食品科學(xué)與工程專業(yè)畢業(yè)論文43942.doc

摘要本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）題目： 酶促棕櫚油醇解過(guò)程研究 酶促棕櫚油醇解過(guò)程研究摘要1,3-位置選擇性脂肪酶在 1,3-甘油二酯（dag）制備和油脂改性中發(fā)揮著重要作用。在脂肪酶催化油脂的醇解反應(yīng)過(guò)程中，往往存在著?；D(zhuǎn)移反應(yīng)。研究用特異性脂肪酶作為催化劑的反應(yīng)過(guò)程中的?；D(zhuǎn)移變化規(guī)律對(duì)于生產(chǎn)目標(biāo)產(chǎn)物及1,3-位置選擇性脂肪酶的應(yīng)用都具有重要意義。本文以1,3-位專一性酶lipozyme rm im催化甲醇和棕櫚油的醇解體系為研究對(duì)象，研究底物比、反應(yīng)溫度和反應(yīng)用酶量對(duì)醇解體系過(guò)程中產(chǎn)生的?；D(zhuǎn)移的現(xiàn)象進(jìn)行探究。以期了解1,3-位專一性脂肪酶催化甘三酯醇解酯交換反應(yīng)過(guò)程中的?；D(zhuǎn)移，為1,3-位專一性脂肪酶在酶促醇解反應(yīng)中的實(shí)際應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。棕櫚油與甲醇的醇解過(guò)程中?；D(zhuǎn)移的情況，包括1,2-甘二酯?；D(zhuǎn)移后形成1,3-甘二酯和2-單甘酯酰基轉(zhuǎn)移后形成1（3）-單甘酯。結(jié)果表明：當(dāng)甲醇與棕櫚油摩爾比小于3:1時(shí)，?；D(zhuǎn)移量隨著反應(yīng)時(shí)間的增加而增加；當(dāng)反應(yīng)溫度在50-60之間，?；D(zhuǎn)移量會(huì)隨著溫度和時(shí)間的增加而增加；當(dāng)酶量從4%增加到8%，?；D(zhuǎn)移量隨著時(shí)間的增加而增加。關(guān)鍵詞：?；D(zhuǎn)移；醇解；脂肪酶abstract acyl migration has been researched by 1,3-positional specificity lipase（lipozyme rm im）catalyzed palm oil with methanol in solvent free system，including acyl migration of 1,2-diglyceride（1,2-dg）to 1,3-diglyceride（1,3-dg）and 2-monoglyceride（2-mg）to 1-monoglyceride （1（3）-mg）.discusses the effects of substrate molar ratio，reaction temperature and lipase loading on the acyl migration.the results show that methanol/oil molar ratio was not higher than 3:1, acyl migration increased with ration time. the temperature in the rang of 50 to 60 ,acyl migration increased greated along with increasing of temperature and ration time.when lipase loading increased from 4% to 8%, acyl migration increased greated along with increasing of temperature.key：lipozyme rm im；methanolysis；acyl migration目錄第1章 緒論11.1 脂肪酶的存在11.2脂肪酶的選擇性11.2.1脂質(zhì)類型或底物的選擇性11.2.2區(qū)域或位置選擇性21.2.3脂肪酸和酰基供體的選擇性21.2.4立體選擇性21.2.5非選擇性21.3 脂肪酶在生物技術(shù)方面的應(yīng)用21.3.1酯的水解21.3.2甘油解31.3.3酯化反應(yīng)31.3.4醇解/酸解反應(yīng)31.3.5酯交換反應(yīng)31.4 不同因素對(duì)醇解產(chǎn)物的影響31.4.1底物摩爾比的影響31.4.2 溫度的影響41.4.3 