生命科學部新產(chǎn)品培訓---分子病理診斷ppt課件.ppt

1、生命科學部部門培訓,分子病理診斷技術 及應用,李貞國藥集團聯(lián)合醫(yī)療器械有限公司,1,病理的發(fā)展過程？,2,人體、染色體、DNA關系？,每個人體細胞內(nèi)有一個細胞核，每個細胞核內(nèi)有46條染色體，每個染色體都蘊含著具有遺傳效應的DNA片段，正是它們決定了我們每個不同的個體。現(xiàn)在，讓我們一起揭開染色體和DNA的結(jié)構(gòu)與功能之謎。,3,PPT模板下載： 行業(yè)PPT模板： 節(jié)日PPT模板： PPT素材下載： PPT背景圖片： PPT圖表下載： 優(yōu)秀PPT下載： PPT教程： Word教程： Excel教程： 資料下載： PPT課件下載： 范文下載： 試卷下載： 教案下載：,目 錄,

2、1.分子病理概述,2.分子病理學實驗室設施與環(huán)境,3.病理科實驗室質(zhì)量管理標準,4.分子病理學常用檢測設備,5.推薦設備型號及預算,6.常用試劑及價格,國藥集團聯(lián)合醫(yī)療器械有限公司,7.經(jīng)濟效益分析,4,分子病理診斷的市場介紹,分子病理診斷的應用范圍,常用分子病理診斷技術,分子病理診斷的現(xiàn)在和未來,5,國外廠家：羅氏診斷（瑞士）、Gen-Probe（Hoiogic）（美國）、QIAGEN（荷蘭）、BD（美國）、西門子（德國）、生物梅里埃（法國）、雅培（美國）、諾華（瑞士）、Cepheid（美國）和貝克曼庫爾特（美國） 國內(nèi)廠家：深圳華大、達安基因、科華生物、上海之江、北京博奧、廈門艾德、湖南圣

3、湘、福州泰普、廣州安必平,6,分子病理診斷的應用范圍,腫瘤易感基因的檢測（Rb1視網(wǎng)膜母細胞瘤；WT1腎母細胞瘤） 腫瘤先關病毒的檢測(HPV病毒與宮頸癌發(fā)生有很大關系） 腫瘤的早期診斷：（K-ras基因突變在結(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌等腫瘤中發(fā)生率高，結(jié)腸癌指導靶向用藥愛必妥，肺癌指導靶向用藥吉非替尼、埃羅替尼） 疑難腫瘤的診斷和分類（T細胞受體基因重排具有鑒別淋巴細胞增生和淋巴瘤，Bcr區(qū)基因重排可對慢性粒細胞性白血病和急性粒細胞性白血病進行鑒別診斷，N-myc和C-myc檢測可對鑒別神經(jīng)母細胞瘤和神經(jīng)上皮瘤有應用價值） 腫瘤的預后監(jiān)測 腫瘤個體化和預見性治療提供依據(jù) 腫瘤的預后判斷：(HER2

4、基因陽性表達表示乳腺癌治療預后不良需要改變治療方案，指導靶向用藥赫賽汀）,7,常用分子病理診斷技術,免疫組織化學技術（IHC)-檢測蛋白質(zhì) 分子原位雜交-檢測DNA、RNA,熒光原位雜交技術（FISH)-檢測DNA、RNA 多聚酶鏈式反應技術(PCR)-檢測DNA、RNA,熒光定量PCR技術-檢測DNA、RNA DNA測序技術-檢測DNA突變,生物芯片技術-檢測DNA、RNA、蛋白質(zhì) DNA印跡技術(southern blot)-檢測DNA,微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測技術（MSI),8,分子病理診斷的現(xiàn)在和未來,未來（突破）,自動化不足（限制檢測通量） 檢測技術難以突破，產(chǎn)品同質(zhì)化嚴重,儀器一體化、自

