液質(zhì)聯(lián)用操作規(guī)程

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1.合用*圍

本設備配備ACQUITYUPLC液相色譜儀、TQSMS/MS質(zhì)譜儀，合用于食品、

藥品中各種有機物的定性、定量分析，是一種具有高靈敏度的檢測儀器，儀器由

主機、計算機和數(shù)據(jù)處理軟件等組成。

2.職責

2.1操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認真填寫實驗使用記錄。

2.2保管人員負責對儀器進行定期維護和保養(yǎng)。

2.3科室負責人負責監(jiān)督檢查規(guī)程的執(zhí)行。

3.麟程序

日常操作步驟：

準備UPLC一—設置樣品表一一運行樣品一T定量一T打印報告。

注：如果一個星期內(nèi)不運行樣品請不要關(guān)質(zhì)譜儀，使其保持真空。

建立新方法和project的操作步驟：

準備UPLC——建立新的project一―用標準品調(diào)諧一一編輯質(zhì)譜方法-一編輯

UPLC方法一一設置樣品表一一運行樣品一一定量―一打印報告。

3.1開機:

徹底開機順序（儀器已關(guān)閉）

確定MS及其它儀器電源電纜已連接，開氮氣發(fā)生器、開氨氣，小表＜0.1mpa。

打開計算機電源＞等待windows正常啟動＞電腦界面右下角網(wǎng)絡圖標紅叉。

打開UPLC自動進樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡圖標浮現(xiàn)感嘆號！。

打開UPLC泵電源，等約30s或者是有響聲。

打開質(zhì)譜電源，等待5min,離子源透視鏡里面亮。

打開Masslyn*軟件，masslyn*主界面左側(cè)instrument——Masstune界面

菜單欄vacuum—pump同樣界面左側(cè)偏上diagnostics—vacuum—analyser

MSIturbospeed%］要在5分鐘內(nèi)升到80。至少抽真空4個小時>查看真空狀態(tài)

主界面massconsole界面左側(cè)*evotqmsdetector力口號展開一msdisplay>

碰撞室真空度>達

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至Ij7*e-5mbar。

日常開機順序（儀器未關(guān)閉）

開氮氣發(fā)生器、開氨氣，小表<0.1mpa,打開Masslyn*軟件，進入工作站。

3.2皿項目

點擊file下的projectwizard,浮現(xiàn)對話框,單擊yes浮現(xiàn)對話框，輸入

projectJocation為單擊ne*t,遍圣createe*istingprojectas

template,并以為模板,單擊finish點擊0Ko

33準備UPLC系統(tǒng)

準備液相的普通流程：準備流動相>準備樣品>灌注二元泵>灌注自動

進樣器>建立液相方法>平衡液相

.準備流動相

用0.22um的膜過濾緩中液，所有的韁中液不噴純水都要新配制，超純水和緩沖液

使用不得超過二天，緩沖鹽一定要是可揮發(fā)的，而且濃度不要大于10mM。

.樣品要求

所有樣品都要用流動相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0.22um的膜過濾。

3.3.3灌注二元泵

在Masslyn*主界面,單擊MSConsole,jfiAUPLC交互顯示界面，點擊左欄Acquity

UPLCSystem>Control>StartUpSystem,單擊QSM,僻需要用SJ的流動相｛立

置，如A和B,選擇sealwash，時間設為3分鐘。

單擊SM,StrongWash5cycles,Samplesyringe20

單擊EquilibratetoMethod,將流速設為0，單擊Start開始灌注.時間大約為

9min擺布。

設定流速，平衡液相

在Masslyn住界面,單擊InletMethod圖標,打開液相方志感S窗口,單擊status>

ACQUITYAdditionalStatus,進入液相控制臺，單擊A或者B或者流速的位置，

浮現(xiàn)流速、比例設定對話框,設定液相流速與比例，單擊對勾，開始平衡液相，

如果后

面要做調(diào)諧，可設定流速0.2ml/min,有機相與水相的比例為50:50。

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3.4準備質(zhì)譜

,計算化合物單同位素質(zhì)量數(shù)

Masslyn*主界面〉單擊Tools>MolecularWeightCalculator,輸入化合物的份子式

次寫-注意Cl、Br等正確的輸入方法），注意選單同位素Monois。,IonMode:離

子化題，正離子，負離子，單擊

I+ve-veCalculate0

用Intellistart進行自動調(diào)酒

在Masslyn*主界面單擊MSTune圖標,打開調(diào)諧窗口,單擊IonMode>ES+或

者ES-,單擊APIGas圖標打開氮氣,單擊打開高壓

僻圖標，設定液相流速水：乙睛的比例為

MSMode0.2ml/min,50:50o

把標準品調(diào)諧液放入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處的A（或者B或者C）號位（注:濃度在

