《免疫學診斷與防治》PPT課件

1、免疫學診斷和防治，海南醫(yī)學院微生物學和免疫學教研室的制作，版權所有2009，免疫學診斷，一，抗原或抗體的檢測，二，淋巴細胞的檢測，三，免疫學檢測方法的應用，(一)抗原抗體反應的原理，免疫學診斷，一鍵力大和親和力強，難解離，反之亦然。 (3)適宜的條件2、抗原抗體反應的可見性抗原抗體以適宜的比例結合，形成肉眼可見的現(xiàn)象。 應用1、已知抗原檢測未知抗體；(1)檢測病原微生物相應抗體輔助診斷疾?。簜摗⒘餍行砸倚湍X炎、AIDS病等。 (2)自身抗體診斷自身免疫病的檢測： SLE、類風濕性關節(jié)炎等2種，在已知抗體中檢測未知抗原；(1)病原菌的鑒定：診斷疾病；(2)腫瘤相關抗原的檢測：檢測甲氧西林診斷

2、肝癌；(3)血型抗原、HLA抗原：凝集反應、沉淀反應、補體相關的抗原抗體反應免疫標記技術； 凝集反應(agglutination )、顆粒性抗原(紅血球、細菌、乳膠粒子等)與抗體特異性結合，形成肉眼可見的凝集塊。 1、直接凝聚(direct agglutination )玻璃片凝聚、試管凝聚2、間接凝聚(indirect agglutination )可溶性抗原被乳膠粒子或紅細胞表面包圍，與相應的抗體混合出現(xiàn)的凝聚現(xiàn)象。 3 .抗球蛋白試驗(Coombs試驗)抗原與一價抗體(不完全抗體)結合不出現(xiàn)凝聚塊，加入抗球蛋白后形成凝聚塊。 用于檢測抗Rh抗體以診斷新生兒溶血性貧血。 直接凝聚、乳膠顆粒

3、、紅細胞、風濕因子檢測妊娠試驗、間接凝聚、直接凝聚、(2)沉淀反應、(1)單向免疫擴散可溶性抗原(免疫球蛋白、細胞裂解物、組織浸液等)與相應的抗體結合，形成不溶性多在半固體瓊脂凝膠上進行，形成白色沉淀。 沉淀環(huán)、抗體與瓊脂凝膠混合而成板，環(huán)直徑與抗原含量呈正相關，常用于2，雙向免疫擴散：抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原相關分析。 有一致、部分一致、不一致、多種成分、3、免疫電泳(immunoelectrophoresis )，常用于血清蛋白的種類分析，觀察Ig的異常增加或缺損。 如骨髓瘤及性連低c型球蛋白血癥的診斷，4，免疫比濁法(immunonephelomtry ) :快速簡便。 用于

4、血清IgG、IgA、IgM、補體C3、C4含量的測定，(3)與補體相關的抗原抗體反應，1，50 %補體溶血試驗(CH50測定)血清總補體量的測定，(2)補體結合試驗(complemeem )原理：用已知的指示系統(tǒng)檢查測試系統(tǒng)是否與補體結合診斷，測試原理？ 檢測系統(tǒng)：待測樣品和已知抗原(或抗體)，指示系統(tǒng)： SRBC和溶血素、溶血陰性； 不溶血的陽性可通過用標記物標記抗體或抗原進行抗原抗體反應提高免疫學診斷的敏感性，熒光素：異硫氰酸熒光素(黃綠色熒光)、藻紅蛋白、若丹明(紅色熒光)、放射性同位素： 125I、131I，酶：辣根過氧化物酶液相(ELISA )、固相(免疫組化技術)、直接熒光法、間接

