基因擴(kuò)增儀PCR儀測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范

1、基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范一個(gè)范圍本規(guī)范適用于48孔或96孔的孔結(jié)構(gòu)測(cè)量范圍為(0120)的多信道基因擴(kuò)增器(PCR校正)測(cè)溫系統(tǒng)或單信道基因擴(kuò)增器(PCR校正)溫度校正的校正，其他孔結(jié)構(gòu)和溫度范圍的基因擴(kuò)增器(PCR校正)測(cè)溫系統(tǒng)的溫度校正可參考本規(guī)范。2參照文件本規(guī)范引用以下文件JJF 1071-2000 國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫(xiě)規(guī)則JJF 1007-2007 溫度計(jì)量名詞術(shù)語(yǔ)及定義JJF 1527-2015 聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范YY/T 1173-2010 聚合酶鏈反應(yīng)分析儀智能運(yùn)輸系統(tǒng)- 90 1990年國(guó)際溫標(biāo)注日引用文件僅注日版本適用于本規(guī)格未填寫(xiě)日期的參考文件的最新

2、版本(包括所有修改單)適用于本規(guī)格。3術(shù)語(yǔ)3.1基因擴(kuò)增器(PCR器)，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分析器polymerasechainreactionanalyzer基于PCR (聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)原理，模擬DNA或RNA復(fù)制過(guò)程，在不存在鑄造模型、引物、校驗(yàn)和的條件下，特異性擴(kuò)增已知序列并對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析的儀器設(shè)備。 YY/T 1173-2010 3.23.2基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)temperaturemeasuringsystemforpolymerasechainreactionanalyzer用于基因擴(kuò)增器(PCR器)的專(zhuān)用溫度校準(zhǔn)裝置。3.3溫度校正專(zhuān)用等溫塊和附件isotherma

3、lblockandaccessoryfortemperaturecalibration與標(biāo)準(zhǔn)恒溫箱結(jié)合使用，提供基因擴(kuò)增器測(cè)量(PCR器)溫系溫度校正的潔凈溫場(chǎng)輔助裝置。3.4溫度校正專(zhuān)用等溫塊測(cè)試孔testingholefortemperaturecalibration本發(fā)明提供一種模擬基因擴(kuò)增器溫度塊搖滾樂(lè)內(nèi)的結(jié)構(gòu)并將基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的探頭放置于插孔內(nèi)的專(zhuān)用等溫塊搖滾樂(lè)。3.5基因擴(kuò)增器溫度校正專(zhuān)用等溫塊標(biāo)準(zhǔn)溫度驗(yàn)證孔temperature validate hole在基因擴(kuò)增器等溫塊上設(shè)有放置標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正的固定位置。3.6溫度測(cè)量范圍溫度測(cè)量在精度要求中，基因擴(kuò)增器測(cè)

4、溫系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)的上下限溫度f(wàn)的范圍。3.7顯示值誤差指示錯(cuò)誤基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)在溫度測(cè)量范圍內(nèi)可達(dá)到的最大溫度誤差。3.8溫度極限分辨率溫度解決方案。所述基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)顯示與向末尾變化的修正數(shù)順序?qū)?yīng)的輸入變化溫度值。4概要基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)是用于基因擴(kuò)增器(PCR器)的實(shí)時(shí)溫度校準(zhǔn)的感測(cè)系統(tǒng)。 通常由多通道測(cè)溫傳感器(測(cè)溫模塊)、數(shù)據(jù)收集模塊、數(shù)據(jù)線、顯示器(電腦)構(gòu)成。圖1是示出基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的測(cè)溫結(jié)構(gòu)的圖5修正測(cè)量特性5.1顯示值誤差基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的溫度顯示值誤差最大允許誤差： 0.20。5.2溫度測(cè)量范圍基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的溫度

