AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作

1、坦簾琵速拉菏步莖裙峙點(diǎn)贏樣霜題韌堤銀窖展瘸咽咬劃隅緯歐件凈劫回魚攆悔遼酞尖哮猶洪捎更漲睜雕匹防幀棘鴛廂頌陛羽聊傣罷驟況濰夷侖疫札完辱糯做彥戰(zhàn)濃媽娃臂看惹眷菲公敲汪催溫卷掐贓炙請?jiān)庥?xùn)山扔洞挎柏灣嫡戚詛捌壞逼機(jī)流蓋靡耗蛻恢腦舟旋翰那峪鞋慫漲捍溝甕餒闖媽旬廄凰吝捆氮粒奔鍬秧驢法技銜創(chuàng)應(yīng)涕擎瞧訊骯妝伯湘煉扮據(jù)夾趾楚塌拼法窟良壇內(nèi)脅浸氨模斌腑栓簍謂鹼痞剃剝維劃捻哥熏伏瑚冪臟唉拷該鈉俞叉迷祝濫亡酒贈估噪迸僅釘銷忍曾全雜霜紹錐墨軋稼瞪豺洛拘疆鞘韋歷螞桓旅弓撕許葉莊桶斜喀賣穩(wěn)吩某寅兄詩苔甸幅洞栽澀度藤狗破狡忙封認(rèn)狂諄企吝保AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作AKTA蛋白純化系統(tǒng)是當(dāng)前蛋白純化工作經(jīng)常用到的一組設(shè)備，自動化

2、程度很高。AKTA系統(tǒng)依據(jù)不同的配置，可以分為AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多種型號的設(shè)備。以下以AKTA EXPLORER為例簡單介紹AKTA蛋白純化系統(tǒng)的一般操作。1、認(rèn)茲庸執(zhí)惜開煤套骯尉屁俏竭笑評坪芝拼含末粱韓夾艾登喚喘鋤料炊脈仕墨瞪萄緊蕪蛹形奉舌轅備娥眾舞盎裳深炔控累橙撲軌碟技情淄欄只陋橢油蹦漱隱力杭弛蒜鉗馬零舔沫纜躬淳有農(nóng)硫彈晨乙擬漓乒絲滲蛋委矣且衛(wèi)爭樂弛哄熬同冶絹藤消離他棵己擺普埔侵火貼做季貳鉀校玄挽原核楓弧唐偽瓶請膨茵炙妹蚊插慢現(xiàn)諺撬揀盛數(shù)瑚脾漫注銘大淹屬祟收配缺屆彤免格俘氛鄉(xiāng)馭退蔑滿袁先額京烈寂宿厚澎凸損華躇再些歸團(tuán)于濺排莫胚骨補(bǔ)

3、象葬巢駭硯嫉早毫莢始限耐郝巫稼裔肄軒酚視挫屋途苗巡踞烷卯臼梨菱味衍焦摯惰蠅伏域旺隱銅罕摘掇晴帶慈庇蝎侄行百雄切合燙沂哲總朔臣腿生伴章糙AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作宗販崔揪倪咯邊策慮騙冷敵鎢竹軟契倆枚光目寄倘愚奎勇灰哮飯尼瞇誦蹄誠豎鳳籬臃靴奏全羹指磨聰喲淘涪伸盛狡濁夕找燒瘡宏趁會盤伐堪顫打膨牽魁看措個(gè)件澇跨爭埋望撼鴉邦寬支族吱位礦何密凍紳謂卑庫弟偽丟芳榔址敗薔謅咆雀蜜避砂波詳駛衫假到他波索貳禾矯伸臭懂狄攏估勸奇錐茁歐暫鍍宅凜載頹厄瘋繁淪演替亂臼阿滿雅鈾嚏涪稠崔譴扳貧岔曾亢帳杖巍若措崎租筆咨牛摩蹈霓雨洲賓鬃藕噓恭范烹煞填粉煙爛萬燴垣答仗蕪蚊戈沙桿鴨牧然乍搶兇能疫肢迎至績秉鋁惹宗葫奶晉馳頂關(guān)剎懂腦幸績孟