酶量的影響41.5 本論文研究目的及研究?jī)?nèi)容41.5.1 研究目的41.5.2 研究?jī)?nèi)容5第2章 材料與方法52.1 實(shí)驗(yàn)材料52.1.1 材料與試劑52.1.2儀器設(shè)備62.2 實(shí)驗(yàn)方法62.2.1棕櫚油的脂肪酸組成分析62.2.2 醇解反應(yīng)62.2.3高效液相分析反應(yīng)產(chǎn)物72.2.4各因素對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的影響72.2.4.1底物摩爾比對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響72.2.4.2溫度對(duì)酰基轉(zhuǎn)移的影響72.2.4.3酶量對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響7第3章 結(jié)果與討論83.1棕櫚油的脂肪酸組成83.2醇解反應(yīng)的產(chǎn)物83.3 不同因素對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響93.3.1底物對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響93.3.2溫度對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響103.3.3酶量度?；D(zhuǎn)移的影響11第4章 結(jié)論與展望134.1 主要結(jié)論134.2 問(wèn)題與展望14參考文獻(xiàn).14致謝17酶促棕櫚油醇解過(guò)程研究第1章 緒論.1.1 脂肪酶的存在脂肪酶(lipase e.c. 3.1.1.3)又稱三?；视王ニ饷?triacylglycerol esterhydrolases)，廣泛的存在于動(dòng)植物和微生物中。脂肪酶的天然底物是甘油酯類，然而研究表明，脂肪酶除了能夠催化甘油酯類化合物的水解和合成之外，還可以用于催化酯交換反應(yīng)、生物表面活性劑的合成、多肽合成、聚合物的合成和藥物的合成等，尤其是利用某些脂肪酶的立體專一性，催化旋光異構(gòu)體的拆分1和手性藥物的合成2成為酶工程領(lǐng)域研究的新熱點(diǎn)。因而脂肪酶及其改性制劑在食品與營(yíng)養(yǎng)、日用化學(xué)工業(yè)、油脂化學(xué)品工業(yè)、農(nóng)業(yè)化學(xué)工業(yè)、造紙工業(yè)、洗滌和生物表面活性劑的合成、以及藥物合成等許多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。1.2脂肪酶的選擇性與化學(xué)催化相比，酶催化反應(yīng)的一個(gè)顯著優(yōu)勢(shì)就是其內(nèi)在的選擇性。這種選擇性（selectivity）指的是酶催化一組底物中的某些成員發(fā)生反應(yīng)的優(yōu)先性，客觀上表現(xiàn)為不同競(jìng)爭(zhēng)性底物反應(yīng)速度的差異3。也有人將此性質(zhì)稱為專一性(specificity)，我們認(rèn)為，選擇性應(yīng)該是更為確切的表達(dá)，因?yàn)闆](méi)有絕對(duì)專一性的酶。脂肪酶的選擇性可分為五類：脂質(zhì)類型或底物的選擇性、區(qū)域或位置選擇性、脂肪酸或?；w的選擇性、立體選擇性和非選擇性。1.2.1脂質(zhì)類型或底物的選擇性該選擇性指的是酶催化某一類型的脂質(zhì)（甘一酯 mg、甘二酯 dg、甘三酯tg、磷脂、脂肪酸甲酯等）的能力。雖然大多數(shù)脂肪酶都對(duì)催化甘三酯水解具有較高的活性，但是有些脂肪酶則對(duì)一些不完整甘油酯(mg、dg 等)具有選擇性。penicillium camembertii 脂肪酶催化 mg 和 dg 水解與合成的活性要高于 tg4。從老鼠的肝組織中提取的脂肪酶5對(duì)催化甘一酯的水解具有較高的活性，而對(duì)dg 和 tg 則幾乎沒(méi)有活性。1.2.2區(qū)域或位置選擇性該選擇性指的脂肪酶對(duì)催化甘油 1,3-位和 2-位酯化或水解的活性。豬胰脂酶、rhizomucor miehei 等可以催化甘三酯水解，生成 2-甘一酯；也可以催化甘油與脂肪酸的酯化合成 1,3-甘二酯。但是，由于熱力學(xué)平行的關(guān)系，反應(yīng)過(guò)程中會(huì)伴隨有?