適宜技術應對結(jié)核感染

1、1，1 .結(jié)核病背景資料2 .結(jié)核病病原學實驗室診斷3 .體外r-干擾素釋放試驗4 .小結(jié)2 .背景結(jié)核病流行現(xiàn)狀全球三分之一(20億)感染結(jié)核菌中國肺結(jié)核患者達50億人潛伏感染、復發(fā)、細菌向人體復制、播種disseminn 發(fā)作Onset、康復恢復、時間表、診斷診斷、治療Treatment新型抗結(jié)核藥物(50% )、新型快速診斷技術(40% )、新型結(jié)核疫苗(10% )、JID 2012:205 (Suppl 2)、S147 . 1882年，德國細菌學家科霍(Robert Koch )證實結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核的病原菌。 本菌可侵犯全身各組織器官，但肺部感染最多。 在微生物分類上，結(jié)核分枝桿菌屬

2、于放線菌門、放線菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬分枝桿菌復合群的有人型、牛型、非洲型和田鼠型，人型結(jié)核分枝桿菌是人的主要病原菌。 (2)結(jié)核菌無內(nèi)毒素和外毒素，也不產(chǎn)生侵襲性酶，其致病性主要與細胞壁含有大量脂質(zhì)有關。 主要是磷脂：刺激單核細胞增殖，結(jié)核結(jié)節(jié)與干酪樣壞死形成相關的分枝菌酸：與抗酸染色性相關的索狀因子：破壞細胞線粒體膜，慢性肉芽腫形成相關的硫酸腦苷酯：抑制食溶體形成，具有抗蝕作用蠟質(zhì)d，刺激生物體的延遲型超敏反應(3)結(jié)核菌主要引起細胞免疫反應，屬于傳染性免疫，7，背景結(jié)核患者發(fā)現(xiàn)，癥狀：肺結(jié)核可疑癥狀者，主要有咳嗽、咳痰2周以上者，或有咯血癥狀者發(fā)現(xiàn)方式：原因病的就診、轉(zhuǎn)診

3、和原因病的推薦是發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者的主要方式. 背景-結(jié)核實驗室的任務provideearlyandaccuratediagnosis早期提供正確的診斷initiationofrighttreatmentandinterventionearly制定正確的治療方案， 早期介入monitoringtherapyefficacyinapromp的t manner的快速監(jiān)測療效treatmentanddiagnosiscompanionintuberculosisdrugdevelopment與抗結(jié)核藥的開發(fā)同時、10、結(jié)核病實驗室的診斷技術概要、1 .結(jié)核抗體2 .結(jié)核蛋白芯片3 .體外r-干擾素試驗4

4、 .結(jié)核桿菌分泌抗原、1 .涂片2 .培養(yǎng)3 .藥敏4 .菌型鑒定、細菌學、免疫學、分子生物學，其他1.HPLC 2. 結(jié)核分枝桿菌形態(tài)學檢查，1 .直接涂抹法2 .離心切片法，1 .抗酸染色2 .熒光染色，1 .普通顯微鏡2 .熒光顯微鏡3 .自動讀影技術，結(jié)核菌形態(tài)學檢查-離心切片技術，2015年7月至2015年15月結(jié)核菌形態(tài)學檢查-自動讀影技術，2016年2月至2016年3月， 我院對308例涂膜進行人工讀影和校正機自動讀影對比試驗的結(jié)果為286例，綜合適合率為92.58%。、14、結(jié)核病診斷金標準結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、 分枝桿菌全自動連續(xù)檢測系統(tǒng)-BACTEC MGIT 960操作簡單安

5、全可靠性性能優(yōu)異的高性能價格比m=mycobacterium g=growthi=indica tte檢測對象CO2 O2檢測手段顏色熒光發(fā)光元素培養(yǎng)基改良Middle Brook 7H9營養(yǎng)添加劑抗菌劑安全、結(jié)核病診斷金標準結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、簡單的工作流程、17、結(jié)核病診斷金標準結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、BACTEC MGIT 960陽性結(jié)果判定1 .抗酸染色2 .普通培養(yǎng)血液平板3.MPB64抗原檢查、18、結(jié)核病診斷金標準結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、BACTEC 9120只能進行血液培養(yǎng)。 標本：血液，無菌體液，我可以！ 普通細菌真菌分枝桿菌，19，結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗，結(jié)核桿菌體外藥敏試驗，MIC測

6、定法，固體培養(yǎng)法，液體儀器法，液體微量法判斷的閾值是1%藥敏試劑為： SIRE Kit (Streptomycin，Isoniazid， Rifampin and Ethambutol) 4-13日pza工具包4-21日siresusceptibibity在內(nèi)的I， e (在低濃度耐藥品性的情況下，可用于高濃度試驗)、BACTEC MGIT 960藥敏系統(tǒng)、 21、結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗、MGIT Plastic Tubes、mgit plastic tubes ba ctec 960 pza kit， 960 direct LIS、BACTEC 960 for GD、手動鏡頭、BACTEC

7、 460TB、BACTEC 9000MB， 2003 bdisalways epicenter for the 960， 22，結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗，drugfreeisoniazidethambutolinoculummedia0.2mcg/ml2.0mcg/ml10-310-52690 % resistant 34.60.1 interpretationresistantsusceptible，23，結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗， 收集了結(jié)核分枝桿菌液體微量藥敏、結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗、結(jié)核分枝桿菌液體微量顯色法藥敏試驗我院2015年8月至11月臨床分離菌株511例，采用液體微量顯色法分