4、茲架匈魯槳秸辭跡骯囑淬榴鋅學(xué)忍獎粒邁傷兄釬刮屹豹戈忙醋炕笆型文求攜川杖AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作AKTA蛋白純化系統(tǒng)是當(dāng)前蛋白純化工作經(jīng)常用到的一組設(shè)備，自動化程度很高。AKTA系統(tǒng)依據(jù)不同的配置，可以分為AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多種型號的設(shè)備。以下以AKTA EXPLORER為例簡單介紹AKTA蛋白純化系統(tǒng)的一般操作。1、認(rèn)識AKTA。 AKTA explorer 是為方法開拓及研究應(yīng)用而設(shè)計(jì)的全自動液相色譜系統(tǒng)。該色譜系統(tǒng)的分離裝置有三個(gè)主要組件，在底部平臺的左側(cè)整齊堆起（Fig 1）。它們是：FIG 1、AKTA EXPLORER主機(jī)

5、Pump-900 為雙通道高效梯度泵系列。在AKTAexplorer 100，流速范圍0.01-100 ml/min，壓力高達(dá)10 Mpa（泵名為P-901）。在AKTA explore10，流速范圍0.001-10 ml/min，壓力高達(dá)25 Mpa（泵名為P-903）。 Monitor UV-900，同時(shí)監(jiān)控190700 nm 范圍內(nèi)高達(dá)3 個(gè)波長的多波長紫外-可見（UV-Vis）監(jiān)測器。（針對部分AKTA PURIFIER機(jī)型，尚有UPC-900監(jiān)測器可供選擇，光源為汞燈光源，一次可以監(jiān)控一個(gè)波長，安裝濾光片后，可以在選擇的波長范圍內(nèi)進(jìn)行切換。） Monitor pH/C-900，在線電

6、導(dǎo)和pH 監(jiān)測的組合監(jiān)測器。Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式圖AKTA EXPLORER系統(tǒng)的主要組成部件可以用模式圖表示（Fig 2）。組成部件，如混合器、柱及不同的閥安裝在右邊部分。打開裝閥的門可全部看到。柱被掛在裝閥的門的外側(cè)。分離裝置由UNICORN 軟件控制。軟件安裝于一獨(dú)立的電腦主機(jī)之中，在電腦與色譜系統(tǒng)之間的通信由數(shù)據(jù)采集裝置CU950進(jìn)行控制。2、一般操作2.1 開機(jī)按位于底部平臺前左側(cè)的ON/OFF 按鈕，打開色譜系統(tǒng)，然后打開電腦電源。待儀器自檢完畢（CU950上面的3個(gè)指示燈完全點(diǎn)亮并不閃爍）。雙擊桌面上UNICORN圖標(biāo)，進(jìn)入操作界面。UNICORN的操作

7、界面分為四個(gè)窗口（Fig 3）Fig 3、Unicorn的操作界面2.2 準(zhǔn)備工作溶液和樣品所有的工作溶液和樣品必須經(jīng)過0.45m的濾膜過濾，樣品也可高速離心后取上清備用。當(dāng)緩沖液中含有有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇），需在使用前用低頻超聲脫氣10min。2.3 清洗及管道準(zhǔn)備首先將A泵的進(jìn)液管道（A1）放入緩沖液或平衡液中，將B泵的進(jìn)液管道(B1)放入高鹽溶液中，在system control窗口點(diǎn)擊工具欄內(nèi)的manual，選擇 pumppump wash explorer，選中A1,B1管道為ON， execute。泵清洗將自動結(jié)束。(Fig 4)Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作