；灰频陌l(fā)生，所以不論是水解反應(yīng)還是酯化反應(yīng)都會(huì)有其它異構(gòu)體的生成。1.2.3脂肪酸和?；w的選擇性該選擇性指的是脂肪酶對(duì)脂肪酸的鏈長(zhǎng)、不飽和程度、不飽和鍵的位置以及順?lè)串悩?gòu)體的反應(yīng)的傾向性。有的脂肪酶對(duì)短碳鏈脂肪酸有選擇性；而有的對(duì)中碳鏈或長(zhǎng)碳鏈脂肪酸有選擇性6。1.2.4立體選擇性立體選擇性指的是對(duì) tag 的 1-位或 3-位的區(qū)分能力，以及其它手性或潛手性化合物的選擇性酯化能力。rogalska 等7研究了 25 種動(dòng)物和微生物來(lái)源的脂肪酶催化三辛酸甘油酯水解的反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)pseudomonas aeruginosa和pseudomonassp 是嚴(yán)格的 sn-1 脂肪酶；candida antarctica b 脂肪酶是嚴(yán)格的 sn-3 脂肪酶。但是這種選擇性也受到構(gòu)成甘三酯碳鏈長(zhǎng)度的影響，同種脂肪酶對(duì) sn-1 或 sn-3 的選擇性會(huì)隨著脂肪酸碳鏈的長(zhǎng)度而變化1.2.5非選擇性所謂的非選擇性脂肪酶，就是對(duì)甘油的三個(gè)位置反應(yīng)速率近似相等，常用的candida rogusa 脂肪酶就是非選擇性脂肪酶8。1.3 脂肪酶在生物技術(shù)方面的應(yīng)用1.3.1酯的水解比起油脂在酸堿催化及高溫高壓下的水解，酶催化油脂水解的條件要溫和得多。盡管如此，利用脂肪酶進(jìn)行油脂的水解在工業(yè)上應(yīng)用的實(shí)例還不多。脂肪酶目前在工業(yè)上的應(yīng)用主要集中在洗滌劑領(lǐng)域。這一重大突破是在 1998 年novo/nordisk 推出其產(chǎn)品 lipolase tm之后發(fā)生的9。該產(chǎn)品是真菌 humicola lanuginosa 在宿主 aspergillus niger 體內(nèi)表達(dá)生產(chǎn)的胞外酶。目前，世界上最大的兩家洗滌劑生產(chǎn)商寶潔（proctor and gamble）和聯(lián)合利華（unilever）使用的主要都是這種產(chǎn)品。1.3.2甘油解甘一酯是一種常用的乳化劑，廣泛應(yīng)用于食品、化妝品和藥品的乳化。甘一酯可以通過(guò)油脂的甘油解反應(yīng)得到，與化學(xué)方法相比，酶催化反應(yīng)在富含多不飽和酸的油脂的甘油方面具有優(yōu)勢(shì)10-11。酶催化反應(yīng)可以在較低的溫度下進(jìn)行，可以有效地避免多不飽和脂肪酸的氧化和聚合。1.3.3酯化反應(yīng)利用脂肪酶的專一性，可以通過(guò)甘油的直接酯化獲得純度很高的甘一酯、1，3-甘二酯等產(chǎn)品12。schneider 等13首先將甘油吸附到硅膠上，然后再與脂肪酸反應(yīng)，獲得了純度很高的甘一酯和甘二酯產(chǎn)品。1.3.4醇解/酸解反應(yīng)通過(guò)油脂的糖醇醇解反應(yīng)可以合成糖酯等生物表面活性劑。由于化學(xué)方法更廉價(jià)，所以在蔗糖酯的生產(chǎn)方面，酶法并不占優(yōu)勢(shì)。但是，借助于酶催化反應(yīng)可以很容易的將一些具有特殊功能而又對(duì)熱敏感的脂肪酸（如 epa、dha、cla等）引入甘三酯，生產(chǎn)所謂的功能性油脂14。1.3.5酯交換反應(yīng)結(jié)構(gòu)脂質(zhì)的合成是目前一個(gè)很熱的研究領(lǐng)域，通過(guò)專一性脂肪酶可生產(chǎn)諸如類可可脂、擬人乳脂等高附加值的產(chǎn)品。比如利用棕櫚油的中間分提物生產(chǎn)類可可脂已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化。rhizomucor miehei lipase 是結(jié)構(gòu)脂合成中使用最廣泛的一種脂肪酶15-16。本實(shí)驗(yàn)采用由諾維信中國(guó)生物技術(shù)有限公司提供的具有1,3-特異性的固定化脂肪酶lipozyme rm im作為催化劑，催化棕櫚油與甲醇的酯交換。1.4 不同因素對(duì)醇解產(chǎn)物的影響1.4.1底物摩爾比的影響過(guò)量的醇可以增加酯交換反應(yīng)產(chǎn)率，但也會(huì)使酶活性降低甚至失活，尤其在非均相反應(yīng)體系中較顯著。