5、熒光法、間接ELISA、雙抗夾心法、酶免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbentassion )。 用于抗原抗體及DNA、RNA的檢測。 蛋白和某些微生物中的蛋白質(zhì)、抗細胞因子的抗體包復、(1)、(2)、(3)、(4)、抗原包復可用于測定起到細胞分泌作用的單一細胞因子，也可測定分泌特異性抗體的b細胞的度數(shù)。 放射免疫檢查法(RIA ) :靈敏度達到了pg水平。 常用于胰島素、生長激素、甲狀腺激素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛等藥物及IgE等微量物質(zhì)的測定。 可分離分子大小不同的蛋白質(zhì)，確定其分子量，常用于多種病毒的抗體和抗原，如抗HIV抗體的檢測。二、淋巴細胞的測定、(一)淋

6、巴細胞的分離和類型鑒定、一、淋巴細胞的分離：外周血葡聚糖泛影葡萄糖密度梯度離心法、白膜層、單核細胞、淋巴細胞、b、t、CD3、CD4、CD8單克隆抗體測定患者外周血t細胞表面的對應抗原CD3 T細胞修正CD4 CD4 T細胞、CD4 T細胞數(shù)。 CD8 CD8 T細胞通過校正CD8亞群t細胞數(shù)來校正CD4 /CD8的比例，健康人PMB中t細胞占6575% CD4 /CD8約1.52，(3)流式細胞術，2，淋巴細胞的mIgM， mIgD單克隆抗體可檢測檢測出患者外周血b細胞表面相應抗原的b細胞數(shù)目，(2)串珠分離法：抗CD4交聯(lián)玻璃珠可以分離t細胞中的CD4 T細胞和CD8 T細胞。 健康人外周

7、血中的SmIg細胞占812%，流式細胞儀、(二)淋巴細胞功能測定、1，t細胞功能測定、(1)T細胞增殖試驗(淋巴):絲裂原、抗CD3單克隆抗體等異?；罨痶形態(tài)學觀察法3H-TdR滲透法：用液體閃爍器進行樣品的放射線放射(2)淋巴細胞介導的細胞毒試驗(lmc)ctl、NK、LAK、TIL細胞殺傷目標細胞的功能，51Cr放出法細胞凋亡檢查法： TUNEL法(tdtdependentdutp-biotinnickendlabeling )，F(xiàn)ACS測定法，(3)細胞毒試驗(LMC )。 IL-2、IL-2R、rIFN、TNF等的檢測ELISA法生物活性測定法聚合酶鏈反應(PCR )法，(2)抗體形成

8、細胞測定溶血空斑試驗(hemolytic forming cell assay，hemolytic forming cell assay檢查) ELISPOT法檢測特異抗體形成細胞，3，體內(nèi)免疫細胞功能測定：皮膚試驗，(1)遲發(fā)型超敏反應：原結核菌素試驗(OT試驗)皮試()細胞免疫功能缺損免疫調(diào)節(jié)(immunomodulation )利用物理、化學和生物學手段調(diào)節(jié)機體免疫功能，增強或減弱原來的免疫功能。 免疫重建(immunoreconstitution )將免疫功能正常的個體造血干細胞或淋巴細胞移植到有免疫功能缺陷的個體中，使后者的免疫功能全部或部分恢復。 分類，一、免疫增強療法和免疫抑制療

9、法，三、主動免疫治療(active immunotherapy )和被動免疫治療(passive immunotherapy )，二、特異性免疫治療和非特異性免疫治療，抗體為2 .胎盤(c種)球蛋白：被動預防感染，c種球蛋白3 .抗菌免疫血清：效果不顯著4、抗病毒免疫血清：病毒感染預防5、抗淋巴細胞蛋白：淋巴細胞抑制。 用于防止器官移植排斥反應和自身免疫性疾病的治療。 二、單克隆抗體(mAb )、1、抗細胞表面分子的單克隆抗體：抗CD3單克隆抗用于治療急性移植排斥反應；2、抗細胞因子的單克隆抗體：抗IL-1、抗TNF單克隆抗可減輕炎癥反應； 用于治療類風濕性關節(jié)炎等的3 .抗體誘導藥物治療(靶