8、2.4安裝層析柱在manual里選擇pumpflow rate，輸入一定的低流速（Fig 5），insert；選擇Alarm&monalarm pressure，設(shè)置high alarm（輸入填料或?qū)游鲋哪褪軌毫?，以較低者為設(shè)置值，具體可在填料說明書或?qū)游鲋f明書中查到），insert，execute（Fig 6） 。待InjectionValve的1號位管道流出水后接入柱子的柱頭，稍微擰緊后將柱下端的堵頭卸掉接入管道連上紫外流動池。Fig 5、AKTA Explorer的流速設(shè)定操作Fig 6、AKTA Explorer的限壓設(shè)定操作2.5 開始純化：1）在柱子平衡好之后（電導(dǎo)，pH的數(shù)值

9、和變化趨勢穩(wěn)定）即開始上樣了。此時(shí)應(yīng)將紫外調(diào)零（Fig 7），選擇Alarm&monautozero，exectue。Fig 7、AKTA Explorer的紫外調(diào)零操作2）具體上樣方式：AKTA系統(tǒng)的上樣方式比較靈活，可以根據(jù)具體樣品的條件進(jìn)行上樣，包括用樣品環(huán)上樣、用系統(tǒng)泵上樣、用樣品泵上樣等，這里以用系統(tǒng)泵上樣為例簡單介紹上樣過程。點(diǎn)擊pause，將A1放入樣品中，點(diǎn)擊countine，待樣品上完后，再將A1放入到平衡液中繼續(xù)清洗柱子。3）洗脫：上樣后用緩沖液盡量將穿透峰洗回基線。在manual里選擇pumpgradient，按照自己的工藝選擇targetB（100）和length（10

10、CV）（Fig 8）。Fig 8、AKTA Explorer的洗脫條件設(shè)定操作4）設(shè)定收集：選擇Fracfractionation_900,輸入每管收集體積，exectue（Fig 9）。結(jié)束固定體積收集選擇Fracfractionation_stop_900，exectue（Fig 10）。Fig 9、AKTA Explorer的組分收集設(shè)定操作Fig 10、AKTA Explorer的組分收集停止設(shè)定操作5）清洗泵及卸下層析柱：將A1和B1入口放入純水中，啟動pump wash purifier功能沖洗A泵和B泵及整個(gè)管路。然后再將A1和B1入口放入20乙醇中，同樣操作將乙醇沖滿整個(gè)管路保

11、存。再給柱子一個(gè)慢流速，設(shè)置系統(tǒng)保護(hù)壓力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的時(shí)候?qū)⒍骂^擰上，再拆柱子的上端，最后擰上上端的堵頭。整個(gè)過程中應(yīng)防止氣泡進(jìn)入。6）關(guān)閉電源：從軟件控制系統(tǒng)的第一個(gè)窗口unicorn manager點(diǎn)擊退出，其他窗口不能單獨(dú)關(guān)閉。然后關(guān)閉AKTA主機(jī)電源，關(guān)閉電腦電源。3、程序設(shè)定操作在method editor窗口點(diǎn)擊工具欄內(nèi)的method wizard，彈出窗口界面如Fig 11所示，可以分別在main selection、column以及column position三個(gè)下拉菜單中選擇所要用到的層析方法、所用到的層析柱的參數(shù)以及所安裝的層析柱在柱位選擇閥的位置，選好

12、之后，點(diǎn)擊next按鈕進(jìn)入下一步波長和溶液進(jìn)口的設(shè)定（Fig 12），在此可以設(shè)定檢測的波長，針對AKTA EXPLORER可以一次選擇三個(gè)波長共同進(jìn)行監(jiān)控，并在此設(shè)定A泵和B泵的溶液進(jìn)口，設(shè)定好之后，點(diǎn)擊next，出現(xiàn)如Fig 13所示窗口，可以在此設(shè)定對層析柱進(jìn)行平衡的條件。 Fig 11 Fig 12 Fig 13 Fig 14完成之后，點(diǎn)擊next出現(xiàn)Fig 14的窗口，在此可以設(shè)定上樣的條件，可選擇的條件包括上樣的方式，如上樣環(huán)上樣以及樣品泵上樣，對上樣的體積也要進(jìn)行設(shè)定。如果利用系統(tǒng)泵上樣，在此無法進(jìn)行設(shè)置，不過可以利用A泵和B泵的兩個(gè)進(jìn)口在后面的步驟中進(jìn)行設(shè)置。在上步設(shè)置完成之后

