實驗六體外抑菌實驗.ppt

1、動物機能學實驗2,編者：陳小軍,實驗內容,實驗一 影響藥物作用的因素 實驗二 藥物代謝動力學實驗 實驗三 處方與藥物的配伍禁忌 實驗四 中毒與解救試驗 實驗五 藥物對離體腸的影響 實驗六 抗微生物藥物的體外抑菌實驗 實驗七 生物堿的提取及其藥敏實驗 實驗八 藥物對離體心臟的影響,實驗六、抗菌藥物的體外抑菌實驗,【實驗目的】 掌握藥敏試驗的方法，了解藥物對常見菌的作用。 意義： 體外抗菌試驗對臨床用藥具有參考價值。 鑒定新藥是否具有抗菌活性。,下一張,主 頁,退 出,上一張,耐 藥 性,抗 菌 作 用,防治作用與不良反應,藥 動 學 過 程,抗 病 力,致 病 力,【實驗原理】,下一張,主 頁,

2、退 出,上一張,【基本原理】 抗菌活性：是指抗菌藥抑制或殺滅病原微生物的能力。 兩種測定方法：體外與體內（化學治療實驗）； 評價指標： （1）最低抑菌濃度（MIC）： 能夠抑制培養(yǎng)基中細菌生長的最低濃度。 （2）最低殺菌濃度（MBC）： 能夠殺滅培養(yǎng)基中細菌的最低濃度。,下一張,主 頁,退 出,上一張,【試劑與器材】 細菌菌液（如金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏桿菌）、藥液（青霉素、鏈霉素、磺胺嘧啶鈉、四環(huán)素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、氫氧化鈉、高壓滅菌器、小試管、試管架、吸管、平皿等。 256/ml青霉素溶液： 藥敏試紙的準備：,下一張,主 頁,退 出,上一張,【實驗步驟】 一

3、、紙片法 以滅菌小棉簽取金黃色葡萄球菌液（每ml約含3億個細菌），注意不宜蘸取過多，以剛浸濕整個棉簽為度，輕輕地從四個不同方向平行交叉劃線，使菌液均勻涂布于整個瓊脂平板上。同樣方法，也可制作大腸桿菌平板備用。,下一張,主 頁,退 出,上一張,二、紙片法 取已經制備好的4種藥敏片：青霉素16萬u/ml 、鏈霉素10萬u/ml 、10%磺氨嘧啶鈉、四環(huán)素0.05g / ml ，放置在已接種細菌的瓊脂平板表面的不同區(qū)域。為了位置間隔準確，最好事先在平皿底用蠟筆作上記號。 將培養(yǎng)皿置37培養(yǎng)24h，觀察紙片周圍有無抑菌環(huán)，并測量抑菌圈的直徑，比較各藥的抗菌效力。樣例如下圖：,下一張,主 頁,退 出,上

4、一張,下一張,主 頁,退 出,上一張,下一張,主 頁,退 出,上一張,實驗結果記錄：抑菌直徑（mm）,下一張,主 頁,退 出,上一張,藥物,沙門氏桿菌,二、試管二倍稀釋法 取滅菌小試管10支，按照1至10編號，排列于試管架上。按照無菌操作，從第一管到第10管，分別加入牛肉膏湯1ml。用吸管吸取256/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反復吹勻；接著從第一管吸出1ml放入第二管同樣吹勻后吸出1ml放入第三管，依次逐管進行稀釋到第管，第10管不加青霉素液，作細菌對照組，第管只加藥物，不加菌液，作為藥物對照組。,下一張,主 頁,退 出,上一張,0.5,0,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0

5、.5,0.5,0.5,葡萄球菌液（ml）,0,棄1,1,1,1,1,1,1,1,1,青霉素（ml）,1,1,1,1,1,1,1,1,1,1,牛肉膏湯（ml）,10,9,8,7,6,5,4,3,2,1,試管號,下一張,主 頁,退 出,上一張,1-8，10各加入培養(yǎng)18 h并用牛肉膏湯稀釋至5107108 cfu/ml的金黃色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24h后，取出觀察細菌生長情況。 以能抑制細菌生長的最小濃度為青霉素對該細菌的最低抑制濃度（MIC）。 最低殺菌濃度（MBC） 結果記錄于下表：,下一張,主 頁,退 出,上一張,記錄實驗結果,下一張,主 頁,退 出,上一張,【注意事項】 1. 接種細菌時要在無菌條件下均勻涂抹；用過的棉簽火焰燒灼后丟棄。 2. 用試管二倍稀釋法測MIC值，稀釋時注意 稀釋的順序；每次移液前注意清洗吸管。 3. 藥敏片之間要間隔適當距離，以免抑菌圈 出現(xiàn)交叉。 4. 四人一組，紙片法每人一個平皿，作四種藥物對一種菌的作用，同組每人所接菌種不同，平皿上做好記號。結果記錄時將本組結果綜合。,下一張,主 頁,退 出,上