高效液相色譜儀器維護(hù)和保養(yǎng).ppt

1、高效液相色譜儀器維護(hù)和保養(yǎng),溶劑過濾頭的清洗,1.取下過濾頭放在(1:4,V/V)的硝酸溶液燒杯中超聲清洗15分鐘; 2.取出后用蒸餾水超聲清洗10分鐘; 3.用吸球吹出過濾頭中的液體; 4.再用蒸餾水超聲清洗10分鐘; 5.用吸球吹凈過濾頭中的水份; 6.將過濾頭重新插入溶劑瓶中(正相系統(tǒng)注意將過濾頭烘干),流程,何時(shí)需要使用在線脫氣機(jī),脫氣機(jī)的操作,標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī) 標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)每個(gè)通道體積為12ml，建議排液操作：5ml/min 排液6min以上。 微脫氣機(jī) 微脫每個(gè)通道體積為1ml，建議排液操作：2ml/min 排液5min。 切勿用5ml/min 流速去排液。,使用在線脫氣機(jī)須知,溶劑棕色玻

2、璃瓶會(huì)避免藻類的生長(zhǎng)。經(jīng)常過濾溶劑以免其中微粒永久性阻塞毛細(xì)管。 避免使用下述可腐蝕鋼鐵的 溶劑：堿金屬鹵化物及其酸溶液(如：碘化鋰、氯化鉀等)。高濃度無機(jī)酸，如硝酸、硫酸.可能含有過氧化物的色譜純醚(如THF、二氧六環(huán)、二丙基乙醚)。這些在 使用前必須用干燥氧化鋁過濾除去過氧化物。含強(qiáng)絡(luò)合劑的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。四氯化碳與2-異丙醇或四氫呋喃的混合液。,防止堵塞溶劑過濾器 污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長(zhǎng)將會(huì)縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影 響泵的運(yùn)行。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液 (pH4 至 7) 中尤其如此。下 列建議將會(huì)延長(zhǎng)溶劑過濾器的使用壽命并維持泵的運(yùn)行。 使用滅過菌的溶

3、劑瓶來減緩藻類生長(zhǎng)。 使用新鮮配制的流動(dòng)相，特別是水溶劑或鹽緩沖液 建議不超過兩天。 如果應(yīng)用許可，在溶劑中加人0.00010.001M的疊氮化鈉。 避免溶劑瓶暴露在直射陽光下。 用氬氣置換流動(dòng)相上層的空氣。,在線脫氣機(jī)日常維護(hù),故障診斷,在線脫氣機(jī)日常維護(hù),故障診斷,檢查溶劑過濾器 擰開脫氣機(jī)出口或比例閥入口管線，并使液面高于出口30cm此時(shí)溶劑會(huì)因?yàn)橹亓α鞒?，脫氣機(jī)或溶劑過濾頭堵塞時(shí)，溶劑會(huì)流出不暢或不流出。 查看過濾器是否變色 臨時(shí)取下過濾器，檢查柱前壓力是否正常 清潔溶劑過濾器 將堵塞的溶劑過濾器從瓶頭組件中拿下。先用水沖洗殘留之溶劑然后將過濾器放在裝有濃硝酸 （35）的燒杯里浸一小時(shí)

4、。 用二次蒸餾水徹底沖洗過濾器。建議不使用超聲波清洗機(jī)清洗。 將過濾器重新裝好。 建議定期清洗溶劑過濾器及溶劑瓶，每三個(gè)月至少清洗一次。 注意：不要使用沒有安裝溶劑過濾器的系統(tǒng)可能會(huì)嚴(yán)重堵塞系統(tǒng),在線脫氣機(jī)日常維護(hù),Question? 1.如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)脫氣是否正常？ 2.如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)腔體或溶劑過濾頭是否堵塞？,在線脫氣機(jī)日常維護(hù),Question? 1.如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)脫氣是否正常？ 打開Purge閥，設(shè)定泵的流速2ml/min，提起當(dāng)前所使用溶劑瓶?jī)?nèi)的溶劑過濾頭，使之脫離液面一小段時(shí)間，此時(shí)溶劑傳送管內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一小段氣泡，放下過濾頭，讓此段氣泡通過脫氣機(jī)，如果脫氣機(jī)正常，氣泡應(yīng)消