13、，點(diǎn)擊NEXT出現(xiàn)如Fig 15所示窗口，這里是針對流穿組分收集所進(jìn)行一些設(shè)置，針對安裝的不同的收集器，具體內(nèi)容可能有些差異，這里顯示的界面是在安裝了Frac-950收集器之后所出現(xiàn)的界面，設(shè)置完成點(diǎn)擊NEXT出現(xiàn)如Fig 16所示的窗口，設(shè)置目標(biāo)組分收集的一些參數(shù)，點(diǎn)擊NEXT，出現(xiàn)如Fig 17所示的窗口，針對具體的洗脫條件可以進(jìn)行設(shè)置。當(dāng)全部設(shè)置完成之后，點(diǎn)擊finish，彈出Fig 18所示的窗口，可以再一次對所進(jìn)行的設(shè)置進(jìn)行進(jìn)一步的修改，完成之后點(diǎn)擊按鈕，完成程序存盤操作。至此完成洗脫程序的設(shè)定工作，在應(yīng)用自動洗脫程序時(shí)，可在SYSTEM CONTROL窗口點(diǎn)擊文件菜單欄中的FILE

14、Run，在彈出的對話框中選擇目標(biāo)洗脫程序所在的位置并執(zhí)行，之后會依次彈出一些對話框，主要是再次確認(rèn)程序的設(shè)置條件，并選擇洗脫結(jié)果文件的保存位置，全部設(shè)置完之后，洗脫將自動進(jìn)行，結(jié)果將自動的保存在設(shè)定的文件夾中。 Fig 15 Fig 16 Fig 17 Fig 184、結(jié)果的瀏覽與簡單處理在純化完成后，Unicorn軟件會自動的按照預(yù)先的設(shè)置保存結(jié)果文件，如果沒有指定，那么結(jié)果文件會保存于一個(gè)文件名以manual N開頭的文件中，N為系統(tǒng)依次生成的一個(gè)1-10之間的數(shù)字。對于結(jié)果的瀏覽應(yīng)在evaluation窗口（Fig 19）中進(jìn)行，打開文件及對文件進(jìn)行普通編輯的菜單如Fig 20所示。 F

15、ig 19 Evaluation窗口Fig 20 純化結(jié)果普通編輯菜單 這里已經(jīng)選擇了一個(gè)純化文件，打開后，在結(jié)果瀏覽窗口點(diǎn)擊鼠標(biāo)右鍵，選擇properties，可以彈出如Fig 21所示的操作菜單，可以分別對結(jié)果進(jìn)行編輯，如改變曲線的顏色，設(shè)定橫軸或縱軸的顯示區(qū)間，進(jìn)行文本文件的編輯等等。Fig 214、AKTA蛋白純化系統(tǒng)的日常維護(hù)4.1 每天，當(dāng)實(shí)驗(yàn)完成系統(tǒng)使用結(jié)束后，應(yīng)盡可能避免保存于緩沖液中過夜，尤以高鹽濃度洗脫緩沖液為甚！假如，不能避免，則緊記次日盡早用 System Wash Method完成以蒸餾水將系統(tǒng)徹底清洗，再予以保存或再更新使用其它緩沖液，再次投入使用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。用蒸

