第一節(jié)概述第二節(jié)β內(nèi)酰胺類抗生素的分析第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析第四節(jié)四環(huán)素

第十一章抗菌類藥物的分析第一節(jié)

概述第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析第三節(jié)

氨基糖苷類抗生素的分析第四節(jié)

四環(huán)素類抗生素的分析第五節(jié)喹諾酮類藥物的分析第六節(jié)磺胺類藥物的分析第一節(jié)概述抗菌類藥物、抗生素的概念：

抗菌藥物是指對(duì)細(xì)菌具有抑制和殺滅作用的藥物，包括抗生素和人工合成抗菌藥。

抗生素（antibiotics）是指在低微濃度下即可對(duì)某些生物的生命活動(dòng)有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱。第一節(jié)概述一、抗生素的特點(diǎn)

1.化學(xué)純度低：同系物多、異構(gòu)體多、降解產(chǎn)物多。2.活性組分易變異：菌株變化、發(fā)酵條件改變可引起產(chǎn)品質(zhì)量變化。3.穩(wěn)定性差：本身分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易分解，使療效降低或失效甚至產(chǎn)生毒副作用

第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（一）鑒別試驗(yàn)

1.化學(xué)方法

2.儀器分析方法3.生物學(xué)方法第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（二）雜質(zhì)檢查1.異常毒性試驗(yàn)

限制藥品中引起毒性反應(yīng)的雜質(zhì)。2.熱原試驗(yàn)

限制藥品中引起體溫異常升高的致熱物質(zhì)。3.降壓試驗(yàn)

限制藥品中含有降低血壓的雜質(zhì)。4.無菌試驗(yàn)

檢查藥品中細(xì)菌污染的情況，保證產(chǎn)品用藥安全。第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（二）雜質(zhì)檢查5.澄明度檢查

限制藥品中不溶性雜質(zhì)。6.水分測(cè)定

檢查藥品中水分含量，確保產(chǎn)品穩(wěn)定。7.酸堿度檢查

規(guī)定產(chǎn)品溶液的酸堿度，使產(chǎn)品穩(wěn)定且適合臨床應(yīng)用。第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（三）含量或效價(jià)測(cè)定1.抗生素微生物檢定法：抗生素微生物檢定法是以抗生素抑制細(xì)菌生長(zhǎng)或殺滅細(xì)菌的能力作為衡量抗生素效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)。藥典中收錄的測(cè)定方法為管碟法和濁度法第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（三）含量或效價(jià)測(cè)定1.抗生素微生物檢定法優(yōu)點(diǎn)靈敏度高、用量少適用范圍廣，可用于已知、未知藥物與臨床要求一致缺點(diǎn)操作繁瑣、測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)、測(cè)定誤差大第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（三）含量或效價(jià)測(cè)定2.化學(xué)及物理化學(xué)法：本類方法是根據(jù)抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用其特有的化學(xué)或物理化學(xué)性質(zhì)而進(jìn)行的。優(yōu)點(diǎn)簡(jiǎn)單、快速專屬性高缺點(diǎn)不一定代表抗生素的效價(jià)第一節(jié)概述二、抗生素的質(zhì)量控制方法

（三）含量或效價(jià)測(cè)定3.抗生素活性表示方法

抗生素的活性以效價(jià)單位表示，即指每毫升或每毫克中含有某種抗生素的有效成分的多少。用單位（U）或微克（μg）表示。1mg青霉素鈉定為1670單位；1mg的慶大霉素定為590單位；1mg的硫酸卡那霉素定為670單位。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）基本結(jié)構(gòu)A:β-內(nèi)酰胺環(huán)；B:氫化噻唑環(huán)A:β-內(nèi)酰胺環(huán)；B:氫化噻唑環(huán)

青霉素類

頭孢菌素類第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析常見青霉素類藥物的結(jié)構(gòu)第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析常見頭孢菌素類藥物的結(jié)構(gòu)頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢拉定頭孢噻吩鈉第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）理化性質(zhì)1.性狀