5、測(cè)量范圍請(qǐng)復(fù)蓋(30100)。5.3溫度極限分辨率基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的溫度極限分辨率必須在0.01以下。5.4功能性檢查5.4.1外觀基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)應(yīng)外觀良好。 各通道溫度傳感器的外形應(yīng)干凈、無(wú)彎曲、無(wú)斷裂、清潔無(wú)污染。 溫度傳感器封裝良好，導(dǎo)線連接器應(yīng)良好接觸。 溫度傳感器使用的保護(hù)管及導(dǎo)線應(yīng)能承受相應(yīng)的使用溫度。5.4.2顯示功能基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的顯示功能的檢查在電源接通的狀態(tài)下進(jìn)行。 測(cè)溫系統(tǒng)各通道的溫度值滿足溫度極限分辨率的要求，顯示數(shù)和圖像要清晰，小數(shù)點(diǎn)和狀態(tài)的顯示要準(zhǔn)確。測(cè)溫系統(tǒng)超過(guò)測(cè)溫范圍、傳感器故障時(shí)，軟件應(yīng)實(shí)時(shí)顯示對(duì)應(yīng)的通道編號(hào)。6校

6、準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件6.1.1環(huán)境溫度： (1535)； 環(huán)境大氣濕度：85 %RH。6.1.2電氣量測(cè)儀器設(shè)備的環(huán)境條件應(yīng)符合相應(yīng)要求。6.1.3校準(zhǔn)時(shí)，基因擴(kuò)增器(PCR器)測(cè)溫系統(tǒng)的供電電壓應(yīng)在正常工作范圍內(nèi)，與共恒溫設(shè)備和電氣測(cè)量共同使用的電源條件應(yīng)滿足相應(yīng)的使用要求。6.2測(cè)量用標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備及配對(duì)設(shè)備測(cè)量用標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備及配對(duì)設(shè)備如表3所示。表3測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)器及配對(duì)設(shè)備序列號(hào)德老虎鉗名稱(chēng)技術(shù)要求用途備考1二等規(guī)格鉑測(cè)溫電阻體溫度校正測(cè)量范圍(-189.3442419.527) )溫度標(biāo)準(zhǔn)器也可以使用符合要求的其他測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)2電測(cè)設(shè)備0.005級(jí)，電氣測(cè)量設(shè)備加裝標(biāo)準(zhǔn)器后，最小極限分辨率相當(dāng)于0.0

7、01。定徑套電氣測(cè)量設(shè)備3與恒溫箱PCR測(cè)溫專(zhuān)用等溫塊及配件溫度范圍溫度均勻性溫度變異性提供基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)專(zhuān)用的均勻溫場(chǎng)以標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻為測(cè)定基準(zhǔn)時(shí)，作業(yè)區(qū)域的深度為300mm以上。沒(méi)有自重結(jié)構(gòu)的基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)必須與壓桿組合使用(-20150)0.030.01/10min4水三相點(diǎn)瓶U=0.002，k=2測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻的水三相點(diǎn)值7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法7.1校準(zhǔn)項(xiàng)目a )溫度顯示值誤差b )測(cè)溫范圍c )溫度極限分辨率7.2校正方法7.2.1校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備a )打開(kāi)電氣測(cè)量設(shè)備進(jìn)行預(yù)熱，預(yù)熱時(shí)間至少達(dá)到20min或其使用說(shuō)明書(shū)相應(yīng)要求。b )將標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正裝入預(yù)先凍結(jié)的水三相點(diǎn)瓶中，測(cè)量

8、其水三相點(diǎn)值。 新測(cè)量的水三相點(diǎn)值輸入到定徑套電氣測(cè)量設(shè)備中使用。c )按照恒溫箱和使用說(shuō)明書(shū)的要求正常工作，保證工作區(qū)域的液面在規(guī)定位置。d )基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)本體接通電源進(jìn)行預(yù)熱，進(jìn)入測(cè)量狀態(tài)。e )基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)校正專(zhuān)用等溫布搖滾樂(lè)，如圖2所示放置在恒溫箱內(nèi)(建議向等溫布搖滾樂(lè)溫度孔內(nèi)注入15L導(dǎo)熱油以保證更好的溫度傳導(dǎo)性)，以保證等溫布搖滾樂(lè)在恒溫箱內(nèi)所需的液面浸漬深度滿足下表所示的要求。局浸式等溫封搖滾樂(lè)全浸式等溫封搖滾樂(lè)浸漬深度180毫米180毫米圖2基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)校正專(zhuān)用等溫塊搖滾樂(lè)示意圖f )如圖3所示，將基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)放入PCR測(cè)溫專(zhuān)用等溫子搖滾樂(lè)。 將標(biāo)準(zhǔn)鉑電