5、失或縮小。 2.如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)腔體或溶劑過濾頭是否堵塞？ 關(guān)閉泵，擰開脫氣機(jī)出口或比例閥入口管線,此時(shí)溶劑會(huì)因?yàn)橹亓α鞒?，脫氣機(jī)或溶劑過濾頭堵塞時(shí)，溶劑會(huì)流出不暢或不流出。,Agilent 1100 泵頭(Pump Head)結(jié)構(gòu)圖,帶有Seal Wash的泵頭結(jié)構(gòu)圖,如何更換溶劑出口過濾芯,Agilent 四元二元/單元泵日常維護(hù),嚴(yán)重污染的溶劑出口過濾芯,Agilent 四元二元/單元泵日常維護(hù),如何更換活塞桿密封圈,Agilent 四元二元/單元泵日常維護(hù),多通道梯度閥（MCGV）操作要點(diǎn) 當(dāng)鹽溶液和有機(jī)溶劑混合時(shí)，鹽溶液可能與有機(jī)溶劑完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn) 沉淀。但是在梯度閥的混合點(diǎn)

6、，但是在梯度閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒 沉淀下來。通常，閥的A通道用于水相/鹽溶液，而泵的B通道用于有機(jī)溶 劑。如果使用的是這樣的配置，鹽將落回到鹽溶液中，并被溶解。當(dāng)泵使用 的不同配置（例如，D-鹽溶液，A-有機(jī)溶劑）時(shí)，鹽可能會(huì)落到有機(jī)溶劑 中，從而出現(xiàn)問題。 Agilent 1100四元泵中使用鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，建議將鹽溶液接到下面的 口上，有機(jī)溶劑接到上面的梯度閥口上。有機(jī)溶劑通道最好直接在鹽溶液通 道的上面。建議定期用水沖洗所有MCGV通道，以去除在閥口上可能出現(xiàn)的鹽 沉淀。,四元二元/單元泵日常維護(hù),更好地使用四元泵將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面(或較高處)。 當(dāng)在四元泵上使用

7、鹽溶液或有機(jī)溶劑時(shí)，建議將鹽溶液接 在底部得梯度閥口上，將有機(jī)溶劑接在上面得梯度閥口上。有機(jī)通道最好 在鹽溶液通道得上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在 閥口析出得鹽結(jié)晶。 操作泵之前，用至少兩個(gè)體積（標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)30ml，對(duì)微脫氣機(jī)10ml）沖洗 真空脫氣機(jī),特別是當(dāng) 泵關(guān)閉了一段時(shí)間后（例如，過夜），以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑 時(shí)。 防止溶劑過濾器堵塞及長(zhǎng)菌 ，當(dāng)慮器表面有黑色或黃色污染層說明慮器發(fā)生了堵塞，請(qǐng)立即清洗或更換之。 定期檢查排液閥的慮芯。檢查方法：擰開排液閥，以水作流動(dòng)相，流速5ml/min，若壓力大于10bar,則須立即更換。,四元二元/單元泵日常維護(hù),泵的使

8、用須知,更好地使用泵 當(dāng)使用低流速時(shí)（不高于0.2ml/min）檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏（用壓力測(cè)試或漏液測(cè)試）。 每當(dāng)更換泵密封墊時(shí) 排液閥慮芯也應(yīng)更換。 更換活塞密封墊時(shí)檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo)致輕度滲漏，并 降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。 使用緩沖溶液時(shí)，關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當(dāng)需要長(zhǎng)時(shí)間使 用0.1摩爾或更高濃度得緩沖液時(shí)，最好選用密封墊清洗附件，以減少對(duì)密封墊及活塞桿的磨損。 更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對(duì)其進(jìn)行磨合，但磨合不適用于 正相密封墊。,泵的使用須知,當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件時(shí)，由于該附件中也有密封墊，這樣就會(huì)增加活塞桿運(yùn)動(dòng)時(shí)的阻

9、力。所以開泵前一定要用10異丙醇，并將其流速調(diào)至約20滴/分鐘使這溶液流過沖洗裝置。 10異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。 當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10異丙醇，會(huì)使密封墊及活塞桿的壽命減短。,泵的使用須知,密封墊磨合操作： 1.以異丙醇作為溶劑并將其管道直接連接到主動(dòng)閥。 2.連接阻尼管于排液閥的出口，阻尼管的另一端置于廢液瓶中。 3.打開排液閥，并用異丙醇以2ml/min的流速?zèng)_洗系統(tǒng)10分鐘。 4.關(guān)閉排液閥，設(shè)置流速使壓力達(dá)到350bar，并使系統(tǒng)在此壓力下保持15分鐘。 5.關(guān)閉泵，緩慢打開排液閥釋放壓力，重新連接管路，然后沖洗系統(tǒng)中的異丙醇。 注意