青霉素類和頭孢菌素類藥物大多數(shù)為白色、類白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。其分子中的游離羧基具有較強(qiáng)的酸性，能與無機(jī)堿或某些有機(jī)堿形成鹽，它們的堿金屬鹽易溶于水。2.旋光性青霉素、頭孢菌素分子中均含有手性碳原子，故具有旋光性。如藥典規(guī)定苯唑西林鈉的比旋度應(yīng)為+195°～+214°。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）理化性質(zhì)3.紫外吸收特征青霉素分子中的母核部分無共軛結(jié)構(gòu)，但其側(cè)鏈部分具有苯環(huán)或其他共軛系統(tǒng)，則有最大吸收。如頭孢氨芐的水溶液在262nm處有最大吸收4.β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性易受親核性或親電性試劑的進(jìn)攻，在酸、堿、青霉素酶以及某些氧化劑的作用下，β-內(nèi)酰胺環(huán)易分解或發(fā)生分子重排，產(chǎn)生一系列降解產(chǎn)物，從而失去抗菌作用。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸pH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2青霉素的降解反應(yīng)第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（一）色譜法1.薄層色譜法與對(duì)照品比較比移值與斑點(diǎn)顏色。

2.高效液相色譜法

是通過比較供試品與對(duì)照品色譜行為的一致性進(jìn)行鑒別的。一般規(guī)定：在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（二）光譜法1.紫外-可見分光光度法（1）根據(jù)供試品的最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行鑒別將供試品配制成一定濃度的水溶液，根據(jù)其吸收光譜的最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行鑒別。（2）利用水解產(chǎn)物的最大吸收波長(zhǎng)鑒別將供試品在一定條件下水解，測(cè)定水解物的最大吸收波長(zhǎng)與吸光度。青霉素鈉第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（二）光譜法2.紅外分光光度法物質(zhì)的紅外光譜可以反映其相應(yīng)的分子結(jié)構(gòu)。幾乎所有分子結(jié)構(gòu)已知的抗生素原料藥都有其特征的紅外光譜，專屬性較強(qiáng)。中國(guó)藥典規(guī)定，在一定的條件下，將供試品的紅外吸收?qǐng)D譜與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照?qǐng)D譜，進(jìn)行對(duì)照應(yīng)一致。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（三）化學(xué)鑒別法1.鉀、鈉鹽的焰色反應(yīng)

青霉素類和頭孢菌素類抗生素的鈉鹽在無色火焰中燃燒顯鮮黃色。

青霉素類和頭孢菌素類抗生素測(cè)鉀鹽在無色火焰中燃燒顯紫色。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（三）化學(xué)鑒別法2.呈色反應(yīng)（1）肽鍵特征反應(yīng)

本類藥物中含有-CONH-結(jié)構(gòu)，一些取代基是α-氨基酸結(jié)構(gòu)的藥物，可顯雙縮脲反應(yīng)和茚三酮反應(yīng)。如氨芐西林遇茚三酮顯藍(lán)紫色。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（三）化學(xué)鑒別法2.呈色反應(yīng)（2）羥肟酸鐵反應(yīng)

β-內(nèi)酰胺類抗生素中的β-內(nèi)酰胺環(huán)在堿性介質(zhì)中與羥胺反應(yīng)，β-內(nèi)酰胺環(huán)開裂，生成羥肟酸，在稀酸溶液中與三價(jià)鐵離子作用生成羥肟酸鐵配離子而呈色。不同的青霉素與頭孢菌素形成的配合物顯示出不同的顏色。如哌拉西林顯紅棕色。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析二、鑒別（三）化學(xué)鑒別法3.其他反應(yīng)

頭孢菌素7位側(cè)鏈含有—C6H5OH基團(tuán)時(shí)，能與重氮苯磺酸試液產(chǎn)生偶合反應(yīng)，顯橙黃色。普魯卡因青霉素水溶液酸化后，游離出的芳伯胺基，顯重氮化偶合反應(yīng)，生成紅色的偶氮化合物沉淀。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析三、雜質(zhì)檢查

本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等，一般采用HPLC法控制其含量，也有采用測(cè)定雜質(zhì)的吸光度來對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行控制的方法。（一）高分子雜質(zhì)抗生素藥物中的高分子雜質(zhì)系指藥品中分子量大于藥物本身的雜質(zhì)的總稱。