200ppb擺布）

單擊Fluidics，渴？Reservoir為A,FlowState為LC模式,點擊Purge圖標。

Purge,將FlowState改為bineFunction為MSIscan,Mass

為計算出化合物的質(zhì)量數(shù)，span為5，點擊進樣，開始進樣，直到離子的響應比

較穩(wěn)定。保存調(diào)諧文件：File〉SaveAs至已建的項目下。

在Masslyn*主界面，謝圣MsConsole>*evoTQMSDetector

遢舉Intellistart,j??SampleTuneandDevelopMethod,ES+

單擊Start圖標,浮現(xiàn)Intellistart自動調(diào)諧編輯窗口,選擇SwitchtoAdvanced

mode,輸入poundname（化?SWS稱）,MolecularMass/Formula（份子者

分子式）AdductA+（[M+H]+,渴？LoadE*istingSampleTune，在Sample

TuneName”…“處謝澗然件，在DevelopMRM

Method前的方框打鉤，并在方框出輸入MRM方法的文件名，路徑為已建的項目

下。在PrintReportBSTSWT鉤,ConeVoltage,CollisionEnergy黑就值,

Fluidics下的FlowPath法舉bined木MiC,SampleReservoir?和SampleFlowRate

然與Fuldics下bined模式下的進樣參數(shù)保持一致。單擊右邊的Start開始自

動調(diào)諧。調(diào)諧成

功，會有綠勾浮現(xiàn)，查看intellistart報告

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intellistart中自動生成的質(zhì)譜方法：