5、動化、操作簡便 增強研發(fā)能力，革新技術，研發(fā)新品 二代測序技術突破提升，提高檢測速度，降低檢測成本,9,熒光原位雜交技術（FISH),原理：通過熒光標記的DNA探針與細胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交，在熒光顯微鏡下能原位顯示細胞核內(nèi)雜交信號的分子細胞遺傳學技術。 步驟：FISH樣本制備 探針的制備 探針標記 雜交 染色體顯帶 熒光顯微鏡 檢測 結(jié)果分析 在醫(yī)院中的使用：病理科、血液科、婦產(chǎn)科、生殖中心（產(chǎn)前診斷，植入前診斷） 產(chǎn)品種類及廠家品牌：細胞類探針-白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、產(chǎn)前診斷和產(chǎn)后篩查類 實體腫瘤類探針-乳腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、肺癌、軟組織肉瘤、前列腺瘤、甲狀腺癌等方面 實驗室基本要

6、求：環(huán)境-樣本準備區(qū)、暗室（10-15平米左右） 設備-熒光顯微鏡以及熒光成像分析系統(tǒng)、水浴鍋、原位雜交儀、冰箱、離心機、恒溫箱 辦公設備-電腦、打印機 實驗耗材-FISH探針、普通實驗耗材 技術人員：1人,10,實時熒光定量PCR技術,原理：在PCR反應體系中加入熒光基團，通過探針與擴增產(chǎn)物的結(jié)合釋放出熒光信號，再通過專門的儀器對信號進行實時檢測，經(jīng)過軟件分析可以準確計算出目的基因的初始數(shù)量，實現(xiàn)定量檢測。 步驟：提取樣本核酸 反轉(zhuǎn)錄成CDNA 設計引物和探針制備 探針標記 RT-PCR 反應進行 分析熒光實驗圖 應用范圍：臨床疾病診斷、動物疾病檢測、食品安全、科學研究、應用行業(yè) 檢測腫瘤的

7、項目：CEA(mRNA）、 AFP(mRNA）、 UPA(mRNA）、 CK19(mRNA）、CK20(mRNA）、 MDRI(mRNA） 優(yōu)點：特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化，可以在一個試管內(nèi)將目的基因數(shù)小時內(nèi)擴增至百萬倍，可從一根毛發(fā)、一滴血、一個細胞內(nèi)擴增出足量的DNA進行研究和檢測鑒定。 實驗室基本要求：需要避光的暗室；有熒光顯微鏡觀察室 技術人員：1人,11,12,DNA一代測序技術,原理：（sanger雙脫氧核苷酸末端終止法）利用DNA聚合酶，以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設立四種相互獨立的測序反應體系，在體系中加入不同的ddNTP作為鏈延伸終止劑。

8、在測序引物指導下，按照堿基配對原則，每個反應體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過凝膠電泳后，可以讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列。 步驟：測序模板的純化與定量、測序反應、測序反應產(chǎn)物純化與變性、上樣電泳、分析結(jié)果 應用范圍：尋找與疾病相關的突變信息、指導靶向用藥、尋找致病基因、各種基因作用的破解，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量、明白個人基因信息，選擇投保 臨床檢測項目：K-RAS基因突變檢測（結(jié)直腸癌、胃癌、頭頸部癌及肺癌，愛必妥類靶向治療） EGFR基因突變檢測（肺癌，易瑞沙和特羅凱靶向治療） Bcr-Ab1融合基因和C-KIT、PDGFR基因突變檢測（白血病、胃腸道間質(zhì)瘤，格列衛(wèi)靶向治療）

9、 乳腺癌化療、結(jié)直腸腺癌化療的個體化治療方案 技術人員：1-2人,13,DNA二代測序技術,原理：（大規(guī)模平行測序法）單鏈DNA文庫被固定在芯片上并帶有合成引物，用不同顏色的熒光標記四種不同的dNTP，逐一加入DNA芯片上，當聚合酶合成互補鏈時，每添加一種dNTP就會釋放不同的熒光，根據(jù)捕捉的熒光信號并經(jīng)過特定的計算機軟件處理，從而獲得待測DNA的序列信息。 步驟：文庫制備 DNA芯片創(chuàng)建 進行測序 數(shù)據(jù)分析,14,15,？哪種檢測技術才是現(xiàn)在臨床使用最廣的,16,分子病理學實驗室設施與環(huán)境,1. 布局合理，實驗室 各區(qū)域的正確劃分,3. 消防設施安全 消防通道暢通,4. 石蠟組織、DNA樣本