高分子雜質(zhì)按其來源可分為外源性雜質(zhì)和內(nèi)源性雜質(zhì)。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析

外源性雜質(zhì)包括蛋白、多糖、多肽類等雜質(zhì)或其與抗生素的結(jié)合物。來源：發(fā)酵工藝，其中蛋白多肽類雜質(zhì)在抗生素的過敏反應(yīng)中起著重要作用。內(nèi)源型雜質(zhì)系指藥物的自身聚合物。來源：生產(chǎn)過程，也可在貯存過程中形成，甚至也可因使用不當(dāng)而產(chǎn)生。高分子雜質(zhì)方法

分子排阻色譜法，如：青霉素聚合物照分子排阻色譜法（通則0514）測(cè)定。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析（二）有關(guān)物質(zhì)的檢查

一般采用高效液相色譜法檢查。第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類抗生素的分析四、含量測(cè)定

青霉素和頭孢菌素含量測(cè)定可采用抗生素微生物檢定法和理化測(cè)定法?！吨袊?guó)藥典》2015年版多采用高效液相色譜法。

頭孢哌酮含量測(cè)定Ch.P.（2015）【含量測(cè)定】填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相三乙胺醋酸溶液-乙腈-水（1.2:120:880)對(duì)照品頭孢哌酮第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)鏈霉素第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)慶大霉素第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)慶大霉素R1R2R3分子式C1CH3CH3HC21H43N5O7C2CH3HHC20H41N5O7C1aHHHC19H39N5O7C2aHHCH3C20H41N5O7慶大霉素C復(fù)合物第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）理化性質(zhì)1.堿性該抗生素的分子中含有多個(gè)羥基和堿性基團(tuán)，是具有堿性的水溶性抗生素，可與無機(jī)酸結(jié)合成可溶于水、但幾乎不溶于有機(jī)溶劑的鹽類。臨床上應(yīng)用的主要為硫酸鹽。2.旋光性本類抗生素分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)氨基糖，具有旋光性。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）理化性質(zhì)3.水解性其硫酸鹽水溶液在pH=5～7.5，溫度低于25℃時(shí)最穩(wěn)定；過酸或過堿均發(fā)生水解而失效，加溫可促進(jìn)水解。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）理化性質(zhì)4.紫外吸收鏈霉素分子中含有胍基，在230nm處有紫外吸收。但慶大霉素、奈替米星在紫外區(qū)無吸收。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（一）茚三酮反應(yīng)α-氨基醇、羥基胺類藍(lán)紫色第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（一）茚三酮反應(yīng)α-氨基醇、羥基胺類藍(lán)紫色第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（二）麥芽酚反應(yīng)

鏈霉素特征的反應(yīng)。鏈霉素在堿性溶液中，鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)擴(kuò)大形成六元環(huán)，然后消除N—甲基葡萄糖胺和鏈霉胍，再消除鏈霉胍生成麥芽酚。麥芽酚在弱酸性溶液中可與鐵離子（Fe3+）形成紫紅色配位化合物。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（二）麥芽酚反應(yīng)

鏈霉素特征的反應(yīng)。鏈霉素在堿性溶液中，鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)擴(kuò)大形成六元環(huán)，然后消除N—甲基葡萄糖胺和鏈霉胍，再消除鏈霉胍生成麥芽酚。麥芽酚在弱酸性溶液中可與鐵離子（Fe3+）形成紫紅色配位化合物。紫紅色第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（三）N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)

本類抗生素經(jīng)水解可產(chǎn)生葡萄糖胺衍生物，如鏈霉素經(jīng)水解可產(chǎn)生N-甲基葡萄糖胺，在堿性溶液中可與乙酰丙酮反應(yīng)，形成吡咯衍生物，再與對(duì)二甲氨基苯甲醛在酸性醇溶液中反應(yīng)生成櫻桃紅色縮合物。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（四）坂口反應(yīng)