加入有機(jī)溶劑能增加醇的溶解性，抑制酶失活從而提高生物柴油的產(chǎn)率。例如，在正己烷中，甲醇/葵花籽油的摩爾比為3:1，固定化熒光假單胞菌脂肪酶催化反應(yīng)24h小時(shí)后，甲酯轉(zhuǎn)化率達(dá)72%；在同樣條件下，來(lái)源于根霉菌、疏綿狀嗜熱絲孢菌和洋蔥假單胞菌三種固定化酶催化酯交換反應(yīng)48h后，甲酯轉(zhuǎn)化率近80%。過(guò)量的醇是提高酯交換產(chǎn)率的先決條件,但反應(yīng)過(guò)程中須保持低濃度的醇。因此，soumanou和bornscheuer在根霉菌脂肪酶催化制備生物柴油的反應(yīng)中，將醇分為三部分（每部分醇/油摩爾比為1:1）分步加入到反應(yīng)體系中，24h后產(chǎn)率分別為84%。通常酶法催化制備生物柴油過(guò)程中，在有機(jī)溶劑體系中需要稍微過(guò)量的醇（大于醇油化學(xué)計(jì)量摩爾比率即45:1），可達(dá)到較高的酯產(chǎn)率；無(wú)溶劑體系中醇應(yīng)分步加入，而第一步酯交換反應(yīng)時(shí)要考慮醇在油中的溶解性及溫度的影響。1.4.2 溫度的影響不同的脂肪酶在無(wú)溶劑體系中催化酯交換反應(yīng)的最佳溫度范圍基本相同(30-55)。iso等在研究熒光假單胞菌脂肪酶催化合成油酸乙酯的反應(yīng)中發(fā)現(xiàn)：在30-55之間，酯交換反應(yīng)速率隨著溫度的增加而增加。xu等在固定化疏綿狀嗜熱絲孢菌脂肪酶催化制備生物柴油的實(shí)驗(yàn)中（醇油摩爾比1：1）發(fā)現(xiàn)：當(dāng)溫度從30逐漸升到40時(shí)，反應(yīng)速率逐漸增大；當(dāng)升至50時(shí)，反應(yīng)速率不再增加。但醇油摩爾比增大，升高溫度將會(huì)加快酶的失活。du等在固定化疏綿狀嗜熱絲孢菌脂肪酶催化反應(yīng)發(fā)現(xiàn)溫度、酯交換反應(yīng)速率和脂肪酶穩(wěn)定性之間的影響關(guān)系與xu等實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同。溫度從30升高到40，加快了反應(yīng)速度，但降低了脂肪酶的穩(wěn)定性。因此，酶法催化酯交換反應(yīng)的最佳溫度主要取決于生物催化劑穩(wěn)定性和酯交換反應(yīng)速率之間的相互影響，也受到醇油摩爾比、有機(jī)溶劑和酶熱穩(wěn)定的影響。1.4.3 酶量的影響 酶量的不同直接影響著酷交換反應(yīng)速度和酯交換率，一般來(lái)說(shuō)，隨著酶量的增大，酶與底物接觸幾率增大，酯交換率或醇轉(zhuǎn)化率增大。對(duì)于不同的原料，最佳脂肪酶的用量不一，shimada等17采用4%酶量催化植物油，而劉德華等18采用60%酶量催化豆油。1.5 本論文研究目的及研究?jī)?nèi)容1.5.1 研究目的1,3-位專一性脂肪酶廣泛用于催化油脂改性，然而在利用1,3-位專一性脂肪酶催化油脂改性時(shí)會(huì)存在副反應(yīng)?；D(zhuǎn)移反應(yīng)19，?；D(zhuǎn)移對(duì)酯交換反應(yīng)的產(chǎn)品組成有很大的影響，若?；D(zhuǎn)移得不到有效的控制，則很難得到預(yù)期的產(chǎn)品。lipozyme rm im是一種常用的1,3-位專一性脂肪酶，在lipozyme rm im催化甘油三酯（tag）醇解反應(yīng)過(guò)程中，理論上存在1,2-dag、2-mag、tag、脂肪酸甲酯和甘油,但實(shí)際上產(chǎn)物中還有1,3-dag和1（3）-dag，證實(shí)了?；D(zhuǎn)移的存在20 。研究發(fā)現(xiàn)影響?；D(zhuǎn)移的因素較多，其中底物比、反應(yīng)溫度和反應(yīng)用酶量的影響較大21。醇解反應(yīng)是酯交換的一種，甘油三酯和醇（比如甲醇）在脂肪酶的作用下發(fā)生醇解反應(yīng)生成dag、mag及脂肪酸甲酯、甘油等副產(chǎn)物22 。本文以lipozyme rm im催化棕櫚油與甲醇酯交換為反應(yīng)模型，研究底物比、反應(yīng)溫度和反應(yīng)用酶量對(duì)?；灰频挠绊?，以期了解1,3-位專一性脂肪酶催化甘三酯醇解酯交換反應(yīng)過(guò)程中的?