥的跡象,CTC富集技術(shù) 密度與大小 免疫磁珠（負(fù)向富集 or 陽性富集) 微流體,CTC 檢測(cè)方法,CTC檢測(cè)技術(shù) 靶向PCR 免疫熒光 普通PCR,=,+,“方法”,“收獲”,“垃圾”,蟹餌,沒水了， 我們躲不了了,放 水,負(fù)向富集,優(yōu)勢(shì)：回收率100% 劣勢(shì)：純度略低,幸好沒貪嘴， 我們逃了,“方法”,“收獲”,“垃圾”,沒水了， 我們躲不了了,放 水,負(fù)向富集,優(yōu)勢(shì)：回收率100% 劣勢(shì)：純度略低,幸好沒吃胖， 我們逃了,網(wǎng) 篩,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù),負(fù)向富集,靶向PCR,FR陽性靶標(biāo),肺癌細(xì)胞FR(葉酸受體）高度表達(dá) CTC：FR=1:50萬 EMT轉(zhuǎn)化不影響FR豐度 其他血細(xì)胞不表達(dá)FR,CTC回收率接近100% 磁珠富集易操作和自動(dòng)化,靈敏度超高，負(fù)向富集即可檢測(cè) 信號(hào)二次放大，1: 1012倍放大 無需人工經(jīng)驗(yàn)判讀，結(jié)果客觀準(zhǔn)確 可實(shí)現(xiàn)CTC的定量,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè),格諾CytoploRare 靈敏度最高的檢測(cè)技術(shù),特異性DNA PCR擴(kuò)增-提高敏感性 FR靶向：高特異性探針 1 CTC in 6,000,000（可在600萬個(gè)背景細(xì)胞中檢測(cè)出一個(gè)CTC）,CytoploRare,敏感性 特異性 可重復(fù)性 臨床應(yīng)用便捷性,CytoploRare,敏感性 特異性 可重復(fù)性 臨床應(yīng)用便捷性,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè) 靶向PCR，信號(hào)放大，保證高度敏感性,1個(gè)CTC信號(hào)放大1012倍,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè) 敏感性試驗(yàn)：1ctc in 1,200,000白細(xì)胞,Jiatao Lou, et al. Plos One 2013,將不同數(shù)量的FR陽性腫瘤細(xì)胞分別摻入3ml全血(1.2-3.0X107） FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù)的回收率接近100%，且呈線性分布 檢測(cè)靈敏度約為5.09/（1.23*107）=1/240萬600萬,將不同數(shù)量的FR陽性腫瘤細(xì)胞分別摻入3ml全血(1.2-3.0X107） 檢測(cè)靈敏度約為5.09/（1.23*107）=1/240萬600萬,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè) 敏感性試驗(yàn)：1ctc in 6,000,000白細(xì)胞,CytoploRare,敏感性 特異性 可重復(fù)性 臨床應(yīng)用便捷性,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù) FR（葉酸受體，高度特異性的靶向探針）,特異性高：加入FR靶向探針前，加入高濃度葉酸封閉細(xì)胞表面的葉酸受體，檢測(cè)結(jié)果為陰性,背景表達(dá)：去除FR靶向探針，僅保留特異性DNA片段，與保留FR靶向探針相比，檢測(cè)結(jié)果一致，提示背景可能為特異性DNA片段所致的固定值,Jiatao Lou, et al. Plos One 2013,2004,Cell Search: 乳腺癌中檢測(cè)出，但肺癌敏感性低,2011,Cell Research: 采用的抗體(EpCAM)對(duì)EMT細(xì)胞特異性差，而肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移入血需要EMT的過程,EpCAM陰性細(xì)胞中，存在大量CTC,Cell Research系統(tǒng)主要使用EpCAM（上皮粘附分子）做為探針 研究證實(shí)，EpCAM陰性的細(xì)胞中也存在CTC,Jiatao Lou, et al. Plos One 2013,有報(bào)道，部分激活的巨噬細(xì)胞存在FR的高表達(dá)1 臨床前研究證實(shí)，這部分巨噬細(xì)胞很少在正常人的外周血中出現(xiàn)2 使用抗CD14免疫磁珠去除巨噬細(xì)胞后，CTC的檢測(cè)結(jié)果無明顯改變3,1、He W, et al. Int J Cancer 2008; 2、He W, et al. Proc Natl Acad Sci, 2007; 3、Jiatao Lou, et