革蘭陽(yáng)性球菌課件

1、革蘭陽(yáng)性球菌,1,學(xué)習(xí)交流PPT,革蘭陽(yáng)性球菌,是指革蘭染色為陽(yáng)性的一群球菌，與醫(yī)學(xué) 有關(guān)的兼性厭氧球菌有9屬 通常引起化膿性感染，故又稱化膿性球菌（pyogenic cocci） 本章主要介紹 葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬。 專性厭氧球菌在第十六章厭氧菌中介紹。,2,學(xué)習(xí)交流PPT,第一節(jié) 葡萄球菌屬,葡萄球菌屬（Staphylococcus）在自然界廣泛分布。 存在于人和動(dòng)物的皮膚黏膜上的菌株 可致多種化膿性感染 癤、癰、膿腫、菌血癥等 燙傷樣皮膚綜合癥 毒性休克綜合癥,3,學(xué)習(xí)交流PPT,一、分類,葡萄球菌屬目前有35個(gè)種、17個(gè)亞種 凝固酶 凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌 凝固酶陰性葡萄球菌 （

2、Coagulase negative staphylococcus, CoNS ） 噬菌體分型 可將金黃色葡萄球菌分成45群26型 質(zhì)粒分型、血清學(xué)分型、抗生素分型和細(xì)菌DNA的RFLP或PFGE分型，用來(lái)研究細(xì)菌的致病性、耐 藥性、流行病學(xué)特點(diǎn)和細(xì)菌鑒別的關(guān)系,4,學(xué)習(xí)交流PPT,分類,引起人類疾病的重要菌種有 金黃色葡萄球菌（S.aureus） 表皮葡萄球菌（S.epidermidis） 頭狀葡萄球菌（S.capitis） 人葡萄球菌（S.hominis） 腐生葡萄球菌（S.saprophyticus） 其余尚有一些能在人體中分離到 溶血葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、

3、施氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌、中間葡萄球菌等。,5,學(xué)習(xí)交流PPT,二、臨床意義,凝固酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌是人類重要致病菌 可引起社區(qū)和醫(yī)院感染 感染常以急性、化膿性為特征，如果未經(jīng)有效治療，感染可擴(kuò)散至周圍組織或經(jīng)菌血癥轉(zhuǎn)移至其他器官 常見(jiàn)的感染 癤、癰、外科切口、創(chuàng)傷等局部化膿性感染和骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、菌血癥等全身性感染,6,學(xué)習(xí)交流PPT,臨床意義,致病性主要與各種侵襲性酶類和多種毒素有關(guān) 腸毒素引起食物中毒，表現(xiàn)為急性胃腸炎 噬菌體II群產(chǎn)生的剝脫毒素（或稱表皮溶解素）可引起人

4、類燙傷樣皮膚綜合征 多見(jiàn)于新生兒、幼兒和免疫功能低下的成人 皮膚呈彌漫性紅斑和水皰形成，繼以表皮上層大量脫落 由噬菌體群產(chǎn)生的毒性休克綜合征毒素-I（Toxic shock syndrome toxin I, TSST-1） 屬超抗原家族，刺激T細(xì)胞誘發(fā)TNF和IL-1 可致機(jī)體多個(gè)器官的功能紊亂或引起毒性休克綜合征(TSS),7,學(xué)習(xí)交流PPT,臨床意義,CoNS是人體皮膚黏膜正常菌群之一 是醫(yī)院感染的主要病原菌 表皮葡萄球菌 人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導(dǎo)管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等 腐生葡萄球菌 女性尿路感染的重要病原菌 其他凝固酶陰性葡萄球菌 重要的條件致病菌和