鏈霉胍特有反應(yīng)橙紅色次溴酸鈉8-羥基喹啉（或α-萘酚）第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析二、鑒別（五）硫酸鹽反應(yīng)

本類藥物多為硫酸鹽，各國(guó)藥典都將硫酸根的鑒別試驗(yàn)作為鑒別這類抗生素的一個(gè)方法。（六）色譜法

薄層色譜法，應(yīng)用較廣泛。

高效液相色譜法

（七）光譜法

多采用紅外分光光度法鑒別此類藥物，比較供試品的紅外吸收?qǐng)D譜和相應(yīng)對(duì)照?qǐng)D譜的一致性。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析三、雜質(zhì)檢查

（一）有關(guān)物質(zhì)的檢查

《中國(guó)藥典》2015年版多采用高效液相色譜法測(cè)定此類藥物有關(guān)物質(zhì)的含量。

（二）慶大霉素C組分的測(cè)定*對(duì)微生物的活性無明顯差異*毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同工藝差別C組分比例不一致方法：HPLC第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析三、雜質(zhì)檢查（三）溶液的澄清度與顏色

硫酸鏈霉素和硫酸慶大霉素均應(yīng)檢查溶液的澄清度與顏色，以控制生產(chǎn)中引入的雜質(zhì)、菌絲體、培養(yǎng)基、降解產(chǎn)物和色素等的限量。

硫酸鏈霉素受熱后可發(fā)生變質(zhì)反應(yīng)。（四）硫酸鹽測(cè)定

本類抗生素臨床應(yīng)用的主要為其硫酸鹽，各國(guó)藥典規(guī)定利用配位滴定法測(cè)定硫酸鹽含量。第三節(jié)氨基糖苷類抗生素的分析四、含量測(cè)定

主要用微生物檢定法。部分藥物采用HPLC法。

例硫酸鏈霉素Ch.P.（2015）【含量測(cè)定】精密稱取本品適量，加滅菌水定量制成每1ml中約含1000單位的溶液，照抗生素微生物檢定法（通則1201）測(cè)定?？尚畔蘼什坏么笥?%。1000慶大霉素單位相當(dāng)于1mg慶大霉素。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)

四環(huán)素類抗生素可以看作四并苯或萘并萘的衍生物，由A、B、C、D四個(gè)環(huán)組成。根據(jù)結(jié)構(gòu)中各取代基R、R1、R2、R3的不同構(gòu)成了不同的四環(huán)素類抗生素。慶大霉素第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）性質(zhì)二甲胺基弱堿性酚羥基、烯醇型羥基弱酸性1.酸堿性兩性第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）性質(zhì)四環(huán)素含有6個(gè)結(jié)晶水，水含量達(dá)到19.6%。含結(jié)晶水的四環(huán)素類抗生素在加熱或放置在干燥器內(nèi)則會(huì)失去結(jié)晶水，若再將其置于空氣中，則又吸收空氣中的水分，恢復(fù)到原來所含結(jié)晶水的數(shù)目。2.引濕性第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）性質(zhì)（1）差向異構(gòu)化反應(yīng)3.不穩(wěn)定性

第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）性質(zhì)（2）酸性條件下的降解反應(yīng)3.不穩(wěn)定性

第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）性質(zhì)（3）堿性條件下的降解反應(yīng)3.不穩(wěn)定性

四環(huán)素異四環(huán)素第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（二）性質(zhì)4.與金屬離子形成配合物

四環(huán)素類抗生素分子中具有酚羥基和烯醇基，能與許多金屬離子形成有色配位化合物。5.紫外吸收和熒光特性

本類抗生素分子內(nèi)含有共軛雙鍵系統(tǒng)，在紫外光區(qū)有吸收，在紫外光照射下能產(chǎn)生熒光，其降解產(chǎn)物也具有熒光，可供鑒別。6.旋光性四環(huán)素類抗生素分子中具有手性碳原子，因此具有旋光性。第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析二、鑒別（一）硫酸反應(yīng)