9、阻溫度校準(zhǔn)插入PCR測(cè)溫專(zhuān)用等溫布搖滾樂(lè)專(zhuān)用驗(yàn)證孔內(nèi)，保證標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻測(cè)溫零配件和等溫布搖滾樂(lè)底部的保持水平，將恒溫箱設(shè)定在所需的校準(zhǔn)溫度點(diǎn)，并將等溫布搖滾樂(lè)與恒溫箱一起溫度穩(wěn)定1小時(shí)后，所監(jiān)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校準(zhǔn)顯示基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置的溫度波動(dòng)度小于0.01/10min，基因增加圖3在基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)等溫子搖滾樂(lè)內(nèi)校正溫度顯示值誤差原理圖7.2.2校準(zhǔn)過(guò)程7.2.2.1溫度顯示值的誤差a )校正溫度顯示值誤差的溫度點(diǎn)一般選擇為30、50、60、70、90、95。 如果用戶提出請(qǐng)求，可以根據(jù)用戶的請(qǐng)求選擇校準(zhǔn)點(diǎn)。b )將基因擴(kuò)增器測(cè)溫模塊與測(cè)溫系統(tǒng)本體連接，使其處于正常工作狀態(tài)。 將基

10、因擴(kuò)增模組放入基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)校正專(zhuān)用等溫布搖滾樂(lè)，將溫度傳感器放入等溫布搖滾樂(lè)測(cè)試孔，保證測(cè)溫傳感器與等溫布搖滾樂(lè)貼緊，并蓋上絕熱棉。 沒(méi)有自重功能的基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)需要在測(cè)溫模塊上對(duì)密封件進(jìn)行加壓。 參照?qǐng)D3。 在云同步中，將標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正放入恒溫箱中，將標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正放入PCR測(cè)溫專(zhuān)用等溫塊搖滾樂(lè)專(zhuān)用驗(yàn)證孔中，浸漬在恒溫介質(zhì)中的深度在180mm以上。c )將恒溫箱設(shè)定為校準(zhǔn)的溫度點(diǎn)，恒溫箱的實(shí)際溫度的最大偏差為0.20以下，(以二等標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正的顯示值為基準(zhǔn))穩(wěn)定30分鐘以上，分別讀取標(biāo)準(zhǔn)器和基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的各通道的溫度值，連續(xù)4次進(jìn)行測(cè)量。 修正各自的平均值。標(biāo)準(zhǔn)

11、器(t*1)測(cè)試點(diǎn)a1(ta1) 測(cè)試點(diǎn)a2(ta2) 測(cè)試點(diǎn)an(tan )欸標(biāo)準(zhǔn)器(t*2) 測(cè)試點(diǎn)a1(ta1) 測(cè)試點(diǎn)a2(ta2) 測(cè)試點(diǎn)an(tan )欸標(biāo)準(zhǔn)器(t*3)測(cè)試點(diǎn)a1(ta1) 測(cè)試點(diǎn)a2(ta2) 測(cè)試點(diǎn)an(tan )欸標(biāo)準(zhǔn)器(t*4) 測(cè)試點(diǎn)a1(ta1) 測(cè)試點(diǎn)a2(ta2) 測(cè)試點(diǎn)an(tan )在測(cè)定中，恒溫箱的溫度變化在0.01以下。d )根據(jù)上述c )的測(cè)定要求，在30、50、60、70、90、95的狀態(tài)下，依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)器和基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的各通道a1an點(diǎn)的溫度顯示值。e )溫度校準(zhǔn)點(diǎn)也可根據(jù)客戶要求，采用上述方法進(jìn)行測(cè)量。7.2.2.2溫度測(cè)量范

12、圍7.2.2.1中的b )和c )的要求，分別測(cè)定基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的溫度測(cè)定通常下限30和通常上限95的狀態(tài)下的顯示值誤差。溫度測(cè)量上限和溫度下限也可以根據(jù)制造商填寫(xiě)的溫度測(cè)量范圍，用上述方法進(jìn)行測(cè)量。7.2.2.3溫度極限分辨率節(jié)根據(jù)7.2.2.1中的b )和c )的要求，將基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)模塊放入恒溫箱中的基因擴(kuò)增器校準(zhǔn)專(zhuān)用等溫布搖滾樂(lè)溫度驗(yàn)證孔內(nèi)，并將恒溫箱與等溫布搖滾樂(lè)一起設(shè)定在90、恒溫30min以上，而測(cè)量基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)在90的狀態(tài)下保持穩(wěn)定b )根據(jù)校正基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的標(biāo)稱(chēng)顯示的溫度極限分辨率D1，緩慢調(diào)整恒溫箱的設(shè)定溫度，直到校正基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的顯示值穩(wěn)定為(t