5、免疫受損患者的感染菌 產(chǎn)生莢膜多糖或糖萼有關(guān) 增強(qiáng)細(xì)菌與外來(lái)物質(zhì)（生物性瓣膜、導(dǎo)管等）表面的粘附或在其表面形成一層生物膜而保護(hù)細(xì)菌對(duì)抗殺菌物質(zhì)作用。,8,學(xué)習(xí)交流PPT,三、生物學(xué)特性,直徑0.51.5m、革蘭陽(yáng)性球菌 呈單個(gè)、成雙、短鏈（液體培養(yǎng)基或膿汁中）或成簇排列呈葡萄串樣，無(wú)鞭毛和芽胞，某些菌株能形成莢膜 在金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁有葡萄球菌A蛋白，具有抗原性 大多為兼性厭氧菌,對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適生長(zhǎng)條件3537，pH7.47.6。普通培養(yǎng)基上形成直徑23mm不透明的圓形凸起菌落 產(chǎn)生金黃色、白色、檸檬色等非水溶性色素附著在菌落上。,9,學(xué)習(xí)交流PPT,生物學(xué)特性,金黃色葡萄球菌血瓊脂

6、平板上菌落周圍有透 明溶血環(huán)。能在含10%15% NaCl瓊脂中生長(zhǎng) 該菌的抵抗力比其他無(wú)芽胞細(xì)菌強(qiáng)，耐干燥 近年來(lái)耐藥性增強(qiáng)，對(duì)多種抗菌藥物不敏感 生化反應(yīng)活潑、能分解多種糖類和蛋白質(zhì)， 觸酶陽(yáng)性 該屬細(xì)菌DNA G+C mol% 為3039,10,學(xué)習(xí)交流PPT,酶和毒素,葡萄球菌屬產(chǎn)生多種酶和毒素 產(chǎn)生2種血漿凝固酶 結(jié)合凝固酶或聚集因子 是結(jié)合在菌體表面的凝固酶，能與血漿中的纖維蛋白原交聯(lián)使菌體快速凝集 游離凝固酶 是細(xì)菌分泌到菌體外的凝固酶，能被血漿中的協(xié)同因子（cofactor）激活形成復(fù)合物，再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，而使血漿凝固,11,學(xué)習(xí)交流PPT,酶和毒素,耐熱核酸酶

7、葡萄球菌溶素 有、等 破壞紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板以及肝細(xì)胞等 腸毒素 是一組對(duì)熱穩(wěn)定的可溶性蛋白質(zhì)，耐熱100 30min ,分子量為2630kDa，能夠抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用 根據(jù)抗原性和等電點(diǎn)的不同可分為A、B 、C1、C2、 C3、D、E、G和H等9個(gè)血清型，以A、D 型多見(jiàn) 編碼腸毒素基因大多位于染色體上（D型由質(zhì)粒編碼）,12,學(xué)習(xí)交流PPT,酶和毒素,毒性休克綜合征毒素 透明質(zhì)酸酶、磷脂酶、觸酶、殺白細(xì)胞 素和表皮剝脫毒素等 攜帶誘導(dǎo)性的青霉素酶和乙?；D(zhuǎn)移酶質(zhì)粒，通過(guò)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移 部分菌株通過(guò)獲得外源性的macA基因而 產(chǎn)生青霉素結(jié)合蛋白2a（PBP2a），導(dǎo)致對(duì)所有

8、內(nèi)酰胺類抗生素耐藥,13,學(xué)習(xí)交流PPT,四、微生物檢驗(yàn) （一）檢驗(yàn)程序,14,學(xué)習(xí)交流PPT,（二）標(biāo)本采集,根據(jù)感染的部位，采集不同的標(biāo)本。 該屬細(xì)菌廣泛分布在人體皮膚和黏膜，采取時(shí)避免病灶周圍正常菌群污染。,15,學(xué)習(xí)交流PPT,（三）標(biāo)本直接檢查,無(wú)菌體液如腦脊液和關(guān)節(jié)穿刺液可使用涂 片、革蘭染色后直接顯微鏡檢查，查見(jiàn)細(xì)菌 具有重要臨床價(jià)值。 其他體液標(biāo)本如同時(shí)伴有炎性細(xì)胞時(shí)則直接 顯微鏡檢查結(jié)果也具有參考價(jià)值。 涂片檢查發(fā)現(xiàn)有形態(tài)相似的革蘭陽(yáng)性球菌， 則可初步報(bào)告“查見(jiàn)類似葡萄球菌屬革蘭陽(yáng)性 球菌”，并進(jìn)一步進(jìn)行分離和鑒定予以證實(shí)。,16,學(xué)習(xí)交流PPT,（四）分離培養(yǎng)與鑒定,膿液、