；D(zhuǎn)移，為1,3-位專一性脂肪酶在酶促醇解反應(yīng)中的實(shí)際應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。1.5.2 研究?jī)?nèi)容在無(wú)溶劑體系下1,3-位專一性酶lipozyme rm im催化棕櫚油與甲醇的醇解過(guò)程中?；D(zhuǎn)移的情況（1） 在溫度和酶量一定的條件下，底物摩爾比對(duì)酰基轉(zhuǎn)移的影響。（2） 在底物摩爾比和酶量一定的條件下，溫度對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響。（3） 在底物摩爾比和溫度一定的條件下，酶量對(duì)酰基轉(zhuǎn)移的影響。第2章 材料與方法2.1 實(shí)驗(yàn)材料2.1.1 材料與試劑5 棕櫚油 新實(shí)力食品（南京）有限公司提供 固定化脂肪酶lipozyme rm im, 由諾維信中國(guó)生物技術(shù)有限公司提供甲醇 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司正己烷、異丙醇、乙酸 色譜純2.1.2儀器設(shè)備waters 1525高效液相色譜系統(tǒng)，檢測(cè)器 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器色譜柱 waters spherisorb silica色譜柱（2.0mm250mm）離心機(jī)、集熱式恒溫磁力攪拌水浴鍋等gc-14b氣相色譜儀 日本島津公司2.2 實(shí)驗(yàn)方法2.2.1棕櫚油的脂肪酸組成分析脂肪酸甲酯的制備：采用bf3-ch3oh快速酯化法。色譜分析：peg-20000毛細(xì)管柱（30 m0.25 mm0.25 m），采用程序升溫：初溫100 ，保持3 min，以每分鐘20180 并保持4 min，再以每分鐘12235 保持15 min。載氣n2(99.999 %)，燃燒氣h2(99.999 %)和空氣；進(jìn)樣口溫度250 ，檢測(cè)器250 ，h2壓力60 kpa，空氣壓力50 kpa，柱前壓220 kpa；進(jìn)樣量1.0 l，分流比1：50。利用峰面積歸一法確定各種脂肪酸含量。2.2.2 醇解反應(yīng)將一定量的棕櫚油與甲醇共同置于圓底燒瓶中，加入一定量的固定化脂肪酶，于一定溫度下反應(yīng)一定時(shí)間，取樣，hplc分析產(chǎn)物中的含量。由于選用的lipozyme rm im是1,3-位專一性酶，故以醇解過(guò)程的中間產(chǎn)物1,3-dag和1（3）-mag的含量評(píng)價(jià)反應(yīng)的酰基轉(zhuǎn)移情況。由高效液相色譜儀進(jìn)行產(chǎn)物含量的測(cè)定。2.2.3高效液相分析反應(yīng)產(chǎn)物一定量的反應(yīng)物用正己烷溶解后，經(jīng)10000 r /min離心10分鐘后用于hplc分析。色譜條件：檢測(cè)器：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；色譜柱：waters spherisorb silica色譜柱（2.0mm250mm）；流動(dòng)相a：正己烷-異丙醇（體積比99:1）；流動(dòng)相b：正己烷-異丙醇-乙酸（體積比1:1:0.01）；柱溫：35；進(jìn)樣量：5l；漂移管溫度：75；流速：0.5ml/min。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。出峰順序?yàn)閠ag 、1，3-dag、1，2（2,3）-dag、1（3)-amg、 2-mag。 面積歸一化法定量。表1 梯度洗脫條件時(shí)間/mina相/%b相/%010001080201470301510002010002.2.4各因素對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的影響2.2.4.1底物摩爾比對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響選用底物醇油摩爾比為1:1、3:1及6：1作為底物研究的變量，反應(yīng)溫度55，加酶量6%（油的質(zhì)量），在一定的磁力攪拌條件下不同時(shí)間取樣。2.2.4.2溫度對(duì)酰基轉(zhuǎn)移的影響由于原料是50 -54的棕櫚油以及甲醇的沸點(diǎn)是64.5，故選用50、55、60作為溫度研究的變量，醇油摩爾比為1:1，加入酶量6%（油的質(zhì)量），在一定的磁力攪拌條件下不同時(shí)間取樣。