al. Plos One 2013,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù) 巨噬細(xì)胞（可能存在FR表達(dá)）不影響檢測(cè)結(jié)果,CytoploRare,敏感性 特異性 可重復(fù)性 臨床應(yīng)用便捷性,CytoploRare FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù) 同一患者重復(fù)檢測(cè)，可重復(fù)性高,CytoploRare,敏感性 特異性 可重復(fù)性 臨床應(yīng)用便捷性,3mL血6個(gè)小時(shí)得到報(bào)告,檢測(cè)流程,肺癌領(lǐng)域，CTC檢測(cè)技術(shù)對(duì)比,1210例受試者,肺癌 560例,肺部良性疾病 350例,其他腫瘤 (150例) 肝癌 30例 結(jié)直腸癌 30例 乳腺癌 30例 胃癌 30例 食管癌 30例,331例A 100例B 50例C（21例D) 79例D,A: 基線CTC檢測(cè) B：術(shù)前術(shù)后CTC監(jiān)測(cè) C：一線含鉑雙藥化療中CTC監(jiān)測(cè) D：基線CTC、CEA、CYFRA21-1、SCC、NSE檢測(cè),300例A 50例D,健康人 150例,100例A 50例D,150例A,非動(dòng)態(tài)研究 肺癌 560例A 肺部良性疾病 350例A 健康人 150例A,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)研究 非小細(xì)胞肺癌 100例B 50例C,對(duì)比研究 肺癌 100例D 肺部良性疾病 50例D 健康人 50例D,腫瘤特異性研究 其他腫瘤 150例A,FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù) 臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)（1210例, 全國肺癌CTC研究最大樣本量）,Jiatao Lou, et al. Plos One 2013; Yue Yu, et al. Transl Oncol 2012; Xiaoxia Chen, et al. JTO 2015,參加單位： 上海市肺科醫(yī)院 上海市胸科醫(yī)院 醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院,42,患者特征,Jiatao Lou, et al. Plos One 2013; Yue Yu, et al. Transl Oncol 2012; Xiaoxia Chen, et al. JTO 2015,FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù) 葉酸受體陽性CTC作為肺癌診斷的標(biāo)志物,43,最大樣本量CTC檢測(cè)數(shù)據(jù) Cutoff： 8.70 CTC Units/3mL 敏感性：79.6% 特異性：88.2%,Jiatao Lou, et al. Plos One 2013; Yue Yu, et al. Transl Oncol 2013; Xiaoxia Chen, et al. JTO 2015,AUC: 0.8797,FR靶向PCR CTC檢測(cè)技術(shù) 敏感性高 I期肺癌敏感性67.2%,NSCLC患者與對(duì)照組的CTC、NSE、CEA、CA125、Cyfra21-1、SCC-AgROC曲線分析,不同標(biāo)志物在NSCLC和I期NSCLC患者中的靈敏度,不同標(biāo)志物在對(duì)照組的特異度,FR-CTC、NSE、CEA、CA125、Cyfra21-1、SCC-Ag對(duì)NSCLC和早期NSCLC患者的診斷效率,Yue Yu, et al. Transl Oncol 2013,1cm肺癌總體敏感性: 62.5%,CTC聯(lián)合CT可以大大提高小結(jié)節(jié)診斷的特異性 CTC輔助CT可以將小結(jié)節(jié)的判別假陽性率降低到10%,Lou JT, Wang L, et al In submission,上海市胸科醫(yī)院：病例一,VATS右肺上葉切除術(shù)：右肺上葉細(xì)支氣管肺泡癌（非粘液性），T1aN0M0， 直徑0.8cm,VATS右肺上、中葉切除+系統(tǒng)性淋巴結(jié)清掃： 術(shù)后病理確診：右上葉腺癌（非粘液性）、細(xì)支氣管肺泡癌及肺泡樣混合亞型，高分化， T1aN0M0 腫瘤大?。?.5*0.7*0.4cm,上海市胸科醫(yī)院：病例二,FR靶向PCR-CTC檢測(cè)顯著優(yōu)于一般腫瘤標(biāo)志物：可幫助肺部小結(jié)節(jié)鑒別診斷,總結(jié),LDCT篩查可降低肺癌死亡率，但也導(dǎo)致部分過度診療問題，手術(shù) or 隨訪