9、分泌物等 接種于血瓊脂平板 有污染的標(biāo)本如糞便等 應(yīng)接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板 血液標(biāo)本則用肉湯增菌培養(yǎng)基,17,學(xué)習(xí)交流PPT,葡萄球菌屬內(nèi)各菌種鑒定方法,18,學(xué)習(xí)交流PPT,1.菌落性狀,金黃色葡萄球菌 直徑68mn，金黃色或橙色，菌落周圍出現(xiàn)或不出現(xiàn)透明溶血環(huán) 表皮葡萄球菌 直徑為56mm，某些產(chǎn)粘液菌株能粘附在瓊脂平板表面，無(wú)色或白色 溶血葡萄球菌 直徑59mm，不透明，無(wú)色素或奶油色、黃色 里昂葡萄球菌 直徑47mm，邊緣整齊稍扁，奶色、黃色和沃氏葡萄球菌相似 腐生葡萄球菌 直徑58mm，白色或檸檬色 菌落外觀疑為葡萄球菌者應(yīng)進(jìn)行革蘭染色證實(shí) 甘

10、露醇高鹽平板上金黃色葡萄球菌菌落為黃色,19,學(xué)習(xí)交流PPT,2凝固酶試驗(yàn),有玻片法和試管法兩種 玻片凝固酶試驗(yàn)-測(cè)定結(jié)合型凝固酶 試驗(yàn)時(shí)挑取少數(shù)菌落培養(yǎng)物（不能用生 長(zhǎng)高鹽瓊脂上的菌落）加入1滴血漿，10 秒內(nèi)觀察細(xì)菌聚集和凝塊形成 金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn) 陽(yáng)性反應(yīng),20,學(xué)習(xí)交流PPT,2凝固酶試驗(yàn),試管凝固酶試驗(yàn)-測(cè)定分泌型凝固酶 以孵育過(guò)夜的牛心腦浸液肉湯培養(yǎng)物和血漿在37水浴中孵育4h，觀察凝塊形成。如試驗(yàn)結(jié)果為陰性者再置室溫1824h，因某些菌種（中間葡萄球菌、豬葡萄球菌）的凝集出現(xiàn)所需時(shí)間長(zhǎng)于4h 必須注意 某些菌株產(chǎn)生的葡激酶在延長(zhǎng)孵育時(shí)間后可使凝塊溶解使之產(chǎn)生假陰

11、性 若使用的不是無(wú)菌血漿可產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果； 細(xì)菌不是純培養(yǎng)物或污染可導(dǎo)致假陽(yáng)性,21,學(xué)習(xí)交流PPT,3耐熱核酸酶試驗(yàn),大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。 表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。,22,學(xué)習(xí)交流PPT,4磷酸酶試驗(yàn),大多數(shù)的表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌和豬葡萄球菌為陽(yáng)性。 將待測(cè)菌種點(diǎn)種在加有硝基酚磷酸鹽的pH5.66.8 MH瓊脂上，孵育1824h，菌落周圍出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性。,23,學(xué)習(xí)交流PPT,5吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗(yàn),溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中間葡萄球菌為陽(yáng)

12、性。 將孵育24h斜面培養(yǎng)物接種在含吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）肉湯中，使細(xì)菌濃度調(diào)整為2號(hào)麥?zhǔn)瞎軡岫龋?5孵育2h，加入PYR試劑后2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)深紫紅色為陽(yáng)性。,24,學(xué)習(xí)交流PPT,6其他鑒定試驗(yàn),常用的葡萄球菌屬種間細(xì)菌的鑒定生化試驗(yàn) 鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)、-半乳糖苷酶、3-羥基丁酮酸試驗(yàn)、新生霉素敏感試驗(yàn)、多粘菌素B耐藥試驗(yàn)、糖產(chǎn)酸試驗(yàn),25,學(xué)習(xí)交流PPT,（五）腸毒素檢測(cè),動(dòng)物學(xué)試驗(yàn) 經(jīng)典的方法是采用幼貓腹腔注射(肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物)，4h 內(nèi)發(fā)生嘔吐腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象者，提示金黃色葡萄球菌腸毒素存在 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)或ELISA法測(cè)定 用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測(cè)定待測(cè)標(biāo)本中的金黃