四環(huán)素類與硫酸反應(yīng)，立即產(chǎn)生不同顏色，可用此法鑒別和區(qū)別各種四環(huán)素類藥物。鹽酸四環(huán)素

顯深紫色鹽酸金霉素

顯藍(lán)色后又轉(zhuǎn)變?yōu)殚蠙炀G色鹽酸土霉素

顯朱紅色鹽酸多西環(huán)素

顯黃色鹽酸美他環(huán)素

顯橙紅色。第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析二、鑒別（二）三氯化鐵反應(yīng)

四環(huán)素類抗生素分子結(jié)構(gòu)中具有酚羥基，遇三氯化鐵試液立即產(chǎn)生顏色。

第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析二、鑒別（三）氯化物反應(yīng)

本類抗生素臨床多用其鹽酸鹽，顯氯化物鑒別反應(yīng)。（四）紫外-可見分光光度法

四環(huán)素類抗生素分子中含有共軛雙鍵系統(tǒng)，在紫外光區(qū)有吸收，故可利用其紫外-可見分光光度法鑒別。如鹽酸多西環(huán)素在269nm和354nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，在234nm和296nm的波長(zhǎng)處有最小吸收。第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析二、鑒別（五）熒光分光光度法

本類抗生素分子結(jié)構(gòu)中含有共軛雙鍵系統(tǒng)，在紫外光照射下可產(chǎn)生熒光，其降解產(chǎn)物也具有熒光，可供鑒別。（六）紅外分光光度法

《中國(guó)藥典》2015年版收載的四環(huán)素類抗生素可采用了紅外分光光度法鑒別。方法是測(cè)定其吸收?qǐng)D譜后，與藥品的標(biāo)準(zhǔn)圖譜進(jìn)行對(duì)比，判斷其真?zhèn)?。第四?jié)四環(huán)素類抗生素的分析二、鑒別（七）薄層色譜法

薄層色譜法設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便，中國(guó)藥典采用本法鑒別此類抗生素。如《中國(guó)藥典》2015年版規(guī)定鹽酸土霉素的鑒別應(yīng)用此法。（八）高效液相色譜法

中國(guó)藥典采用高效液相色譜法作為四環(huán)素類的鑒別方法。方法是：在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析三、雜質(zhì)檢查

（一）有關(guān)物質(zhì)的檢查

鹽酸四環(huán)素類藥物中如含有降解產(chǎn)物及異構(gòu)雜質(zhì)將會(huì)影響藥品的質(zhì)量，不僅可使抗菌活性降低，而且有些患者出現(xiàn)惡心、嘔吐、糖尿、酸中毒及蛋白尿等毒副反應(yīng)。四環(huán)素中的雜質(zhì)，如差向四環(huán)素、脫水四環(huán)素以及差向脫水四環(huán)素是引起臨床上毒性反應(yīng)的主要物質(zhì)。檢查方法：HPLC第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析三、雜質(zhì)檢查

（一）有關(guān)物質(zhì)的檢查

鹽酸四環(huán)素類藥物中如含有降解產(chǎn)物及異構(gòu)雜質(zhì)將會(huì)影響藥品的質(zhì)量，不僅可使抗菌活性降低，而且有些患者出現(xiàn)惡心、嘔吐、糖尿、酸中毒及蛋白尿等毒副反應(yīng)。四環(huán)素中的雜質(zhì)，如差向四環(huán)素、脫水四環(huán)素以及差向脫水四環(huán)素是引起臨床上毒性反應(yīng)的主要物質(zhì)。檢查方法：HPLC第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析三、雜質(zhì)檢查（二）雜質(zhì)吸光度的檢查

四環(huán)素類抗生素的異構(gòu)體、降解產(chǎn)物及差向脫水物越多，表現(xiàn)出顏色越深，并且吸光度也越大。各國(guó)藥典規(guī)定雜質(zhì)吸光度的最大值以限制雜質(zhì)的限量。鹽酸多西環(huán)素的吸光度檢查如下：取本品，精密稱定，加鹽酸溶液（9→100）的甲醇溶液(1→100）溶解并定量稀釋制成每1ml中含10mg的溶液，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得過0.12第四節(jié)四環(huán)素類抗生素的分析四、含量測(cè)定