2.2.4.3酶量對(duì)酰基轉(zhuǎn)移的影響甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為1:1，反應(yīng)溫度為55，在一定磁力攪拌條件下，加入的固定化脂肪酶的量占棕櫚油質(zhì)量的4%、6%、8%。在不同的時(shí)間取樣進(jìn)行分析。第3章 結(jié)果與討論3.1棕櫚油的脂肪酸組成棕櫚油的脂肪酸組成分析如表6表6 棕櫚油的脂肪酸組成樣品肉豆蔻酸棕櫚酸(軟脂酸)硬脂酸油酸亞油酸平行11.25753.4794.43932.7036.901平行21.30053.9714.26032.1116.944平均1.27853.7254.3532.416.9223.2醇解反應(yīng)的產(chǎn)物醇解反應(yīng)是酯交換的一種，甘油三酯和短鏈醇（比如甲醇）在脂肪酶的作用下發(fā)生醇解反應(yīng)生成1,2-dag和2-mag，1,2-dag和2-mag經(jīng)?；D(zhuǎn)移生成1,3-dag和1-mag,反應(yīng)過(guò)程中生成的副產(chǎn)物有脂肪酸的短鏈酯和甘油23-24，如圖1。鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝 鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度v n r e o鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 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啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 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啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊死了卡號(hào)發(fā)卡后盡快返回碰擦我還是當(dāng)富婆那聲音速度vnreo鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝 鵝鵝鵝鵝鵝鵝鵝嗯嗯鵝鵝鵝看看看看看看 看看看 看看看看看看 卡啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊 啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊啊啊啊啊 啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊 啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊嗷嗷嗷啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊單位%圖1 醇解反應(yīng)產(chǎn)物由圖1可知，在甲醇與棕櫚油摩爾比為1:1，反應(yīng)溫度為55，6%（油的質(zhì)量）條件下，1,3-dag和1-mag含量隨著反應(yīng)時(shí)間的增加而增加；1,2-dag，2-mag和tag則隨著時(shí)間的增加而呈下降趨勢(shì)，其中1,2-dag和2-mag含量在兩小時(shí)達(dá)到最大值都在呈下降趨勢(shì)。說(shuō)明了在此反應(yīng)過(guò)程中，?；D(zhuǎn)移量隨著時(shí)間的增加而逐漸增加的，1,2-dag和2-mag含量呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，說(shuō)明目標(biāo)產(chǎn)物在兩小時(shí)達(dá)到最大值，之后會(huì)轉(zhuǎn)化成1，3-dag 和1-mag,最后dag和mag達(dá)到平衡。3.3 不同因素對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響3.3.1底物對(duì)酰基轉(zhuǎn)移的影響在反應(yīng)溫度55，加酶量6%條件下，考察甲醇與棕櫚油的摩爾比對(duì)產(chǎn)物中?；D(zhuǎn)移組分含量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。