SOP-QC-增補(bǔ)本藥典-沉降菌及表面微生物測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、.制藥廠GMP操作文件名 稱沉降菌及表面微生物測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第 1 頁 共 3 頁 附件 0 個(gè)編 號(hào)頒發(fā)部門制 定 人審 核 人批 準(zhǔn) 人制定日期審核日期批準(zhǔn)日期分 發(fā) 至生效日期目的：建立正確的潔凈實(shí)驗(yàn)室、潔凈廠房沉降菌表面微生物測試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，保證藥品在規(guī)定潔凈級(jí)別內(nèi)進(jìn)行。范圍：要求有凈化級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室、廠房責(zé)任人：QA潔凈度檢測人員、微生物檢驗(yàn)人員對(duì)本制度的實(shí)施負(fù)責(zé)。依據(jù)：醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌的測試方法，藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）內(nèi)容：1 儀器：微波爐、生化培養(yǎng)箱、電冰箱、凈化工作臺(tái)。2 用具：培養(yǎng)皿、無菌觸碟、消毒棉棒，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前經(jīng)滅菌后備用。3 培養(yǎng)基：胰酪

2、胨大豆瓊脂培養(yǎng)基、PH7.04 培養(yǎng)皿的制備： 將培養(yǎng)皿在121濕熱滅菌30分鐘。配制培養(yǎng)基并滅菌，將滅菌培養(yǎng)基加熱熔化，冷至4560，在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿1520ml，待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于3035恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。5 測試方法及步驟5.1 采樣前潔凈區(qū)的狀態(tài)：5.1.1 沉降菌測試前：被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到（1826）相對(duì)濕度在（45%65%）為宜；壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。5.1.2 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于2人。被測試潔凈室（區(qū)）已消毒。測

3、試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。測試報(bào)告中應(yīng)標(biāo)明測試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)。5.1.3 在空態(tài)或靜態(tài)a（無生產(chǎn)人員）測試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min后開始，對(duì)非單向流潔凈室，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。在靜態(tài)b測試時(shí)（生產(chǎn)結(jié)束人員撤離），對(duì)單向流潔凈室而言，測試應(yīng)在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始，對(duì)非單向流潔凈室，測試應(yīng)在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始。5.1.4 在動(dòng)態(tài)測試時(shí)，則須記錄生產(chǎn)開始的時(shí)間以及測試時(shí)間。5.2采樣點(diǎn)數(shù)量及其布置5.2.1采樣點(diǎn)的確定： 根據(jù)潔凈區(qū)（室

4、）面積大小確定最少采樣點(diǎn)數(shù)目（根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16294-2010要求），在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還宜同時(shí)滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免在某局部區(qū)域過于集中，培養(yǎng)皿應(yīng)布置在有代表性的地方（如關(guān)鍵設(shè)備或易受污染的地方）和氣流擾動(dòng)最小的地方。工作區(qū)測試點(diǎn)位置離地0.81.5m左右（略高于工作面），可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測點(diǎn)。5.2.2 最少采樣點(diǎn)數(shù)目在滿足最少采樣點(diǎn)數(shù)目的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。面積m潔凈度級(jí)別微生物最大沉降菌數(shù)沉降菌 個(gè)/皿最少采樣點(diǎn)數(shù)最少培養(yǎng)皿數(shù)10A級(jí)123142040C級(jí)502240100D級(jí)10022100200D級(jí)1003220

5、0400D級(jí)100624001000D級(jí)10013210002000D級(jí)1003222000D級(jí)10063290mm，CFU/4h(培養(yǎng)皿暴露時(shí)間不超過4小時(shí)，以平均菌落數(shù)表示)（1）A級(jí)潔凈區(qū)采樣點(diǎn)分布圖（15點(diǎn)）（2）C、D級(jí)潔凈區(qū)采樣點(diǎn)分布圖示意5.3 采樣方法：5.3.1沉降菌：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)（靜態(tài)），4小時(shí)（動(dòng)態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。5.3.2表面微生物：5.3.2.1 無菌碟法：用無菌觸碟(50mm)直接接觸所檢物體或工作服510秒，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。5.3.2.2棉簽擦拭法：無菌棉簽支擦拭物體表面25

6、cm2然后用消毒醫(yī)用剪子將棉頭放入100ml PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，振搖至均勻。按細(xì)菌檢查法注皿。5.4 培養(yǎng)全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30-35培養(yǎng)，時(shí)間不少于2天。培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染。5.5 菌落計(jì)數(shù)：4.6.1達(dá)到規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間后，菌落數(shù)用肉眼直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，并用510倍放大鏡檢查，有否遺漏。 4.6.2將測得的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算公式如下 平均菌落數(shù)M=（M1+M2+Mn）/n式中：M1=1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)M2=2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)Mn=n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)n=培養(yǎng)皿總數(shù)6 注意事項(xiàng)6.1 采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。6.2 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或者正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。6.3 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或者污染的應(yīng)剔除。6.4 沉降菌的測試需在懸浮粒子測試完成后并經(jīng)過對(duì)潔凈室的消毒，方能進(jìn)行沉降菌的測試。6.5 測試記錄：測試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