《中國(guó)藥典》2015年版已全部采用高效液相色譜法測(cè)定其含量。鹽酸四環(huán)素Ch.P.（2015）填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相：醋酸銨溶液[0.15mol/L醋酸銨溶液-0.01mol/L的EDTA溶液-三乙胺（100:10:1）用醋酸調(diào)節(jié)pH至8.5]-乙腈（83:17）按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算第五節(jié)喹諾酮類藥物的分析概述喹諾酮類藥物是一類化學(xué)合成抗菌藥，具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)、使用安全、易于制造及不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)臨床使用的喹諾酮類抗菌藥分為四代。分類代表藥物第一代萘啶酸第二代吡哌酸第三代諾氟沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星、氧氟沙星第四代加替沙星、莫西沙星、左氧氟沙星、司帕沙星一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)喹諾酮類藥物母核結(jié)構(gòu)：4-喹諾酮-3-羧酸典型藥物（二）理化性質(zhì)1.性狀：白色或微黃色至黃色結(jié)晶性粉末。2.酸堿兩性：酸性——羧基；堿性——氮原子。3.還原性：哌嗪基4.與金屬離子反應(yīng)：易與金屬離子（鈣、鎂、鐵、鋅）形成螯合物。使用注意：不宜與含鈣或鐵的食物、藥物同服；長(zhǎng)期使用注意鈣流失。（二）理化性質(zhì)5.紫外吸收光譜特性分子結(jié)構(gòu)中均有共軛體系，可用紫外分光光度法進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定。二、鑒別試驗(yàn)（一）氟元素反應(yīng)F-+茜素氟藍(lán)+Ce3+

藍(lán)紫色（二）紫外-可見分光光度法鑒別多種喹諾酮類藥物（三）紅外分光光度法標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法PH4.3二、鑒別試驗(yàn)（四）薄層色譜法諾氟沙星的鑒別：取本品與諾氟沙星對(duì)照品適量，分別加三氯甲烷-甲醇（1:1）制成每1ml中含2.5mg的溶液，作為供試品溶液與對(duì)照溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨溶液（15:10:3）為展開劑，展開，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的位置與熒光應(yīng)與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的位置與熒光相同。（五）高效液相色譜法供試液主峰保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品主峰保留時(shí)間一致。三、雜質(zhì)檢查（一）溶液澄清度檢查控制堿不溶性雜質(zhì)的限量：喹諾酮類藥物在堿中易溶，而中間體等雜質(zhì)不溶。（二）有關(guān)物質(zhì)檢查多數(shù)喹諾酮類藥物均需做有關(guān)物質(zhì)檢查。方法：HPLC法舉例：1.諾氟沙星中有關(guān)物質(zhì)的檢查2.司帕沙星中有關(guān)物質(zhì)檢查四、含量測(cè)定（一）非水溶液滴定法多利用喹諾酮類藥物的弱堿性，以冰醋酸為溶劑，高氯酸為滴定液進(jìn)行滴定。吡哌酸的含量測(cè)定：取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸20ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.lmol/L）滴定至溶液顯純藍(lán)色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml高氯酸滴定液（0.lmol/L）相當(dāng)于30.33mgC14H17N5O3。（二）紫外-可見分光光度法喹諾酮類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有共軛體系，在紫外區(qū)具有特征性吸收，可利用吸收系數(shù)法或?qū)φ掌繁容^法進(jìn)行含量測(cè)定和溶出度測(cè)定。（三）高效液相色譜法《中國(guó)藥典》2015年版幾乎對(duì)所有喹諾酮類藥物采用HPLC測(cè)定其含量。第六節(jié)磺胺類藥物的分析概述磺胺類藥物是分子中具有對(duì)氨基苯磺酰胺的母核結(jié)構(gòu)的衍生物。母體結(jié)構(gòu)中磺酰胺基上的氫原子被取代后的衍生物，稱為N1取代物；對(duì)氨基上的氫被取代的衍生物稱為N4取代物。臨床上使用的主要是N1取代物。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)781.芳伯氨基：重氮化-偶合反應(yīng)；芳醛縮合反應(yīng)2.堿性、弱還原性3.可在堿性條件下與金屬離子形