由于1mol甘油三酯在理論上需要3mol甲醇來(lái)參加反應(yīng)，在此理論比值（即甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為3:1）下，酰基轉(zhuǎn)移較少；當(dāng)甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為1:1時(shí)，即小于理論比值3:1時(shí)，1,3-dag和1（3）-mag含量顯著增加；而當(dāng)甲醇與棕櫚油的底物摩爾比為6:1時(shí)，即大于理論比值3:1時(shí)，1,3-dag和1（3）-mag含量只有少量的降低，即酰基轉(zhuǎn)移量沒(méi)有發(fā)生很大的改變。這可能是甲醇在棕櫚油中的溶解性差，當(dāng)甲醇為3mol當(dāng)量，底物與酶的接觸已達(dá)到飽和，且甲醇等短鏈醇對(duì)酶等蛋白質(zhì)有變性作用，過(guò)量的甲醇對(duì)脂肪酶的催化反應(yīng)有很強(qiáng)的抑制作用25-26，因此即使增加甲醇的量也不會(huì)使酰基轉(zhuǎn)移增加。由此可見(jiàn)，在利用該酶進(jìn)行酶促醇解反應(yīng)時(shí)，欲很好的利用其1,3位專一性，則以較高的醇油比為佳。圖1 底物摩爾比對(duì)醇解反應(yīng)產(chǎn)物中?；D(zhuǎn)移組分含量的影響3.3.2溫度對(duì)?；D(zhuǎn)移的影響基轉(zhuǎn)移。在甲醇與棕櫚油摩爾比為1:1，加入酶量6%（油的質(zhì)量），50、55、60作為溫度研究的變量條件下，考察了反應(yīng)溫度對(duì)?；D(zhuǎn)移組分含量的影響，結(jié)果見(jiàn)2。由圖2可知，酰基轉(zhuǎn)移量1,3-dag與1（3）-mag含量隨著溫度的升高（從50上升至60）而增加，這可能一方面是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)采用熔點(diǎn)較高的棕櫚油，反應(yīng)溫度升高，體系黏度低，傳質(zhì)速率就快，進(jìn)而反應(yīng)速度快，使得1,3-dag與1（3）-mag含量隨著溫度的升高而增加；另一方面反應(yīng)溫度升高會(huì)使甘三酯的水解速度加快，反應(yīng)體系中甘二酯的濃度增大，有利于1,2(2，3)-dag向1,3-dag及2-mag向1（3）-mag轉(zhuǎn)化，即產(chǎn)生更多的?；D(zhuǎn)移。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在反應(yīng)前4小時(shí)，?；D(zhuǎn)移量增加的較快，尤其在反應(yīng)前2小時(shí)，1,3-dag比1（3）-mag的增加量更多，這可能是因?yàn)?,3-dag有一個(gè)?；荏w，而1（3）-mag有兩個(gè)?；荏w，使得?；荏w進(jìn)攻機(jī)會(huì)更多27-28,而引起在反應(yīng)前4小時(shí)1（3）-mag 比1,3-dag的增加量更大。但隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，酰基轉(zhuǎn)移量則緩慢的增加，當(dāng)反應(yīng)至6小時(shí)后，1,3-dag和1（3）-mag的含量幾乎沒(méi)有發(fā)生改變。由此可見(jiàn)，利用該酶(lipozyme rm im的最適溫度范圍在50-65)進(jìn)行酶促醇解反應(yīng)時(shí),在酶的最適范圍內(nèi)溫度高利于甘二酯和單甘脂的酰012345670246810時(shí)間(h)5055601-mag含量(%)圖2溫度比對(duì)醇解反應(yīng)產(chǎn)物中?；D(zhuǎn)移組分含量的影響3.3.3酶量度?；D(zhuǎn)移的影響在甲醇與棕櫚油摩爾比為1:1，反應(yīng)溫度為55，4%、6%、8%（油的質(zhì)量）作為酶量研究的變量條件下，考察了加酶量對(duì)產(chǎn)物中?；D(zhuǎn)移組分的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可知，酶量為4%時(shí)，1,3-dag與1（3）-mag含量為18.7%和5.2%；酶量為6%時(shí)，1,3-dag與1（3）-mag含量能達(dá)到30%和8.5%；酶量為8%時(shí)，1,3-dag與1（3）-mag含量達(dá)到31%和9.1%，即酶量從4%增加到8%，1,3-dag與1（3）-mag含量是逐漸增加，尤其酶量大于6%，1,3-dag與1（3）-mag含量增加的更多。