免疫分析中的干擾與消除

免疫分析中的干擾與消除概述基礎(chǔ)、前沿得話題普遍、常見得現(xiàn)象復(fù)雜、多樣得本質(zhì)深刻、直接得影響長(zhǎng)遠(yuǎn)、艱巨得任務(wù)定義IFCC:樣本中被分析物質(zhì)外存在得因素,產(chǎn)生得檢測(cè)信號(hào),表現(xiàn)在檢測(cè)結(jié)果上得系統(tǒng)性錯(cuò)誤。分析物不相關(guān)得因素溶血、脂血、抗凝樣本、樣本保存等分析物相關(guān)得因素

類風(fēng)濕因子,異嗜性抗體,自身抗體等免疫分析中干擾得分析不同次檢驗(yàn)結(jié)果得對(duì)比得不一致性檢驗(yàn)結(jié)果與臨床癥狀不符系列檢驗(yàn)結(jié)果得矛盾極度偏離,難以置信得檢驗(yàn)結(jié)果稀釋回收高度偏離預(yù)期與其她檢驗(yàn)試劑或方法相背離得結(jié)果常見“干擾”因素溶血高膽紅素脂血(對(duì)脂溶性物質(zhì)得干擾,NEFA)抗凝樣本(添加劑,分離膠)樣本得穩(wěn)定性與保存條件內(nèi)源性激素結(jié)合蛋白白蛋白TBG,SHBG,CBGFDH(家族性異常白蛋白高甲狀腺素血癥)游離激素得測(cè)定(標(biāo)記抗原,標(biāo)記抗原類似物,標(biāo)記抗體)內(nèi)源性抗體等干擾因素類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、溶菌酶、異嗜性抗體,HAAA等10%以上(30-40%)得病人體內(nèi)存在內(nèi)源性異嗜性抗體(CAP)10%-40%得人群存在HAMA干擾,取決于檢測(cè)試劑(LarryKricka,President,AACC)我國(guó)臨床醫(yī)療總誤診率為27、8%,比國(guó)際平均臨床醫(yī)療總誤診率25%高2、8個(gè)百分點(diǎn),其中惡性腫瘤誤診率為40%(2008),抗體干擾就是其中原因之一。異嗜性抗體產(chǎn)生得途徑類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎流行性感冒過敏輸血自身免疫疾病免疫抑制藥物心肌病變注射疫苗動(dòng)物接觸(飼養(yǎng)寵物)特定食物(奶酪)動(dòng)物輔助治療(胸腺細(xì)胞,胚胎細(xì)胞,羊細(xì)胞)血液透析母嬰傳遞腸胃炎(E、coli)類風(fēng)濕因子(Rheumatoidfactors,RF)自身抗體,體內(nèi)產(chǎn)生得以變性IgG(一種抗體)為抗原得一種抗體,通常為IgM,結(jié)合IgG得FC片段。約90%類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者得RF呈陽(yáng)性,在其她自身免疫疾病中也有一定得陽(yáng)性率。正常人有5%左右得陽(yáng)性率大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)類風(fēng)濕因子(Rheumatoidfactors,RF)去除Fc片段,用F(ab)2替代完整得IgG熱變性IgG處理檢驗(yàn)抗原時(shí),加入2-巰基乙醇使RF降解。類風(fēng)濕因子(Rheumatoidfactors,RF)IgM測(cè)定方法:捕獲包被和中和IgG補(bǔ)體(plement)存在于正常人和動(dòng)物血清與組織液中得一組經(jīng)活化后具有酶活性得蛋白質(zhì)。約占血清球蛋白總量得10％。極不穩(wěn)定,大部分對(duì)熱敏感,56℃30分鐘即失去活性。結(jié)合IgG得Fc片段,封閉結(jié)合位點(diǎn)。新鮮血清中得補(bǔ)體對(duì)試劑反應(yīng)干擾較大除熱滅活外,可用EDTA稀釋標(biāo)本緩解補(bǔ)體得影響。亦有推薦在試劑中加入雞IgG得,以抑制補(bǔ)體激活溶菌酶(Lysozyme)一種能水解致病菌中黏多糖得堿性酶,廣泛存在于人體多種組織中,鳥類和家禽得蛋清、哺乳動(dòng)物得淚、唾液、血漿、尿、乳汁等體液以及微生物中強(qiáng)烈結(jié)合低等電點(diǎn)蛋白,可橋接固相和標(biāo)記抗體導(dǎo)致假陽(yáng)性。可加入銅離子,形成絡(luò)合物可在試劑中加入卵清蛋白(pI=4、9)鳥蛋白(beckman)異嗜性抗體(Heterophilicantibodies,HA)HA就是存在于人類血清中,由已知或未知得抗原物質(zhì)刺激人體產(chǎn)生得,與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合得一類抗體。通常就是由于直接接觸動(dòng)物,污染得食品,接種動(dòng)物血清或疫苗而產(chǎn)生?？煞譃樘烊豢贵w和自身免疫抗體,親和力低,結(jié)合力弱,具有廣泛得特異性,普遍存在于人體中,多為IgG。HA可與試劑中抗體得Fc或者F(ab)區(qū)域得決定簇結(jié)合,從而干擾免疫反應(yīng)。人抗動(dòng)物抗體(HAAA)與HA具有一定得同源性,均能發(fā)生交叉反應(yīng),造成干擾免疫途徑較為明確,動(dòng)物免疫球蛋白治療或接觸史具有高親和力,可定向結(jié)合到動(dòng)物得抗原表位上HAAA有IgA,IgG,IgM等多種類型,又可分為抗同種型,抗獨(dú)特型,抗抗獨(dú)特型等三類物種廣泛,目前已報(bào)道抗鼠,牛,山羊,綿羊,馬等多種抗體不同種動(dòng)物Ig分子間蛋白質(zhì)序列有大量同源性,因此抗動(dòng)物抗體可與多種動(dòng)物免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)接觸動(dòng)物蛋白兩周后可產(chǎn)生抗體,存在時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)30個(gè)月人抗鼠抗體(HAMA)由于鼠抗在單克隆抗體影像,抗體治療以及診斷試劑中得廣泛應(yīng)用,使得HAMA尤其受關(guān)注抗同種型,抗獨(dú)特型,抗抗獨(dú)特型HAMA干擾機(jī)制HAMA干擾機(jī)制HAMA得鑒別稀釋樣本測(cè)定得值不成比例用參考試劑盒測(cè)定進(jìn)行對(duì)比其她試劑盒驗(yàn)證加入清潔抗體進(jìn)行對(duì)比HAMA測(cè)定試劑盒(6HAMA試劑盒)包被鼠抗,標(biāo)記鼠抗得夾心法包被鼠抗,標(biāo)記抗人IgG/IgM得間接法內(nèi)源性抗體干擾得消除試劑盒得設(shè)計(jì)原材料得選擇去除Fc片段嵌合抗體(RocheTSH/CEA)雞抗體樣本得預(yù)先處理固相血清吸附蛋白A之類得固相吸附劑

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