13、色葡萄球菌腸毒素與相應(yīng)抗毒素在瓊脂糖中進(jìn)行雙相擴(kuò)散，觀察有無(wú)沉淀線產(chǎn)生 將抗毒素包被在固相載體中以雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)樣本中的腸毒素,26,學(xué)習(xí)交流PPT,第二節(jié) 鏈球菌屬,鏈球菌屬（Streptococcus） 細(xì)菌種類多，分布廣 其中某些菌種為毒力強(qiáng)的致病菌 另一些則是作為正常菌群棲居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道 還有一些是皮膚上的過(guò)路菌和黏膜上的定居菌,27,學(xué)習(xí)交流PPT,一、分類,鏈球菌屬的分類較為復(fù)雜 傳統(tǒng)分類 以血平板上溶血現(xiàn)象 Lancefield抗原血清分型 種系分類法 鏈球菌屬的分類較以前的分類有較大的變化,28,學(xué)習(xí)交流PPT,傳統(tǒng)分類,根據(jù)鏈球菌屬各種細(xì)菌在

14、血平板上的溶血現(xiàn)象 甲型（）溶血性鏈球菌 乙型（）溶血性鏈球菌 不出現(xiàn)溶血的丙型（）鏈球菌 根據(jù)Lancefield抗原血清分型 分為A、B、C、D、等20群 血清群與溶血特性沒(méi)有相關(guān)性。對(duì)人類致病的主要是A群,29,學(xué)習(xí)交流PPT,種系分類法,根據(jù)種系分類法的研究結(jié)果 原來(lái)歸屬為D群鏈球菌的腸球菌和N群鏈球菌已分別獨(dú)立為腸球菌屬（Enterococcus）和乳球菌屬（lactococcus） 遺傳學(xué)和血清學(xué)分型不能統(tǒng)一 在遺傳學(xué)上相關(guān)的同種細(xì)菌其抗原可出現(xiàn)異質(zhì)性 毫無(wú)相關(guān)的菌種可出現(xiàn)同一抗原。 根據(jù)伯杰鑒定細(xì)菌手冊(cè)第9版，鏈球菌目前分為40個(gè)種和亞種,30,學(xué)習(xí)交流PPT,傳統(tǒng)的分類方法,溶

15、血性鏈球菌 A、C、G群抗原 菌落直徑大于0.5mm A群的化膿性鏈球菌（S. pyogenes）、C群、G群的馬鏈球菌（S.equi）和似馬鏈球菌（S.equismilis） 菌落直徑小于0.5mm具A、C、G群抗原，統(tǒng)稱米勒鏈球菌（S.milleri） 咽喉炎鏈球菌、中間型鏈球菌和星座鏈球菌 還有溶血和不溶血的細(xì)菌 B群抗原 無(wú)乳鏈球菌（S.agalactiae）,31,學(xué)習(xí)交流PPT,傳統(tǒng)的分類方法,溶血性鏈球菌 包括肺炎鏈球菌（S.pneumoniae） 草綠色鏈球菌群（Viridans streptococci） 不溶血D群鏈球菌 牛鏈球菌（S.bovis）,32,學(xué)習(xí)交流PPT,二