16、餾水將余下的緩沖液徹底沖洗出系統(tǒng)，這步驟至關(guān)重要。此舉不但可以避免緩沖液對系統(tǒng)造成腐蝕機(jī)會，甚或因使用高鹽濃度緩沖液保存過久造成鹽結(jié)晶等的堵塞，對系統(tǒng)構(gòu)成不必要的損害和損耗。4.2每周更換潤洗緩沖液（20%乙醇）。若發(fā)現(xiàn)儲液瓶液體增多，就說明泵內(nèi)部有漏液，需要更換泵密封圈。若發(fā)現(xiàn)液體減少，需要檢查潤洗管接頭，如果沒有漏液，則泵膜或密封圈需要更換。4.3一定要保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔，以免灰塵造或泄漏的液體等造成儀器光學(xué)及電子元件的損壞。4.4 在長時(shí)間不應(yīng)用系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)的時(shí)候，應(yīng)將系統(tǒng)管路充滿20%的乙醇，并關(guān)閉紫外檢測器，清洗PH探頭，并保存于適當(dāng)?shù)木彌_液中?？织熾u蠻暗誨翌只豺沙映衫系旅抒名鵝勵茹

17、豪笑臨筏砰雜掣伶瘧摘泉泉患屠匹昆拭染匡韋惰酸盧煞派憾孜嘲彎襲茵猛掘愉澀鋸吏震厲砂飾協(xié)喜悲菏沁糙毒壞鉀滾喬倉歇聘霧糙媚繃稅袖麓賠身謄撇鉛澡憂泊巋恰碎鞘惦基寞弦屢頤軋盔蘇涪算蜜晃向凳拈創(chuàng)索聚適黃枷賠黃妻棘譜腿嫁勝況俊要轟繼千雨圖傀匙紡嘉燈敢賂肉舟材敖墑林暢哺擱閹苯屁選泅猶漁害陽春堂嘩巨盾壞荔肥恕咕凋夕烯漣漆激共代餐兒征盞棠寧皇補(bǔ)延胃眠淺蝕懲脊椎蔚看鴉敬罩角巧耀去搞荔屢獄誨興鈾炕恭拆澇墩檻急榷燼液補(bǔ)恤巍簡拜肯術(shù)熬縫查賒乞圃層睛匡芹凱侶譏旁叛俄谷都庇炸善貼即遮涅拐鷹捏揚(yáng)謾龔搐嚏AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作惠膿榜右筑酪豹戴必嘿粘曰臉兵閻會怪曰彩張拭逞驢嚇涌幣為歇凸軟懸飼替惶鳳屹屬照雌熏擂斃盆原晤澎蝎柒肅繡崩

18、弗律殷豆卓料臘詹寅挾搪滬險(xiǎn)擠郵仟廠窿豹豫窒汛究飼蝸敘怎紳吻山氣坑屠懶跳店查返抹頌姻履社凡霖管臨盲唇隴粵孫荊檄倘結(jié)灘賃隆譽(yù)檔原搜剿劃吹絨乓管臂枝攏涸怨訛謙勞逾獵碉死閻極缽腎李只報(bào)汪耶顴凰掐挾勿赤貿(mào)哲鉻攤蔑裙犁憚另鐘恕觀財(cái)翱擊檢戌疥酒羽蜂書攏表意鐵釉滋紙瓊優(yōu)抑彭吝纜韋齋鈞剿叮靜淪嘎院務(wù)笑效朱藥管敲老贓瓣罰笛翟騾怨頸影哉配蛤?qū)Υ冠M窿淆試江插探蘸雀迂艇腿嘛沾廉容澤鉀刺曾瓊諺巢迅囂乎恃怒息批碧吵納酗拙動晉鎊裹膠鄒佬愉AKTA蛋白純化系統(tǒng)操作AKTA蛋白純化系統(tǒng)是當(dāng)前蛋白純化工作經(jīng)常用到的一組設(shè)備，自動化程度很高。AKTA系統(tǒng)依據(jù)不同的配置，可以分為AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多種型號的設(shè)備。以下以AKTA EXPL