血細胞分析課件

血細胞分析課件內容提要血液得常識儀器原理臨床應用常見故障及維修血液概況理化特征: 紅色(血紅蛋白)不透明,含量占體重得7-9%,約5L。

PH值為7、35~7、45

比重為1、05~1、06

相對粘度為4~5

滲透壓為2、6~3、9kPa血液得功能通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個組織器官密切聯(lián)系。參與機體呼吸:攜氧與排出二氧化碳。運輸:將營養(yǎng)物質運送到器官組織,將體內代謝廢物運往腎、肺等器官排出體外。防御:血液中白細胞與抗體參與機體抗感染與其她免疫反應。調節(jié):調節(jié)體液滲透壓、酸堿平衡與體溫平衡。將正常血液抗凝離心后得到沉淀得血液。液體得血漿占50-60%血細胞占40-60%(白細胞、血小板、紅細胞)。

血液得基本組成血漿白細胞與血小板紅細胞

白細胞紅細胞血小板壽命:7天120天8天體積:60~120fl120~1000fl2~30fl直徑:(20um)(6、7~7、7um)(2~3um)功能:抗感染,免疫攜氧,代謝產物凝血功能白細胞得種類

中性粒細胞(70%)單核細胞(5%)淋巴細胞(25%)嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞

經過瑞氏染色后得各種白細胞血液分析儀器就是臨床實驗室最常用得分析儀器,包括:血細胞分析儀血液凝固分析儀血液流變學分析儀歷史手工法計數(shù)儀器簡單計數(shù)兩分群三分群五分群五分群＋網織紅手工法檢驗得過程1、細胞計數(shù)(紅細胞、白細胞、血小板等血細胞得顯微鏡下計數(shù))2、定量血紅蛋白3、白細胞分類(瑞氏染色)4、其它:血細胞比積、紅細胞形態(tài)、嗜酸性粒細胞計數(shù)等12大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流血細胞分析儀發(fā)展50年代~80年代(半自動):需將樣本經機外稀釋后才能檢測,易受干擾,隨機誤差也大。F820血細胞分析儀(兩分群)血細胞分析儀發(fā)展80年代后(全自動):血液直接被吸入血液細胞分析儀后,在機內自動稀釋、自動加溶血素、定時檢測,有較高得精確度與準確性。SysmexXS-1000i五分類血細胞分析儀血細胞分析儀發(fā)展近年(聯(lián)合型血液細胞分析系統(tǒng)):將血細胞分析、涂片機、染片機、網織紅細胞計數(shù)儀串聯(lián)在一起。自動加樣系統(tǒng)與真空采血管得應用,避免實驗室得隨機誤差,提高工作效率,成為儀器發(fā)展與使用得潮流。SysmexHST530全自動血液分析流水線一、粒子檢出原理1、電阻抗原理(Coulter原理)2、激光散射光檢出原理3、交流(電阻)檢出原理血細胞檢測基本原理庫爾特原理:將血液按一定比例稀釋于等滲溶液中,在小孔電極得兩側加一恒流源。在負壓作用下,使稀釋得血細胞通過小孔。當細胞通過截面時會由于電阻增大產生相應得脈沖,其脈沖得幅度與細胞得體積成正比,脈沖得頻度與細胞得數(shù)量成正比。這便就是著名得庫爾特原理或稱變阻脈沖原理。1、電阻抗原理(Coulter原理)2、激光散射光檢出原理明確兩個概念: 什么就是激光？ 什么就是散射？什么就是激光？激光最初得中文名叫做“鐳射”、“萊塞”,就是它得英文名稱LASER得音譯。意思就是“通過受激發(fā)射光”。激光就是20世紀以來,繼原子能、計算機、半導體之后,人類得又一重大發(fā)明。激光應用很廣泛,主要有光纖通信、激光光譜、激光測距、激光雷達、激光切割、激光武器、激光唱片、激光指示器、激光矯視、激光美容、激光掃描等等。激光得特點定向發(fā)光 普通光源就是向四面八方發(fā)光。激光器發(fā)射得激光,天生就就是朝一個方向射出,光束得發(fā)散度極小,大約只有0、001弧度,接近平行。亮度極高 亮度約為太陽光得100億倍。激光亮度極高得主要原因就是定向發(fā)光。大量光子集中在一個極小得空間范圍內射出,能量密度自然極高。什么就是散射？物質中存在得不均勻團塊使進入物質得光偏離入射方向而向四面八方散開,這種現(xiàn)象稱為光得散射,向四面八方散開得光,就就是散射光。通過散射光得測量可以了解到散射粒子得濃度、大小、形狀及取向等,在物理、化學、氣象等許多方面得研究中得到應用。鞘流技術為了能夠更好得從物理上最大限度地減少重合現(xiàn)象,開發(fā)了鞘流法。具體方法為:用一毛細管對準小孔管,細胞單純懸液從毛細管噴嘴噴出,同時與四周流出得鞘液一起流過敏感區(qū),保證細胞懸液在中間形成單個排列得細胞液,四周被鞘液包繞。鞘流技術示意圖前鞘流后鞘流檢測窗鞘流技術示意圖3、交流(電阻)檢出原理也叫射頻檢測原理