16、、臨床意義,化膿性鏈球菌是致病力最強(qiáng)的一種鏈球菌 能產(chǎn)生多種毒素 鏈球菌溶素O和S 紅疹毒素 M蛋白、脂磷壁酸 酶（鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶等） 可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、 軟組織感染、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等 產(chǎn)毒株還可引起猩紅熱 可致感染后的變態(tài)反應(yīng)性疾病如急性腎小球腎炎、 風(fēng)濕熱等 近年來(lái)報(bào)道引起毒素休克綜合征,33,學(xué)習(xí)交流PPT,臨床意義,無(wú)乳鏈球菌是新生兒菌血癥和腦膜炎的常見(jiàn)菌 該菌定居于婦女生殖道 能導(dǎo)致新生兒感染 早發(fā)型新生兒感染多發(fā)病于出生后24h，以肺炎為主 晚發(fā)型為產(chǎn)后7天至3月內(nèi)，以腦膜炎和菌血癥為主 B群鏈球菌對(duì)成人侵襲力較弱 主要有腎盂腎炎、子宮內(nèi)膜炎

17、糖尿病、泌尿生殖道功能失調(diào)、腫瘤和免疫機(jī)能低下者易受B群鏈球菌感染,34,學(xué)習(xí)交流PPT,臨床意義,C、G群溶血性鏈球菌 與化膿性鏈球菌有相似的毒力因子，引起上述相似的感染 米勒鏈球菌是人體口腔、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常菌群 盡管在化膿性感染病灶中能分離到該菌，但大都是手術(shù)和創(chuàng)傷引起的內(nèi)源性感染,35,學(xué)習(xí)交流PPT,臨床意義,肺炎鏈球菌 大葉性肺炎、支氣管炎 中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥 肺炎鏈球菌的莢膜在細(xì)菌的侵襲力上起著重要作用 肺炎鏈球菌的溶血素、神經(jīng)氨酸酶也是其主要致病物質(zhì),36,學(xué)習(xí)交流PPT,臨床意義,草綠色鏈球菌 人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群， 可引

18、起心臟瓣膜異?；颊叩膩喖毙约?xì)菌性心內(nèi)膜炎 從血液中分離出該菌常被認(rèn)為是污染的細(xì)菌 血液鏈球菌、溫和鏈球菌、格氏鏈球菌、 口腔鏈球菌、中間型鏈球菌 常分離自深部膿腫，特別是肝和腦的膿腫,37,學(xué)習(xí)交流PPT,三、生物學(xué)特性,38,學(xué)習(xí)交流PPT,1形態(tài),鏈球菌是直徑小于2m的球形或卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌，呈鏈狀排列，鏈的長(zhǎng)短和細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān),肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對(duì)尖端向外，成雙排列，無(wú)芽胞、無(wú)動(dòng)力，但能形成莢膜和粘液層,39,學(xué)習(xí)交流PPT,2培養(yǎng)特性,兼性厭氧菌 肺炎鏈球菌和草綠色鏈球菌某些種需要CO2 營(yíng)養(yǎng)要求高 須在培養(yǎng)基中加入血液、血清。最適生長(zhǎng)溫度3537，pH7.47.6

19、 血平板上形成灰白色小菌落 不同菌種的菌落可形成、三種特征性溶血現(xiàn)象 液體培養(yǎng)基中表現(xiàn)為絮狀和顆粒沉淀 肺炎鏈球菌 莢膜多糖使菌落呈粘液狀 產(chǎn)生自溶酶，培養(yǎng)48h后出現(xiàn)“臍窩狀”菌落,40,學(xué)習(xí)交流PPT,3生化特性和抵抗力,發(fā)酵葡萄糖和多種糖，不產(chǎn)氣，乳酸為代謝終末產(chǎn)物，觸酶陰性 鏈球菌基因DNA中G+C mol%為3446 抵抗力 本菌屬大多數(shù)細(xì)菌對(duì)干燥和消毒劑敏感 本菌屬細(xì)菌較少引起細(xì)菌耐藥性 近年對(duì)青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散，引起高度關(guān)注,41,學(xué)習(xí)交流PPT,抗原結(jié)構(gòu),抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜 多糖抗原 位于細(xì)胞壁以此可將鏈球菌分類為A、B、C、D、F、G等20群 蛋白