10、的存放,2. 水電、照明、 通風符合 實驗室基本要求,5. 實驗室記錄、操作手冊 等文件存放,7. 安裝生物安全 防護措施,8. 實驗室的清潔 日常消毒、 有相關記錄,6. 實驗室耗材 試劑的存放 廢棄物的處理,17,病理科實驗室質(zhì)量管理標準,衛(wèi)生部【2009】31號文件（病理科建設與管理指南） 2006年6月1日實施的（醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法） 全國各省市的關于臨床病理專業(yè)質(zhì)量檢查及評價標準 美國CAP認可標準 歐洲NordiQC認證標準 國際標準化組織制定并與2003年正式發(fā)布醫(yī)學實驗室的管理標準，ISO15189：2003(醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力的專用要求）,18,IHC,ISH,19

11、,分子病理學實驗室檢測設備,免疫組化染色,所需試劑： 機用緩沖液 機用清洗液 機用抗原修復液 一抗試劑 機用二抗檢測系統(tǒng),20,分子病理學實驗室檢測設備,原位雜交,所需試劑： 原位雜交試劑盒 二甲苯 無水乙醇 PBS清洗液,21,分子病理學實驗室檢測設備,熒光原位雜交 （FISH),HyChrome是一個創(chuàng)新產(chǎn)品，用于完成高溫原位變性和退火雜交探針過程。 HyChrome由一個單獨的平板加熱模塊和一個濕度箱組成：平板加熱模塊的溫度是由一個數(shù)字微處理器來控制，濕度箱為了減少脫水，最終實現(xiàn)高信號和低背景雜交。在一個模塊中完成標本變性和雜交的溫度控制技術以及可能性已被驗證了，該技術以及可能性保證了片

12、子之間溫度的可變性和一個好的再現(xiàn)性,所需試劑： 一抗探針 二抗試劑 蛋白酶 變性液 二甲苯 無水乙醇 PBS清洗液,22,分子病理學實驗室檢測設備,DM2500,熒光顯微鏡部分 數(shù)碼成像系統(tǒng)部分 細胞染色體核型分析軟件 熒光原位雜交分析軟件,23,熒光定量 PCR儀,顯示器,核酸 電泳儀,椅子,空 氣 流 向,擴增和分析區(qū),金屬浴,水槽,離心機,生物安全柜,冰 箱,椅子,空 氣 流 向,樣本制備區(qū),廢液缸,振蕩器,天平,離心機,椅子,試劑準備區(qū),空 氣 流 向,專用走廊,普通 PCR儀,凝膠成像系統(tǒng),核酸提取儀,DNA測序儀,24,分子病理學實驗室檢測設備,核酸提純儀,博日GenePure 核

13、酸提純儀 采用磁珠分離技術，提取過程自動化 多選擇性試劑盒可以從多種樣品材料中分離純化高純度的核酸 省時、省力、高效、準確,25,分子病理學實驗室檢測設備,PCR擴增儀,博日GeneMax,所需試劑： PCR MIX 引物 雙蒸水,26,分子病理學實驗室檢測設備,生物安全柜,高效循環(huán)空氣過濾器 自適應壓力調(diào)整功能 微機控制 大屏幕液晶顯示 配重前窗 環(huán)境安全 配備有紫外燈 照明系統(tǒng),27,分子病理學實驗室檢測設備,離心機,產(chǎn)品特征： 適應于DNA的分離、提純及后處理清潔工作 最大轉(zhuǎn)速達15000rpm 無需手動，自動關門 運行安靜，無碳刷感應電機 溫度范圍：從-20度 到 40度，保證樣品的生

14、物活性 適用于0.25ml到500ml的樣品 運行時間：9h59min，連續(xù)離心,貝克曼 Allegra 25R臺式高速冷凍離心機,28,分子病理學實驗室檢測設備,熒光定量PCR儀,采用熒光實時檢測方式，實現(xiàn)在同一管內(nèi)同時進行擴增和檢測，無須后處理 先進的熱電制冷技術，保證了超高速的熱循環(huán)系統(tǒng)加熱，制冷迅速、穩(wěn)定 穩(wěn)定、準確的 136梯度功能，確保 PCR 條件更優(yōu)化 ，SOAK 的恒溫功能，實現(xiàn)了 PCR 試劑的低溫保存 l對 PCR 擴增全過程進行實時動態(tài)監(jiān)測 線型范圍大，可達到 10 個數(shù)量級的起始 DNA 拷貝數(shù)無需梯度稀釋 無需開啟 PCR 反應管，可避免在 PCR 期間及 PCR