10、，只有反相密封墊才需此操作，而正相密封墊因其最高只耐受200bar,所以此操作會(huì)損害它。,5重新連接色譜柱，設(shè)定適當(dāng)流速，當(dāng)流動(dòng)相流出約30倍于色譜柱體積，并且檢測(cè)器基線平衡后，流動(dòng)相更換完畢,流動(dòng)相的更換更換互溶流動(dòng)相,1將新流動(dòng)相置于儲(chǔ)液瓶中,2打開放空閥，啟動(dòng)泵使新的流動(dòng)相從入空閥出口流出20ml左右,3關(guān)閉放空閥，然后將進(jìn)樣閥與色譜柱相連接端卸開，用小容器放置于進(jìn)樣閥的出口處,4啟動(dòng)恒流泵，讓流動(dòng)相從進(jìn)樣閥出口流出10ml左右,流動(dòng)相的更換換緩沖液流動(dòng)相,1用水更換色譜系統(tǒng)中緩沖液 2用水含量在10%60%范圍的溶劑沖洗色譜柱中的鹽 3用新流動(dòng)相更換水或沖洗色譜柱溶劑,流程,檢測(cè)器使用

11、注意事項(xiàng)及日常維護(hù),可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器使用注意事項(xiàng). 如果流動(dòng)池被污染可先用以下方法處理:在不連接色譜柱的情況下先用高純水沖洗20分鐘，然后用5硝酸沖洗2小時(shí)，最后再用高純水沖洗至流出液中性即可。 如上述方法不果，就需更換流動(dòng)池的檢測(cè)窗。 上述處理方法也適用于DAD的流動(dòng)池。,檢測(cè)器使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù),熒光檢測(cè)器使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù). 由于水性流動(dòng)相長(zhǎng)時(shí)間留在流動(dòng)池會(huì)有藻類生長(zhǎng)，而藻類會(huì)產(chǎn)生熒光，所以可添加有機(jī)溶劑如5的乙腈或甲醇。 如懷疑流動(dòng)池被污染可用以下步驟清洗之： 1 用雙蒸水沖洗30分鐘以上. 2 用注射器注射65硝酸入流動(dòng)池并使其留在流動(dòng)池約1小時(shí)。（注意，為了防止過壓，請(qǐng)緩

12、慢注射). 3 用雙蒸水沖洗干凈。,HPLC日常維護(hù)總結(jié),定期清洗溶劑過濾頭（35濃硝酸浸泡1小時(shí)，不要使用超聲波清洗） 流動(dòng)相應(yīng)經(jīng)過0.45um或更小孔徑的濾器過濾，如果使用濾膜，注意有機(jī)膜與水膜的區(qū)別(聚四氟乙烯能適用于所有溶劑) 根據(jù)情況更換Purge閥內(nèi)的在線過濾頭（Purge閥打開，純水5ml/min，壓力超過10bar時(shí)需更換） 注意清洗在線脫氣機(jī)及比例閥，尤其是長(zhǎng)期使用水相或緩沖鹽的通路，使用純水沖洗后，再使用甲醇沖洗，可以打開Purge閥，使用5ml/min的流速。污染比較嚴(yán)重時(shí)，可以使用IPA清洗。一般的流程，例如A：Buffer B: MeOH C: Water D: CH

13、3CN分析：A:B:D=20:30:50清洗：C 100% 30min，B 100% 30min,安裝有seal wash組件的，無論是否使用緩沖鹽，開泵之前都應(yīng)該使之充滿流動(dòng)的液體（10%IPA水溶液）并調(diào)流速為20滴/分鐘。 正相色譜、反相色譜切換時(shí)應(yīng)使用IPA過渡，長(zhǎng)期使用正相，應(yīng)更換正相柱塞密封墊 樣品進(jìn)樣之前最好過濾，如果樣品量太少，可以適當(dāng)抬高進(jìn)樣針的位置 流動(dòng)相pH大于9.5或小于2.3時(shí)，進(jìn)樣閥應(yīng)更換tefzel 轉(zhuǎn)子密封圈 注意不同檢測(cè)器流通池耐壓?jiǎn)栴}，盡量避免使用pH9.5的流動(dòng)相，以防腐蝕流通池石英窗，避免使用可能析晶的流動(dòng)相，防止流通池堵塞 VWD 40bar DAD