20、抗原 主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等,42,學(xué)習(xí)交流PPT,四、微生物檢驗(yàn),檢驗(yàn)程序,43,學(xué)習(xí)交流PPT,（二）標(biāo)本采集,咽拭子、痰液、膿汁和血液等標(biāo)本采集后在2h內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，立即進(jìn)行檢查和接種 對(duì)B群溶血鏈球菌的檢查，用無(wú)菌棉簽采集第35周37周妊娠婦女的陰道分泌物，置于含多粘菌素(10g/ml)和萘啶酸(15g/ml)選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育1824h，再作分離培養(yǎng),44,學(xué)習(xí)交流PPT,（三）標(biāo)本直接檢查,直接顯微鏡檢查 標(biāo)本涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查見(jiàn)鏈狀排列革蘭 陽(yáng)性球菌有助于無(wú)正常菌群污染標(biāo)本的診斷 莢膜腫脹試驗(yàn)用于檢查肺炎鏈球菌 直接檢測(cè)抗原 咽拭標(biāo)本的A群鏈球菌和女性生殖道標(biāo)

21、本的B群鏈 球菌可用抗原檢測(cè) 用凝集試驗(yàn)或用ELISA方法等檢測(cè) 該方法特異性和敏感度高，當(dāng)標(biāo)本所含的菌數(shù)太少 可出現(xiàn)假陰性,45,學(xué)習(xí)交流PPT,（四）分離培養(yǎng)與鑒定,用羊血瓊脂平板培養(yǎng)有助于識(shí)別溶血特性和進(jìn)一步 鑒定 初代分離需用5%CO2環(huán)境，3537孵育24h 觀察菌落性狀 菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)的為溶血性鏈球菌，菌落直徑大于0.5mm或小于0.5mm。草綠色溶血環(huán)的為溶血性鏈球菌。有些菌落灰白色不出現(xiàn)溶血環(huán) 革蘭染色為革蘭陽(yáng)性球菌，鏈狀或短鏈狀排列 觸酶試驗(yàn)陰性，6.5%NaCl不生長(zhǎng)者 可確定為鏈球菌屬細(xì)菌,46,學(xué)習(xí)交流PPT,鏈球菌屬內(nèi)的鑒定試驗(yàn),47,學(xué)習(xí)交流PPT,溶血性鏈

22、球菌鑒定,溶血性鏈球菌鑒定 Lancefield群特異性抗原鑒定 根據(jù)Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原，與相應(yīng)的分群血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)。 與B群抗血清凝集的菌株可直接確認(rèn)為無(wú)乳鏈球菌 與F群抗血清凝集并且菌落直徑0.5mm可確定為米勒鏈球菌 與A、C、G群抗血清凝集的菌株不能確定種類，還需根據(jù)菌落大小和生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定,48,學(xué)習(xí)交流PPT,溶血性鏈球菌鑒定,PYR試驗(yàn) 化膿性鏈球菌產(chǎn)生的吡咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮-萘基酰胺，加入N，N-二甲氧基肉桂醛試劑后產(chǎn)生桃紅色 桿菌肽（bacitracin）敏感試驗(yàn) 化膿性鏈球菌為陽(yáng)性，有別于其他PYR陽(yáng)性的溶血性細(xì)菌（豬鏈球菌、海豚

23、鏈球菌）和A群小菌落溶血性鏈球菌（米勒鏈球菌） 此法可作為篩選試驗(yàn),49,學(xué)習(xí)交流PPT,溶血性鏈球菌鑒定,VP試驗(yàn) 挑取平板上孵育過(guò)夜菌落置于2ml VP肉湯中，孵育6h后加入VP試劑，搖勻30秒，出現(xiàn)桃紅色者為陽(yáng)性 該試驗(yàn)可鑒別A、C、G群溶血的大、小兩種不同菌落 CAMP試驗(yàn) 無(wú)乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，它可促進(jìn)金黃色葡萄球菌溶血能力，使其產(chǎn)生顯著的協(xié)同溶血作用 本法可作為無(wú)乳鏈球菌的初步鑒定試驗(yàn),50,學(xué)習(xí)交流PPT,溶血性鏈球菌鑒定,此外鑒別溶血鏈球菌還有BGUR（B-D葡糖糖醛酸酶試驗(yàn)） C、G群菌落為陽(yáng)性反應(yīng)，C、G群米勒鏈球菌則為陰性反應(yīng)。,51,學(xué)習(xí)交流PPT,2非溶血鏈球