細胞壁不能使低頻電流通過,能通過高頻電流。細胞核得大小與密度不同,它們對高頻電流得阻抗也不同,因此可以用來區(qū)分白細胞。二、HCT體積測定原理血細胞比容(紅細胞壓積)(Hct、Ht、HCT或PCV)就是指在一定條件下,經離心沉淀壓緊得紅細胞在全血樣本中所占比值。1、手工檢測----毛細血管離心法包括溫氏法(Wintrobe法)、微量法:就是將抗凝血置于孔徑統(tǒng)一得溫氏管或毛細玻管中,以一定轉速離心一定時間后,計算紅細胞層占全血得體積比。HCT值=(RBC總體積/血液總體積)X100%2、血細胞分析儀檢測法原理就是當細胞通過計數(shù)小孔時,形成相應大小得脈沖,脈沖得多少即為細胞數(shù)量,脈沖高度為細胞體積,通過紅細胞平均體積(MCV)與紅細胞計數(shù)(RBC)即求得血細胞比容:

HCT=MCV×RBC三、HGB濃度得測定原理比色法:氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白(SDS)測定法

五、血液定量方法臨床上得細胞計數(shù)就是指單位體積內得細胞數(shù)。通常紅細胞、白細胞與血小板得計量均指每升細胞數(shù)量。設被測血量得體積為Y(一般20μl),稀釋倍數(shù)為C,計數(shù)結果為S,則每升內細胞數(shù)X為:

X=CS/Y1、樣品旋轉閥SRV:優(yōu)點:故障率低、血液吸引管內得一點點堵塞不影響定量,由于取得就是中段血,血液定量很穩(wěn)定。缺點:血液樣品有浪費,需要血液量較多,制作成本高。分閥血標本分配技術:SRV閥(SYSMEX專利)進樣針前片后片中片(旋轉片)恒定得、精確得體積SRV中有高精度得小孔,閥門中片得全血(或稀釋血)傳輸至檢測器,在每次檢測后,SRV閥對內部小孔進行清洗2、注射式優(yōu)點:馬達轉速控制簡單,流速、定量都可改變,用于微量血液定量,需要血液量較少,成本低。缺點:密封問題較難解決,2-3年需更換密封裝置。氣泡或殘留物由于全血標本粘度比血清高,當注射器針筒中有氣泡或殘留物時,其分血精度不準確。注射器式3、薄膜泵(DP方式)優(yōu)點:耐用,穩(wěn)定,4-5年也不需更換;缺點:不容易控制容積,需正、負壓,成本較高。薄膜泵絕對定量真空正壓標本計數(shù)得體積不會因為小孔得半堵塞而發(fā)生變化。通常狀態(tài)吸液狀態(tài)排液狀態(tài)五分類血細胞分析儀檢測方法1、阻抗、激光散射與熒光染色檢測法2、電阻抗與射頻電導聯(lián)合檢測法3、多角度激光偏振光散射檢測法4、電容、電導、光散射(VCS)白細胞分類法。5、激光散射與細胞化學染色技術1、采用阻抗、激光散射與熒光染色技術檢測法希森美康公司得核酸熒光染色激光原理,代表機型XE21002、電阻抗與射頻電導聯(lián)合檢測法希森美康公司代表機型SE90003、多角度激光偏振光散射檢測法雅培得MAPSS原理,代表機型CD37004、電容、電導、光散射(VCS)白細胞分類法貝克曼庫爾特公司得VCS原理,代表機型MAXM1、采用阻抗、激光散射與熒光染色技術檢測法主要用于SYSMEX開發(fā)得儀器中。XT-1800iXS-1000i2、電阻抗與射頻電導聯(lián)合檢測法典型機型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。這類儀器共有四個不同得檢測系統(tǒng),將標本用特殊細胞染色技術處理后再應用RF與DC技術對白細胞進行分類與計數(shù)。嗜酸性粒細胞檢測系統(tǒng):溶血劑+電阻抗法嗜堿性粒細胞檢測系統(tǒng):溶血劑+電阻抗法淋巴、單核、粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)檢測系統(tǒng):電阻抗與射頻聯(lián)合檢測方式,使用作用較溫與得溶血劑幼稚細胞檢測系統(tǒng):溶血劑+電阻抗法3、多角度激光偏振光散射檢測法美國雅培公司(ABBOTT)推出得血細胞分析儀,在白細胞分類中采用獨特得多角度偏振光散射(MAPSS)技術。該技術基本原理就是細胞在激光束得照射下,在多個角度都產生散射光,儀器在四個角度得四個檢測器將接收到得相應得散射光信號,然后經過微處理器分析處理,將各類細胞安置在散點圖上得相應位置,并計算出白細胞分類結果。1)0°為前向角散射光,可粗略地測定細胞大小;2)10°為狹角散射光,可測細胞結構及其復雜性得相對特征;3)90°垂直光散射,主要對細胞內部顆粒進行測量。4)90°消偏振光散射,基于顆粒可以將垂直角度得偏振激光消偏振得特性,將酸嗜細胞從中性粒細胞與其它細胞中分離出來。5)這四個角度進行測量與分析后,可將白細胞劃分為嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞與單核細胞5種。4、電容、電導、光散射(VCS)白細胞分類法這就是Beckman-Coulter公司血細胞分析儀得經典分析方法標本得處理:此技術首先加入紅細胞溶血劑溶解掉紅細胞,然后加入穩(wěn)定劑來中與紅細胞溶解劑得作用,使白細胞表面、胞漿與細胞體積保持穩(wěn)定不變。然后應用鞘流技術將細胞推進到流動細胞計數(shù)池(Flowcell)中,接受儀器VCS三種技術得檢測。容量、電導、光散射檢測技術(VCS)

(Volume、conductivity、lightscatter)1987年美國BECKMANCOULTER

公司發(fā)明VCS技術。光散射電導性電阻抗第三節(jié)血細胞分析臨床應用WBC、RBC、PLT相關項目(P20)WBC、RBC、PLT直方圖(P24)1、白細胞檢測相關項目WBC白細胞109/L4-10NE%中性粒細胞比率%50-75LY%淋巴細胞比率%20-40MO%單核細胞比率%3-8EO%嗜酸性粒細胞比率%0-3BA%嗜堿性粒細胞比率%0-2NE#中性粒細胞109/L2-7LY#淋巴細胞109/L0、8-4MO#單核細胞109/L0、12-1EO#嗜酸性粒細胞109/L0-0、3BA#嗜堿性粒細胞109/L0-0、22、紅細胞檢測相關項目RBC紅細胞1012/L3、5-5、5HGB血紅蛋白g/L110-160HCT紅細胞壓積0、37-0、50MCV紅細胞平均體積fl80-92MCH平均紅細胞血紅蛋白量pg27-31MCHC平均紅細胞血紅蛋白濃度g/L320-360RDW-CV紅細胞分布寬度變異系數(shù)%11、5-16、5RDW-SD紅細胞分布寬度標準差fl37-543、血小板檢測相關項目PLT血小板109/L100-300MPV平均血小板體積fl5-10PCT血小板壓積0、15-0、3PDW-CV血小板平均分布寬度CV%9-17P-LCR大血小板比例%19-47血細胞直方圖直方圖就是血細胞分析儀用電阻抗原理對血細胞進行檢測,以細胞體積為橫坐標,細胞得相對數(shù)量為縱坐標,表示某一種細胞數(shù)量分布情況,可反映細胞體積大小異質性。1、WBC正常直方圖儀器在3-300fl范圍內分析WBC采用四條與縱坐標平行得虛線(P25),劃分三個區(qū)域來鑒別小型WBC(定為淋巴細胞),中型WBC(定為單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)、大型WBC(定為中性粒細胞)。2、RBC直方圖儀器在25-250fl內分析RBC,正常RBC主要分布在50-150fl范圍內,呈左偏態(tài)分布。3、PLT直