15、之后產(chǎn)物污染，確保結(jié)果準確 多色熒光檢測，在單一反應中取得更多信息 自動化的熱蓋技術，無需手動開/閉，保證熱蓋在不同高度試管使用時的壓力 可打印多個或單個樣本 先進的模塊底部熒光檢測技術，受發(fā)明專利保護 l支持 RS232、USB、Bluetooth 接口,博日LineGene9600,所需試劑： 待測樣本核酸提取試劑盒 待測樣本濃度測定 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 熒光定量PCR試劑盒 其他試劑,29,分子病理學實驗室檢測設備,ABI Step OnepPlus,熒光定量PCR儀,性價比極高的三色/48孔(StepOne)或四色/96孔(StepOnePlus)系統(tǒng) 基于使用壽命長的LED的光學系統(tǒng)，可以

16、檢測多種熒光染料，用于基因表達分析、病原體定量檢測、SNP(單核苷酸多態(tài)性)基因分型、以及陰性/陽性分析等多種實驗 可以進行標準模式和快速模式PCR反應，快速模式可以在40分鐘內(nèi)完成PCR反應 LCD觸摸屏和支持USB存儲，使得系統(tǒng)配置更靈活，并且可以實現(xiàn)無PC操作 具有獨特的VeriFlexTM加熱塊，極大地提高了系統(tǒng)的功能和溫控的精度,30,分子病理學實驗室檢測設備,核酸電泳儀,外形尺寸（LWH）：242132105mm 凝膠板規(guī)格(LW)：8580mm 試樣格：12、15齒，1.0、2.0mm厚 重量：約1Kg 緩沖液總?cè)萘浚杭s500m 適用于鑒定、分離、制備DNA以及測定其分子量。有冷

17、卻裝置，可做雙排膠。此型號適用PCR電泳或RNA電泳。,北京六一電泳儀,31,分子病理學實驗室檢測設備,核酸凝膠成像系統(tǒng),暗箱式，無需暗室，可全天候使用 抽屜式燈箱互換，使用方便，防止污染 具有實時預覽、自動對焦功能 紫外濾光鏡：EB專用超多層鍍膜濾光鏡（M520.75） *兼容tif、jpg、bmp、gif等諸多圖像格式 高清晰度130萬像素攝像頭，高品質(zhì)成像質(zhì)量，遙控電動變焦，智能化控制 專用拍攝軟件與分析軟件一體操作，使“觀察、拍攝、分析一氣呵成 通過USB接口與計算機連接，不觸動計算機內(nèi)部硬件，便于維護和保修 紫外/白光轉(zhuǎn)換屏。 用途：主要用于核酸、蛋白質(zhì)電泳觀察、照像和實驗結(jié)果科學分

18、析。,32,分子病理學實驗室檢測設備,DNA一代測序儀,ABI 3730XL,sanger 法,毛細管電泳分離,電腦熒光檢測,數(shù)據(jù)分析可得到DNA堿基序列,性能特點：,毛細管規(guī)格: 96道毛細管 毛細管長度: 50cm 凝膠的規(guī)格: POP-7液體分離膠 配套的試劑: 基因測序(BigDye3.1v和5Sequence buffer) 基因分型(Liz120, Liz500, ROX500) 基因測序及分型的運行時間 時間：96樣本 2h 通量：（94-96）/384*12 優(yōu)點： 方法可靠、準確度高,且已形成規(guī)?；?缺點： 測定通量低，成本高 讀長：700-900bp,33,分子病理學實驗室檢測設備,DNA二代測序儀,Illumina GA,循環(huán)芯片技術,技術特點： 測序通量高：每個測序反應能達到3G以上的數(shù)據(jù)通量； 準確率高： 98.5%，同時也有效地解決了多聚重復序列的讀取問題； 低成本：比傳統(tǒng)毛細管測