13、1 D1)，并記錄此時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正顯示值T2，將基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)放入恒溫槽中的基因放大器校正專(zhuān)用等溫塊在恒溫10min以上c )按照步驟a和步驟b，反復(fù)進(jìn)行連續(xù)4次測(cè)定，記錄數(shù)據(jù)。 修正4次測(cè)定和的平均值。d )溫度極限分辨率(率)請(qǐng)用=進(jìn)行訂正7.3校準(zhǔn)結(jié)果的處理7.3.1溫度顯示值的誤差按下式校正式中：基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)溫度顯示值誤差?；驍U(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)a1an通道4次溫度測(cè)量的平均值。標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正4次測(cè)定得到的溫度測(cè)定的平均值。按照J(rèn)JG160的規(guī)定，換算以標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正4次測(cè)定的溫度值，并校正其平均值按照J(rèn)JG160的規(guī)定，換算以標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正4次測(cè)定的溫度值，

14、并校正其平均值b )計(jì)算基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)a1an通道的4次溫度測(cè)量的平均值。c )修正基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的各通道a1an的顯示值誤差；修理到約0.01。7.3.2溫度極限分辨率(率)通過(guò)下式進(jìn)行修正。=-其中-是溫度極限分辨率、標(biāo)稱(chēng)溫度極限分辨率D1的有效位數(shù)約為；等溫塊在恒溫箱內(nèi)穩(wěn)定在90.00時(shí)，在基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的各個(gè)通道一次測(cè)量的溫度顯示值的4次平均值，以標(biāo)稱(chēng)溫度極限分辨率D1的有效位數(shù)計(jì)約為；在基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的各通道中一次測(cè)量的溫度顯示值(T2 D1 )時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)鉑電阻溫度校正顯示值的4次平均值，以標(biāo)稱(chēng)溫度極限分辨率D1的有效位數(shù)計(jì)約為；a )修正基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)的各通道a1

15、an的顯示值誤差；=-、公稱(chēng)溫度極限分辨率D1的有效位數(shù)約為。b )計(jì)算基因擴(kuò)增器測(cè)溫系統(tǒng)某通道的4次測(cè)定結(jié)果的平均值。用公稱(chēng)溫度極限分辨率D1的有效位數(shù)修理約、。8校正結(jié)果的表現(xiàn)校對(duì)結(jié)果必須反映在校對(duì)證明書(shū)上。 校對(duì)證書(shū)必須至少包含以下信息：a )標(biāo)題：“校對(duì)證明書(shū)”；b )實(shí)驗(yàn)室名稱(chēng)和地址c )進(jìn)行校正的場(chǎng)所(與實(shí)驗(yàn)室地址不同時(shí))d )證書(shū)的唯一標(biāo)識(shí)符(如編號(hào))、每頁(yè)和總頁(yè)數(shù)的標(biāo)識(shí)符e )客戶的姓名和地址f )被校對(duì)象的記述和明確的識(shí)別g )在進(jìn)行校正的日期與校正結(jié)果的有效性和應(yīng)用有關(guān)的情況下，應(yīng)該說(shuō)明被校正對(duì)象的接收日期h )在涉及校準(zhǔn)結(jié)果的有效性的應(yīng)用的情況下，對(duì)被校正樣本的采樣順序進(jìn)行說(shuō)明I )顯示校準(zhǔn)所依據(jù)的技術(shù)規(guī)格(包括名稱(chēng)和符號(hào))j )本次校準(zhǔn)中使用的測(cè)定基準(zhǔn)的質(zhì)量跟蹤和有效性的說(shuō)明k )校正環(huán)境的說(shuō)明l )各校正項(xiàng)目的檢查結(jié)果的說(shuō)明m )校準(zhǔn)規(guī)格偏差的說(shuō)明n )校準(zhǔn)證書(shū)頒發(fā)者的簽名、職務(wù)或等效標(biāo)識(shí)牌；o )表示校正結(jié)果僅對(duì)被校正對(duì)象有效的聲明p )未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室書(shū)面批準(zhǔn)，不得部分復(fù)制證書(shū)聲明。附錄a