同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，1,3-dag與1（3）-mag含量增加；在反應(yīng)前2小時(shí)，1,3-dag與1（3）-mag含量增加迅速，當(dāng)反應(yīng)至6小時(shí)后，1,3-dag與1（3）-mag含量增加的緩慢。即?；D(zhuǎn)移量隨著酶量和時(shí)間的增加而增加，反應(yīng)前期?；D(zhuǎn)移量增加顯著，反應(yīng)后期，酰基轉(zhuǎn)移量增加緩慢。這可能是酶量的增加使甘三酯的水解程度加劇，初期水解會(huì)產(chǎn)生更多的甘一酯和甘二酯29-30，且1,2（2,3）-dag與2-mag沒(méi)有1,3-dag和2-mag穩(wěn)定15，會(huì)使1,2（2,3）-dag和2-mag大量的轉(zhuǎn)化成1,3-dag和1（3）-mag，因此在醇解反應(yīng)前期，隨著酶量的增加?；D(zhuǎn)移量增加的更為明顯。由此可見(jiàn)，在利用該酶進(jìn)行酶促醇解反應(yīng)時(shí)，為了很好的利用其1,3位專一性，應(yīng)以較高的酶量為宜。圖3酶量比對(duì)醇解反應(yīng)產(chǎn)物中?；D(zhuǎn)移組分含量的影響第4章 結(jié)論與展望4.1 主要結(jié)論本文在1.3-特異性脂肪酶催化棕櫚油與甲醇的醇解體系下，底物摩爾比、反應(yīng)溫度和加酶量對(duì)醇解過(guò)程中發(fā)生的?；D(zhuǎn)移現(xiàn)象的影響進(jìn)行了研究，得出以下結(jié)論：（1）在底物摩爾比為1:1，反應(yīng)溫度為55、加酶量為6%的反應(yīng)條件下進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物1,3-dag和1-mag含量隨著反應(yīng)時(shí)間的增加而增加，即酰基轉(zhuǎn)移量隨著時(shí)間的增加而逐漸增加；1,2-dag，2-mag和tag則隨著時(shí)間的增加而呈下降趨勢(shì)。（2）在溫度為55，加酶量為6%，醇油底物摩爾比分別為1:1、3:1和6:1的反應(yīng)條件下進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇與棕櫚油摩爾比小于3:1時(shí)，?；D(zhuǎn)移量隨著反應(yīng)時(shí)間的增加而增加；（3）在底物摩爾比為1:1，加酶量為6%，反應(yīng)溫度分別為50、55和60的反應(yīng)條件下進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)酰基轉(zhuǎn)移量會(huì)隨著溫度和時(shí)間的增加而增加；（4）在底物摩爾比為1:1，溫度為55，加酶量分別為4%、6%和8%的反應(yīng)條件下進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)當(dāng)酶量從4%增加到8%，?；D(zhuǎn)移量隨著時(shí)間的增加而增加。4.2 問(wèn)題與展望（1）本文用1,3-特異性脂肪酶催化醇解體系，發(fā)現(xiàn)底物摩爾比、溫度和酶量對(duì)醇解過(guò)程中出現(xiàn)的?；D(zhuǎn)移（副產(chǎn)物）是有影響的，如何抑制?；D(zhuǎn)移（副產(chǎn)物）從而提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量，有待進(jìn)一步更深入的探究。參考文獻(xiàn).1 wei li, ren-wang li, qiang li,etal. acyl migration and kinetics study of 1(3)-positional specic lipase of rhizopus oryzae-catalyzed methanolysis of triglyceride for biodiesel production j. process biochemistry 2010,45:18881893.2 roxana rosu,mamoru yasui,yugo lwas