9食品中霉菌和酵母菌測定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、.xxxxx有限公司食品中霉菌和酵母菌測定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號起草人日期審核人日期批準(zhǔn)人日期實(shí)施日期第 版文件密級1目的規(guī)范食品中霉菌和酵母菌測定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts）的計(jì)數(shù)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)。3責(zé)任質(zhì)量部組織制訂、化驗(yàn)室負(fù)責(zé)實(shí)施。4內(nèi)容4.1 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：4.1.1 冰箱：2 5 。4.1.2 恒溫培養(yǎng)箱： 28 1 。4.1.3 均質(zhì)器。4.1.4 恒溫振蕩器。4.1.5 顯微鏡：10100。4.1.6 電子天平：感量0.1 g。4.1.7 無

2、菌錐形瓶:容量500 mL、250 mL。4.1.8 無菌廣口瓶：500 mL。4.1.9 無菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。4.1.10 無菌平皿：直徑90 mm。4.1.11 無菌試管: 10 mm75 mm。4.1.12 無菌牛皮紙袋、塑料袋。4.2 培養(yǎng)基和試劑4.2.1 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A 中A.1。4.2.2 孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄A 中A.2。4.3檢驗(yàn)程序霉菌和酵母計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序見圖1。圖 1 霉菌和酵母計(jì)數(shù)的檢驗(yàn)程序4.4操作步驟4.4.1 樣品的稀釋4.4.1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品至盛有2

3、25 mL 滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為1:10稀釋液?；蚍湃胧⒂?25 mL 無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打2min，制成1:10 的樣品勻液。4.4.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品至盛有225 mL 無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。4.4.1.3 取1 mL 1:10 稀釋液注入含有9 mL 無菌水的試管中, 另換一支1 mL 無菌吸管反復(fù)吹吸,此液為1:100 稀釋液。4.4.1.4 按5.1.3 操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管。4.4.

4、1.5 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL 樣品勻液于2 個(gè)無菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取1 mL樣品稀釋液加入2 個(gè)無菌平皿作空白對照。4.4.1.6 及時(shí)將15 mL20 mL 冷卻至46 的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于461恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。4.4.2 培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，281培養(yǎng)5d，觀察并記錄。4.4.3 菌落計(jì)數(shù)肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colonyforming u

5、nits，CFU）表示。選取菌落數(shù)在10 CFU150 CFU 的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。4.5 結(jié)果與報(bào)告4.5.1 計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。4.5.1.2 若所有平板上菌落數(shù)均大于150 CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。4.5.1.3 若所有平板上菌落數(shù)均小于10 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。4.5.1.4 若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；

6、如為原液，則以小于1計(jì)數(shù)。4.5.2 報(bào)告4.5.2.1 菌落數(shù)在100 以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。4.5.2.2 菌落數(shù)大于或等于100 時(shí)，前3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用10 的指數(shù)形式來表示，此時(shí)也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。4.5.2.3 稱重取樣以CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。附錄A(規(guī)范性附錄)培養(yǎng)基和試劑A.1 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂A.1.1 成分馬鈴薯(去皮切塊) 300 g葡萄糖 20.0 g瓊脂 20.0 g氯

7、霉素 0.1 g蒸餾水 1000 mLA.1.2 制法將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL 蒸餾水，煮沸10 min20 min。用紗布過濾，補(bǔ)加蒸餾水至1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中A.2 孟加拉紅培養(yǎng)基A.2.1 成分蛋白胨 5.0 g葡萄糖 10.0 g磷酸二氫鉀 1.0 g硫酸鎂（無水） 0.5 g瓊脂 20.0 g孟加拉紅 0.033 g氯霉素 0.1 g蒸餾水 1000 mLA.2.2 制法上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補(bǔ)足蒸餾水至1000 mL，分裝后，121滅菌20 min。傾注平板前，

8、用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。附錄B(資料性附錄)霉菌直接鏡檢計(jì)數(shù)法常用的為郝氏霉菌計(jì)測法，本方法適用于番茄醬罐頭。B.1 設(shè)備和材料B.1.1 折光儀。B.1.2 顯微鏡。B.1.3 郝氏計(jì)測玻片：具有標(biāo)準(zhǔn)計(jì)測室的特制玻片。B.1.4 蓋玻片。B.1.5 測微器：具標(biāo)準(zhǔn)刻度的玻片。B.2 操作步驟B.2.1 檢樣的制備：取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為1.34471.3460（即濃度為7.9%8.8%），備用。B.2.2 顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野的校正：將顯微鏡按放大率90125 倍調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)視野，使其直徑為1.382 mm。B.2.3 涂片：洗凈郝氏計(jì)測玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液，用玻璃棒均勻的攤布于計(jì)測室，以備觀察。B.2.4 觀測：將制好之載玻片放于顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野下進(jìn)行霉菌觀測，一般每一檢樣觀察50 個(gè)視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進(jìn)行觀察。B.