24、菌鑒定,通過(guò)血清學(xué)測(cè)定抗原群，可將B群鏈球菌、非溶血的菌株和肺炎鏈球菌得以鑒定 Lancefield的D群抗原可以存在于牛鏈球菌、腸球菌屬和片球菌屬，因此需要進(jìn)行生化反應(yīng)予以鑒別。,52,學(xué)習(xí)交流PPT,草綠色鏈球菌鑒定,草綠色鏈球菌是人體正常菌群一部分，通常不致病，目前借助于常規(guī)方法鑒定到種有一定困難，通常將其鑒定到群。 根據(jù)16SrRNA可分為溫和鏈球菌群（mitis group）、米勒鏈球菌群（miller group）、變異鏈球菌群（mutans group）和唾液鏈球菌群（salivrius group）,53,學(xué)習(xí)交流PPT,商品化鑒定系統(tǒng),API-Strep系統(tǒng) ID32 str

25、ep系統(tǒng) Microscan系統(tǒng),54,學(xué)習(xí)交流PPT,抗鏈球菌溶素O抗體檢測(cè),常用于風(fēng)濕熱的輔助診斷 活動(dòng)性風(fēng)濕熱患者抗體效價(jià)一般超過(guò)400單位,55,學(xué)習(xí)交流PPT,腸球菌屬Enterococus,廣泛分布在自然界 常棲居在人、動(dòng)物的腸道和女性生殖道 為醫(yī)院感染的重要病原菌,56,學(xué)習(xí)交流PPT,一、分類,腸球菌屬原歸類于鏈球菌屬 于1984年將其命名為腸球菌屬 至今，經(jīng)由16SrRNA序列分析和核酸雜交 等，證實(shí)腸球菌可分為5群19個(gè)種 臨床標(biāo)本分離的腸球菌多屬于第2群,57,學(xué)習(xí)交流PPT,二、臨床意義,腸球菌所致感染最多見(jiàn)于泌尿道感染,是重要的醫(yī)院感染病原菌 多與泌尿道器械操作、留置

26、導(dǎo)尿、尿路結(jié)構(gòu)異常有關(guān) 腹腔和盆腔創(chuàng)傷時(shí)也是常見(jiàn)的感染菌 腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾患的老年人、長(zhǎng)期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者,58,學(xué)習(xí)交流PPT,二、臨床意義,近年來(lái)不斷上升的腸球菌感染率和廣泛使用 抗菌藥物出現(xiàn)的耐藥性有關(guān) 在臨床診斷前應(yīng)認(rèn)真評(píng)估分離菌的臨床意義 臨床標(biāo)本中分離的80%90%是糞腸球菌 屎腸球菌約占5%10% 很少分離到腸球菌屬的其它種,59,學(xué)習(xí)交流PPT,三、生物學(xué)特性,形態(tài)： 腸球菌為革蘭陽(yáng)性球菌、呈單個(gè)，成對(duì)或短鏈狀排列，瓊脂平板上生長(zhǎng)的細(xì)菌呈球桿狀 液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列 無(wú)芽胞和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛,60,學(xué)習(xí)交流PPT,培

27、養(yǎng)特性,兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度35，10和45均能生長(zhǎng) 營(yíng)養(yǎng)要求不高。部分糞腸球菌菌株在含有兔血、馬血或人血的平板上出現(xiàn)溶血，而在羊血平板上不出現(xiàn)。其它菌種出現(xiàn)溶血或不溶血 所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生長(zhǎng),61,學(xué)習(xí)交流PPT,生物學(xué)特性,在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷，多數(shù)菌種具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR） 不含細(xì)胞色素氧化酶和觸酶 但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中，可合成細(xì)胞色素或觸酶或兩者皆有，因而某些菌株表現(xiàn)為觸酶弱陽(yáng)性 含鏈球菌D群抗原。G+Cmol%為3745,62,學(xué)習(xí)交流PPT,抵抗力,對(duì)頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥 近年來(lái)獲