10、向治療):以特異性單抗為載體，承載化學藥物(阿霉素、甲氨喋呤等)、毒素(賴氨酸等植物毒素，白喉毒素等細菌毒素)、同位素(131I，125I，111In )等細胞毒性物質(zhì)基因工程抗體：降低抗體的免疫原性，1、嵌合抗體、2、人源化抗體、3、完全人源化抗體、4、單鏈抗體、二價抗體、雙特異性抗體、抗原為2 .抗原以分子或片段的形式進行免疫治療：表面抗原疫苗、核酸疫苗或DNA疫苗以疫苗、細胞因子及其拮抗劑為基礎的免疫治療，1、細胞因子補充和添加療法：重組細胞因子作為免疫應答調(diào)制劑(BRM )治療腫瘤、感染、造血障礙等。 干擾素、IL-2、TNF、CSF、EPO等2、細胞因子阻斷和拮抗療法：自身免疫性疾病

11、的治療、移植排斥、感染性休克等。 如TNF單抗、IL-1R拮抗劑等。 3、細胞因子基因療法：細胞因子轉基因技術、細胞基礎免疫治療、1、骨髓移植(1)自體骨髓移植(2)異體骨髓移植(3)臍血干細胞移植、2、免疫效果細胞(1)同種淋巴細胞被動轉移：注意配合外周血淋巴細胞在體外培養(yǎng)IL-2后誘導產(chǎn)生其殺傷腫瘤細胞不需要抗原致敏，無MHC限制性。 主要是NK細胞、til (tumorinfiltratinglymphocytes )細胞腫瘤浸潤淋巴細胞。 從實體腫瘤組織中分離得到，體外il2培養(yǎng)后，殺傷活性比LAK細胞強。 cik (cytokininductivekillercells )細胞因子誘

12、導的殺傷細胞。 在抗CD3mAb中活化，是由il2、tnf及tnf等組合而成的細胞因子。 支持外周血單核細胞的增殖和向CD3 CD56殺傷細胞的分化，具有比LAK更強的殺傷活性。(1)免疫增強劑、化學制劑： 1、左旋咪唑2、西咪替丁、微生物制劑： 1，BCG) 2、棒狀桿菌3、微生物提取物、中藥制劑：黃芪、人參、枸杞子等適應證：免疫功能下降患者；(1)惡性腫瘤；(2)免疫缺陷癥；(3)感染癥，副作用：輕烷基化劑：環(huán)磷酰胺2，抗代謝藥：激素：糖皮質(zhì)激素激素真菌代謝產(chǎn)物1中藥及其有效成分雷公藤多甙，免疫抑制藥的適應癥和副作用，適應癥：免疫功能過高而引起機體障礙的患者1，抗移植排斥2，超感受性反應性

13、疾?。杭に?， 自身免疫性疾病：激素、雷公藤多甙4，感染性炎癥：激素，副作用：明顯主要包括骨髓抑制、肝腎毒性等抑制滅活疫苗(死亡疫苗)和弱毒疫苗。 麻疹疫苗、小兒麻痹疫苗、乙肝疫苗等。 類毒素是用甲醛減毒細菌毒素調(diào)制而成的具有免疫原性的物質(zhì)。 例如喉類毒素、破傷風類毒素。 (二)人工被動免疫是將含有特異性抗體的免疫血清、細胞因子等制劑注射到人體內(nèi)，治療或緊急預防感染的措施。 抗毒素、人免疫球蛋白制劑、細胞因子制劑、單抗制劑等。 (1)人工主動免疫(artificial active immunization )是用疫苗、類毒素接種機體，產(chǎn)生特異性免疫，預防感染的措施。 一、人工免疫，(三)訂正免疫，productionofanattenuatedorganism，Pathogenic virus，Isolate virulence gene，delete productionofatoxoidfrom