14、120bar MWD 120bar FLD 20bar RID 5barRID、FLD永遠(yuǎn)是最后一個(gè)檢測(cè)器 注意不同廠家接頭問題，防止?jié)B漏或毀壞色譜柱和接頭,HPLC日常維護(hù),HPLC常用的色譜柱接頭,0.090 in.,0.130 in.,0.090 in.,0.170 in.,Swagelok,Waters,Parker,Rheodyne,Valco,Uptight,0.090 in.,0.080 in.,Troubleshooting LC Fittings, Part II.,J. W. Dolan and P. Upchurch.,LC/GC Magazine 6:788 (1988

15、),HPLC日常維護(hù)總結(jié),HPLC故障診斷,系統(tǒng)壓力過高。 1 首先擰開排液閥，以純水作流動(dòng)相并設(shè)流速為5ml/min若壓力超過10bar，應(yīng)先更換排液閥的慮芯。 2 若排液閥的慮芯沒有堵塞，卸下色譜柱，然后用一兩通代替色譜柱，以水作流動(dòng)相設(shè)流速為1ml/min。通常壓力不會(huì)超過20bar,否則系統(tǒng)可能有堵塞。 3 若上述的壓力超過20bar,我們可按照從后到前的原則，也就是說先卸下進(jìn)流動(dòng)池的連接管接頭，開泵后，若壓力正常則流動(dòng)池堵塞若仍不正?？蓪⑦@段管另一端也卸下，開泵后再觀察壓力情況。 同樣道理，我們就可以找到堵塞的地方。 容易堵塞的地方：流動(dòng)池入口管；自動(dòng)進(jìn)樣器的針及針座；柱溫箱,HPL

16、C故障診斷,系統(tǒng)壓力過低，不穩(wěn)定或沒液流。 首先擰開排液閥，設(shè)流速12ml/min后開泵，觀察有無液流，若有再仔細(xì)觀察液流是否有倒吸現(xiàn)象如不能確定可用量筒測(cè)量流速的準(zhǔn)確性。 如上述無液流，或流速不準(zhǔn)多數(shù)為主動(dòng)閥閥芯或主動(dòng)閥故障， 或泵有嚴(yán)重漏液。 怎樣是大致判斷主動(dòng)閥抑或其閥芯故障？可用以下方法：當(dāng)泵運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)用手指輕捏主動(dòng)主體，正常的主動(dòng)閥能感到有節(jié)奏的脈動(dòng)，如果沒有， 主動(dòng)閥有問題。如果有則可以將主動(dòng)閥閥芯取出進(jìn)行超聲波清洗，如仍有問題，可更換閥芯。注意，千萬不要把整個(gè)主動(dòng)閥放入超聲波清洗這樣會(huì)損壞主動(dòng)閥。 若上述流速準(zhǔn)確但擰緊排液閥后壓力不穩(wěn)定，請(qǐng)仔細(xì)檢查有無漏液。(通常漏液地方：各接口包括色譜柱，泵，進(jìn)樣閥等)。,HPLC故障診斷,保留時(shí)間不穩(wěn)定。 首先觀察保留時(shí)間是否有規(guī)律的變化，并同時(shí)觀察壓力是否穩(wěn)定 若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間呈有規(guī)律變化，多數(shù)是色譜柱未平衡好，特別是含有鹽的流動(dòng)相，需較長(zhǎng)的時(shí)間去平衡。 若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間無規(guī)律變化，請(qǐng)檢查溶劑過濾頭及真空腔是否有堵塞。再平衡色譜柱足夠時(shí)間，如仍然不佳，可更換一色譜柱。 若壓力不穩(wěn)定，請(qǐng)檢查造成壓力不穩(wěn)定的因素，如：漏液，排液時(shí)間不足夠，鹽濃度過高導(dǎo)致鹽析，主動(dòng)閥比例閥內(nèi)漏，等。,HPLC故障診斷,峰面積重現(xiàn)性不好。 首先觀察壓力是否穩(wěn)定，以及觀察峰面積變化是否有規(guī)律。 若壓力不穩(wěn)定，請(qǐng)檢查造成壓力不穩(wěn)定的因素，如