28、得性耐藥菌株不斷增多，表現(xiàn)為對(duì)氨基糖苷類耐藥和對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥。對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥是由van A、van B和van C等基因介導(dǎo),63,學(xué)習(xí)交流PPT,四、微生物檢驗(yàn),（一）檢驗(yàn)程序,64,學(xué)習(xí)交流PPT,（二）標(biāo)本采集,常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標(biāo)本和其他拭子， 標(biāo)本于1小時(shí)內(nèi)接種完畢。,（三）標(biāo)本直接檢查,涂片染色顯微鏡檢查可見(jiàn)單個(gè)、成雙或短鏈 排列卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌,65,學(xué)習(xí)交流PPT,（四）分離培養(yǎng)與鑒定,標(biāo)本接種于含血瓊脂平板 若送檢標(biāo)本中含革蘭陰性桿菌可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用的有： 疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長(zhǎng)，而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落； 哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸

29、瓊脂(CAN)和苯乙基乙醇瓊脂(PEA) 由于耐萬(wàn)古霉素腸球菌發(fā)生率增高，為早期檢出耐 藥菌株，可使用含萬(wàn)古霉素瓊脂篩選方法（詳見(jiàn)第 三十五章）,66,學(xué)習(xí)交流PPT,細(xì)菌鑒定方法如下,菌屬的鑒定 腸球菌屬細(xì)菌革蘭染色陽(yáng)性，卵圓形，單個(gè)、成雙或短鏈排列。 觸酶陰性、膽汁七葉苷和PYR陽(yáng)性、6.5% NaCl肉湯中能生長(zhǎng),67,學(xué)習(xí)交流PPT,腸球菌屬間的菌種鑒定,根據(jù)對(duì)甘露醇，山梨醇和精氨酸的代謝分五群 第一群:分解甘露醇、山梨糖產(chǎn)酸，不水解精氨酸 第二群:分解甘露醇和水解精氨酸 第三群:水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖 第四群:不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸 第五群:分解甘露醇不

30、分解山梨糖，不水解精氨酸,68,學(xué)習(xí)交流PPT,觸酶陽(yáng)性的其它革蘭陽(yáng)性球菌,微球菌屬（Micrococcus） 巨球菌屬(Macrococcus) 動(dòng)球菌屬(Planococcus) 考氏考克氏菌(Kocuria kristinae) 觸酶微弱陽(yáng)性的差異球菌屬(Alloiococcus)和粘性羅氏菌(Rothia mucilaginosa) 這些菌屬細(xì)菌在人體和動(dòng)物體表廣泛存在，常在臨 床標(biāo)本中分離到，一般認(rèn)為是非致病菌。 偶爾在某些免疫抑制或缺陷的患者中引起機(jī)會(huì)感染 如心內(nèi)膜炎、腦膜炎、肺炎等。,69,學(xué)習(xí)交流PPT,微球菌屬,以往曾將葡萄球菌屬、微球菌屬、口腔球菌屬和動(dòng)球菌屬共同歸類為微球菌科。 細(xì)菌為革蘭陽(yáng)性，直徑為11.8m的球菌，常成對(duì)、四聯(lián)或呈不規(guī)則排列 在大多數(shù)臨床標(biāo)本中由于形態(tài)與葡萄球菌屬相似，觸酶陽(yáng)性而混淆。本菌屬氧化酶陽(yáng)性，對(duì)桿菌肽敏感、呋喃唑酮耐藥可以與葡萄球菌屬區(qū)別。,70,學(xué)習(xí)交流PPT,差異球菌屬,是需氧的革蘭陽(yáng)性球菌，成對(duì)或簇排列。觸酶試驗(yàn)弱陽(yáng)性，氧化酶試驗(yàn)陰性，常在中耳炎患者的標(biāo)本中分離到。,71