動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體課件-高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體第二章第1節(jié)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)思考?討論動(dòng)物細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，不能無(wú)限增殖123正常細(xì)胞124癌細(xì)胞1.若要生產(chǎn)一種只對(duì)癌細(xì)胞起作用的抗體，應(yīng)該選哪種抗原蛋白分子？2.什么細(xì)胞能產(chǎn)生抗蛋白4的抗體？它能大量增殖嗎？怎樣才能獲得這樣的細(xì)胞？3.什么細(xì)胞能無(wú)限增殖？怎樣才能獲得一種既能分泌特定抗體且無(wú)限增殖的細(xì)胞？細(xì)胞融合37℃40min1、概念：2、原理：3、方法：使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法形成的雜交細(xì)胞具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。4、結(jié)果：5、優(yōu)點(diǎn)：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能動(dòng)物細(xì)胞融合項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合成功的標(biāo)志主要用途意義細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁剪碎+胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞電融合法、離心法；PEG、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法滅活病毒誘導(dǎo)法再生出細(xì)胞壁細(xì)胞核的融合獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與植物體細(xì)胞雜交的比較融合的具有同種核的細(xì)胞、單克隆抗體給小鼠注射特定抗原脾中提取多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞未融合親本細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞融合篩選1篩選2體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔內(nèi)方法：方法：PEG、電融合、滅活病毒應(yīng)用到的技術(shù)：原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)從腹水中提取從培養(yǎng)液中提取任務(wù)一：閱讀課本單克隆抗體制備，思考以下問題1.給小鼠特定抗原的目的？2.如果要從小鼠脾臟中獲得更多產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞，可以怎么做？3.為什么從小鼠脾中提取的B淋巴細(xì)胞有多種而不是一種？4.如果只考慮細(xì)胞間的兩兩融合，融合體系中有幾種細(xì)胞？為什么？5.第一次篩選的方法，選出雜交瘤細(xì)胞是一種還是多種，為什么？6.第二次篩選的方法，目的是要得到什么細(xì)胞？7.大規(guī)模的生產(chǎn)單克隆抗體的方法有幾種？注射到小鼠腹腔中有什么優(yōu)點(diǎn)？誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生分分泌特定抗體的B淋巴細(xì)胞反復(fù)給小鼠注射特定抗原小鼠接觸過多種抗原，產(chǎn)生了多種B淋巴細(xì)胞5種細(xì)胞融合是隨機(jī)的，且融合率達(dá)不到100%選擇培養(yǎng)基；克隆化培養(yǎng)+抗體檢測(cè)；小鼠接觸過多種抗原，脾中提取的B細(xì)胞多種，誘導(dǎo)形成了多種雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞、單克隆抗體給小鼠注射特定抗原脾中提取多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞未融合親本細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞融合篩選1篩選2體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔內(nèi)方法：方法：PEG、電融合、滅活病毒選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)從腹水中提取從培養(yǎng)液中提取優(yōu)點(diǎn)：未融合的親本細(xì)胞和同種核融合的細(xì)胞都會(huì)死亡。原理：抗原抗體特異性結(jié)合操作簡(jiǎn)單，不需要培養(yǎng)培養(yǎng)基，對(duì)環(huán)境要求低。（可進(jìn)行多次）選擇培養(yǎng)基—雜交瘤細(xì)胞【第一次篩選】知識(shí)拓展全合成途徑（D途徑）：補(bǔ)救合成途徑（S途徑）：糖、氨基酸H、T核苷酸DNA酶B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞合成DNAD途徑S途徑D途徑氨基蝶呤?A阻斷?A阻斷B、瘤、BB、瘤瘤、B瘤（雜交瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)—產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞【第二次篩選】知識(shí)拓展脾B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合選擇培養(yǎng)基抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性細(xì)胞-產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)原理：抗原抗體特異性結(jié)合（可進(jìn)行多次）病原體脾B淋巴細(xì)胞+抗體1抗體2抗體3抗體4抗體1抗體2抗體3抗體4分離血清產(chǎn)量低、純度低、特異性差準(zhǔn)確識(shí)別抗原細(xì)微差異、與特定抗原特異性結(jié)合、可以大量制備。血清分離抗體：?jiǎn)慰寺】贵w：細(xì)胞融合選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)+抗體檢測(cè)運(yùn)載藥物抗體：特異性識(shí)別抗原，起到靶向運(yùn)輸作用藥物：發(fā)揮治療作用，殺死靶細(xì)胞診斷試劑本節(jié)小結(jié)原理方法