從MassLyn*主窗口,單擊MSMethod,浮現(xiàn)MSMethod編輯對話框，僻File>

open,螃Intellistart中保存的質(zhì)譜方法的文件，雙擊方法，如發(fā)現(xiàn)自動調(diào)諧生產(chǎn)的

質(zhì)譜方法中部份參數(shù)有誤，則可以在Channels窗口手動修改參數(shù)，填寫

relentinonwindow中的end時間，此時間必須與液柜色譜方法運行時間保持一

致，選擇AutoDwell,單擊OK，點擊File>SaveAs,保存質(zhì)譜方法文件。

3.5建立液相方法

3.5.1編輯液相方法

在液相方法編輯窗口，單擊Inlet，輸入溶劑名稱，runtime及梯度洗脫程序，

梯度洗脫?!序中最后階段時間必須與runtime符合，單擊OK,選擇File>SaveAs

保存方法，單擊LoadMethod,平衡液相。

建立樣品列表

在Masslyn*主窗口，選擇File〉New建立一個空白的表samplelist。輸入文件名

FileName,樣品信息FileTe*t,雙擊MSFile,僻質(zhì)譜方法，雙擊InletFile,

選擇液相方法，在Bottle中輸入樣品瓶的位置，在InjectVolume中輸入進樣體

積，可右鍵〉Add,增加樣品表的行數(shù)，保存樣品表：File>SaveAs。

選:l:l要采集的樣品，單擊Run>StartAcquireSampleDataonly,,單擊OK開

始進樣并采集。

在采集過程中，可查看色譜圖，點擊Chromatogram窗口，點擊Real-time

Updateicon.如果不能見整個TIC圖，單擊DefaultRange圖標。

如果方法中包括多個通道,可通過Display>Mass查看

如果方法中包括多個檢測器或者多個Function,可通過Display>TIC查

看處理多個Function的嬸

如果質(zhì)譜方法中有多個Function,如有三個Function,如想看第二個Function,

MSScan

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在色譜圖窗口，點擊,選中,僻,單擊

.1Display>TICMSScanAddtraceOKo

2如想查第二個Function,DaughterScan質(zhì)譜圖，在色譜圖中，謝圣Display>TIC,

僻,單擊

ScanWaveDSAddtraceOKo

.3.選擇Process>binespectra.分別用右鍵愉入信號和本底噪音.單擊OK.得

至[]的質(zhì)譜圖,單擊,單擊

DaughterScanProcess>Smooth...OKo

3.7數(shù)據(jù)處理-外標定量法

在Masslyn*主頁面單擊Ta，getlyn*/Editmethod,浮現(xiàn)定量方法編輯對話框，

單擊新建方法圖標，新建一個定量方法。

單擊Addnewpound（添D嘀的化合物）圖標,添加T新的化合物。

單擊菜單欄update,選中QuantitationIon和poundName（前面打勾）

在Masslyn*主頁面，打開中等偏下低濃度標準品的色譜圖，Display/Mass

chromatogram選出要定量的化合物的離子對，普通強度高的化合物用來做為定量

離子，另T離子對則作為確證子，用鼠標右鍵在定量離子對色譜圖舊立一下，

則poundname,AcquisitionFunctionNumber,QuantificationTrace,Predicted

RetentionTime和RetentionTimewindow將自動輸入定量方法中。注意:在色

譜圖上拉的時候，要遵循兩個原則，拉的位置要以色譜峰的峰尖擺布對稱，拉的

寬度要超過峰的起點和終點。

單擊工作曲線圖標，在工作曲線設置頁面，填入

ConcentrationUnits濃度單位，例如ng/ml,ug/kg,ppb,ppm等。

一再圣

ConcentrationofStandard:LevelConc.A0

PolynomialType-選擇Linear.（可根據(jù)自己行業(yè)的規(guī)定）

CalibrationOriginJ??e*dude承滁原點）,include（包含原點）,force?雖缶恒原點）

WeithtingFunction（U?）_l/*什睡自己行定）

PropagateCalibrationParametersjd］果所有的化合物均用相同的工作曲線的參

數(shù)，選Yes

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歹I」表，選中Ape*TrackEnabled（打勾，YES）,IntegrationWindow

E*tent輸入2,選中PropagateIntegrationParameters（打勾），如果色譜峰并非

很對稱的色譜圖，可先在色譜圖上先設定參數(shù)，積分，好積分參數(shù)滿意之后,

process/integrate.../copy，在Targetlyn*方法中Edit/Past就可將鄲占貼到

Targetlyn/法中。建議用Ape*Track積分方法，Smooth方法建議用smooth

重復上面的過程，寺蟆他幾個化合物的信息全部加入,

iteration^smoothwidth20

保存方法：File/SaveAs,保倭ij當前項目的MethDB文件夾中，正確的samplelist

表格模板，除了前面進樣時的選項之外，還要有sampletype^ConA,等選中要處

理的樣品，單擊ProcessSamples,浮現(xiàn)下圖的對話框，確保選中Integrate、

sample,calibrateStandard,QuantifySample,渴翱4才^^?0^Targetlyn*75法，

單擊OK后，浮殯量結(jié)果對話框。可木雕自己勺需要,用鼠標右鍵，ChangColumn

Order來增加或者減少Summary中的選項。

3.8關(guān)棚辨

日常關(guān)機：

.1如果流動相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水,灌注2分鐘，流速設為

0.2ml/min,80%水相，沖洗至少30分鐘，換成80稀機ffl,沖洗至少20分鐘，

停流速，水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機相，沖洗至少20分鐘，停流速，

柱溫為室溫。

2關(guān)質(zhì)譜：主界面masstune或者電腦下面儀器圖標--界面左側(cè)偏上

fluidics—flowstate圜？為waste、關(guān)氧氣，masstune界面或者電腦下面儀器圖

標工具欄第6個〉關(guān)高壓masstune界面右下角>等待去溶劑氣溫度降低至100

度以下masstune界面或者電月ST面儀器圖標左低脆上

ES+sourcetemperature—desolvation>關(guān)氮氣，點擊氮氣發(fā)生器開啟開關(guān)。

3.8.2徹底關(guān)機

.1先完成日常關(guān)機

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.2泄真空:tunepage>vacuum>vent—yes>等衙辟侖份子泵車舞降到10以

下,masslyn*主界面左側(cè)instrument——Masstune界面左側(cè)偏上

diagnostics—vacuum--sourceturbospeed[%]

3退出軟件，其他界面先退出，主界面最后退出

.4關(guān)質(zhì)譜電源>關(guān)所有UPLC電源，計算機電源，儀器三個電源順序無所謂，

關(guān)氮氣發(fā)生器，氨氣。

.5如果有UPS,關(guān)閉UPS電源,計算機電源。

4日常維護、保養(yǎng)及注意事項

4.1儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設施布局合理。

4.2儀器室溫度應相對穩(wěn)g,普通酶制在20-25。。保持恒溫；相對濕g最好為

50-70%，室內(nèi)應備有溫度II和濕度”，普通采用空調(diào)和吸濕機調(diào)節(jié)溫度和濕度。

4.3氣壓過濾機械泵油，住手樣品采集、住手流動相、關(guān)閉高壓、關(guān)閉所有氣流，

關(guān)閉離子源內(nèi)的真空隔離閥。用一字鏢絲刀順時針方向擰開機械泵上的GasBallast

閥四分之一圈,運行30分鐘后再把GasBallast閥旋轉(zhuǎn)到原來關(guān)閉的位置。對于

ESI源,至少每星期做一次，對于APCI源，每天做一次。

4.4開高壓之前一定要先開氮氣，關(guān)氮氣之前一定要先關(guān)高壓。

4.5ESI離子化與溶劑密切相關(guān)，在使用*些溶劑和添加物需要注意以下幾個方

面：三氟乙酸(TFA)多用于蛋白質(zhì)和多肽分析，但^寸ESI離子化有抑制效應；三

乙胺(TEA)在m/z102處有較強的[M+H]+峰，有可能會抑制*些堿性化合物在正

離子ESI條件下的離子化，也有