8、析利福平、異煙肼、鏈霉素、乙醇、卷曲、25、結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗、結(jié)核分枝桿菌液體微量顯色法藥敏試驗對比試驗收集臨床分離菌株和國家參比室質(zhì)量控制菌株117例，采用液體微量顯色法和羅氏比例法分別用利福平、異煙肼、鏈霉素、乙醇醇、卡霉素、氧氟沙星、乙基乙基收集了結(jié)核分子生物學診斷、一、結(jié)核分枝桿菌探針溶解曲線技術、27、結(jié)核分子生物學診斷、結(jié)果判斷、結(jié)核分子生物學診斷、我院樣品庫臨床分離菌株154例，經(jīng)溶解曲線法耐藥性基因突變分析以及羅氏比例法耐藥性試驗，對耐藥性結(jié)果不一致的11株菌進行基因序列、29、結(jié)核分子生物學診斷、二、結(jié)核分枝桿菌RNA檢測(TB-RNA) RNA作為臨床分子診斷靶的優(yōu)

9、點： RNA拷貝數(shù)DNA拷貝數(shù)更有臨床意義的：生命力旺盛的病原體RNA轉(zhuǎn)錄活躍RNA遠不如DNA，導致病原體死亡， RNA快速降解的結(jié)核分子生物學診斷，修訂了今年我院住院患者179例，分析涂膜、培養(yǎng)和TB-RNA檢測報告，我院涂膜、培養(yǎng)陽性率分別為15.1%和37.9%。 TB-RNA的總陽性率為35.8%。31、結(jié)核分子生物學診斷、三、EasyNAT TB-DNA檢測(恒溫擴增法)原理：將病原體DNA擴增、核酸雜交和核酸試紙條檢測三項技術有機一體化，恒溫擴增反應中加入了兩對TB特異性引物、一對特異性探針，同時完成的檢測對象片段：的目標是結(jié)核、32、結(jié)核分子生物學診斷、操作規(guī)程、結(jié)核分子生物學

10、診斷，2015年6月，我科參加了CTCTC“EasyNAT結(jié)核分枝桿菌核檢試劑盒現(xiàn)場應用評價”項目，結(jié)果如下：注*:1例培養(yǎng)陽性最終鑒定為非結(jié)核分枝桿菌。 四、Gen-Xpert MTB/RIF可將進行標本處理、實時PCR和利福平耐藥性檢測的完整平臺痰標本直接裝入模塊，無需與任何試劑混合處理即可實現(xiàn)標本液化、去污、富集、DNA提取、rpoB實時放大、 結(jié)核分子生物學診斷，Xpert MTB/RIF和PCR TB-DNA檢測的比較：陽性符合率99.03，陰性符合率92.61，總符合率95.31，36，結(jié)核分子生物學診斷，涂膜陽性肺結(jié)核3360xpert檢查率結(jié)核分子生物學診斷，Xpert MTB

11、/RIF和BD960液體培養(yǎng)比較實驗：陽性適合率95.52，陰性適合率95.51，總適合率=95.51，結(jié)核分子生物學診斷，Xpert MTB/RIF和比例法藥敏比較實驗：陽性適合率96 39，結(jié)核分子生物學診斷，WHO關于Xpert MTB/RIF的建議Xpert MTB/應采用RIF作為MDR-TB的高風險組，早期發(fā)現(xiàn)并有效控制疫情MDR-TB患者。 Xpert MTB/RIF在MDR和HIV問題不嚴重的地區(qū)，可以用于基于顯微鏡檢查的后續(xù)檢查，特別是涂陰標本的進一步檢查。40、體外r干擾素釋放試驗、蛋白水平、結(jié)核菌素試驗(TST )、T-SPOT.TB，quantiferon-tbgold

12、in-tube (qft-tube )特異性僅對結(jié)核分枝桿菌復合組敏感，大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗(BCG ) 與無交叉反應的美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306 )國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508 )敏感度幾乎對免疫力下降/無法抑制的肺外結(jié)核患者具有高檢出率的美國FDA數(shù)據(jù)：敏感度95.6%(175/183 )國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：敏感度95.3 43、體外r干擾素釋放試驗、實驗效果圖避免臨床無效藥品檢驗靈敏度的提高有利于臨床對結(jié)核病的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，避免疾病的傳播和擴散提前48小時產(chǎn)生結(jié)果，45、體外r干擾素釋放試驗、陰性結(jié)果對患者體內(nèi)結(jié)核菌的特異效果假陰性結(jié)果：感染

13、階段不同的少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/疾病實驗工作不正常。陽性結(jié)果提示患者體內(nèi)存在對結(jié)核菌特異效應t細胞，患者存在結(jié)核感染。 但是，是否為活性結(jié)核癥，有必要結(jié)合臨床癥狀及其檢查指標進行綜合判斷。 假陽性結(jié)果：感染4種環(huán)境分枝桿菌時： M.kansasii(堪薩斯)、M.szulgai (蘇)、M.marinum (海)、M.gordonae (戈登)。 WHO 2014潛伏結(jié)核感染管理指南： 1、在HIV感染者、與肺結(jié)核患者密切接觸的成人和兒童、開始接受抗腫瘤壞死因子(TNF )治療的患者、接受透析治療的患者、準備接受器官或血液移植的患者以及矽肺患者中開展LTBI系統(tǒng)檢查和治療。 LTBI檢查推薦使用干擾素釋放試驗(IGRA )或結(jié)核菌素皮試驗(TST )。 2 .對監(jiān)護權、醫(yī)療從業(yè)者、結(jié)核病高負擔國家的移民、流浪漢、吸毒者，可以有條件地開展LTBI系統(tǒng)的檢查和治療。 3 .對于糖尿病人、酒精依賴者、吸煙中毒者、低體重者，如果他們不屬于上述1和2的情況，則不建議通常開展LTBI的系統(tǒng)檢查。47、體外r干擾素釋放試驗、LTBI篩選和診斷提案流程、48、體外r干擾素釋放試驗、Menzies等人在200