TNAIA 0364-2025 金銀花中12種有效成分含量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

ICSCCSA017

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0364-2025金銀花中12種有效成分含量的測定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法nf2estneeflos?Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod2025-01-24發(fā)布 2025-01-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會 發(fā)布T/NAIA0364-2025T/NAIA0364-2025II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會提出并歸口。生態(tài)研究所，寧夏回族自治區(qū)食品檢測研究院。吳燕、馬斌、開建榮、趙丹青、楊春霞、陳翔、石欣。T/NAIA0364-2025T/NAIA0364-2025PAGEPAGE1金銀花中12種有效成分含量的測定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法范圍本文件規(guī)定了金銀花中12種有效成分含量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。12（ABC規(guī)范性引用文件（有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理70%甲醇溶液超聲提取，上清液經(jīng)離心后，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，外標(biāo)法定量。試劑與材料除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。試劑甲醇(CH3OH，CAS號：67-56-1)：色譜純。乙腈(CH3CN，CAS號：75-05-8)：色譜純。甲酸(HCOOH，CAS號：64-18-6)：色譜純。溶液配制70%甲醇溶液(70+30，體積比)30mL70mL甲醇中，混勻。0.1%1.0mL1000mL，搖勻。標(biāo)準(zhǔn)品新綠原酸（CAS號906-33-2）、綠原酸（CAS號327-97-9）A（CAS號89919-62-0）B（CAS號14534-61-3）C（CAS號32451-88-0）、木犀草苷（CAS號5373-11-5）、獐牙菜苷（CAS號14215-86-2）冬苷（CAS號25694-72-8）、莫諾苷（CAS號25406-64-8）、當(dāng)藥醇苷（CAS號23445-00-3）、斷氧化馬錢子苷（CAS號58822-47-2）、斷馬錢子酸（CAS號60077-46-5），純度均≥98%。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1000mg/L)10mg（0.1mg）醇溶液(5.2.1)10mL，避光-18℃及以下條件保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲備溶液(10mg/L~100mg/L)醇溶液(5.2.1)定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存。材料微孔濾膜(水相)：13mm×0.22μm，或相當(dāng)者。儀器與設(shè)備液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源（ESI）。0.1mg0.01g。離心機(jī)：4000r/min。高速粉碎機(jī)：10000r/min。渦旋混合器。數(shù)控超聲波：40KHz。分析步驟試樣制備500-18存。樣品提取將試樣充分混勻，稱取0.02g，精確至0.0001g，置于100mL容量瓶中，先加入90mL甲醇溶液(5.2.1)，超聲處理30min，冷卻后定容至100mL，搖勻后靜置30min，過0.22μm濾膜，待測定。測定液相色譜參考條件a）色譜柱：C18柱，2.1mm（內(nèi)徑）×100mm，粒徑1.7μm，或相當(dāng)者；b）流動相：A相為甲酸水溶液(5.2.2)，B相為乙腈(5.1.2)c）流速：0.3mL/min；d）柱溫：40℃；e）進(jìn)樣量：2μL。表1 流動相及其梯度條件（VA+VB）時間minVA%VB%0.0090100.5090106.505957.505957.6090109.009010質(zhì)譜參考條件a）離子源類型：電噴霧離子源；b）掃描方式：負(fù)離子掃描；c）電噴霧電壓：負(fù)離子-4500V；d）離子源溫度：500℃；e）噴霧氣流速：50L/h；f）氣簾氣流速：50L/h；2A。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線精確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級用甲醇溶液(5.2.1)稀釋成質(zhì)量濃度為0.01mg/L、0.02mg/L0.05mg/L0.1mg/L0.2mg/L0.5mg/L1mg/L3mg/L5mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工5坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。定性及定量保留時間在±2.5%之內(nèi)。離子豐度比2品中存在目標(biāo)被測物。表2定性確證相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%20%至50%10%至20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%本方法的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測質(zhì)量色譜圖參見附錄B。定量外標(biāo)法定量。結(jié)果計算試樣中各組分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計，單位為毫克每千克（mg/kg），按公式(1)計算。X=1000

（1）式中：

m

………X——試樣中被測物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；ρ——基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L)；V——提取液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。221mg/kg3位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄C的要求。定量限本方法對12種有效成分的定量限為0.01mg/kg～0.1mg/kg(見附錄D)。附錄A（資料性）12種有效成分的保留時間、母離子、子離子及離子對質(zhì)譜參數(shù)12種有效成分的保留時間、母離子、子離子及離子對質(zhì)譜參數(shù)，見表A.1。表A.1 12種有效成分的保留時間、母離子、子離子及離子對質(zhì)譜參數(shù)序號中文名稱英文名稱保留時間min去簇電壓V離子對Ⅰ碰撞能V離子對Ⅱ碰撞能V1新綠原酸neochlorogenicacid1.54-120353.1/190.9-26353.1/134.9-422綠原酸chlorogenicacid2.25-120353.2/191.2-23353.2/84.9-583異綠原酸AisochlorogenicacidA3.95-120515.2/353.1-20515.2/191.0-404異綠原酸BisochlorogenicacidB3.88-120515.2/172.9-25515.2/335.9-405異綠原酸CisochlorogenicacidC4.05-120515.3/353.1-26515.3/173.0-406木犀草苷luteoloside3.78-120447.1/285.1-36447.1/256.1-607獐牙菜苷sweroside3.32-120357.2/124.9-25357.2/196.0-228忍冬苷lonicerin3.74-120593.2/285.0-52593.2/447.2-509莫諾苷morroniside2.18-120405.3/242.8-15405.3/141.1-3010當(dāng)藥醇苷swertianolin4.09-120435.2/271.9-32435.2/256.9-5611斷氧化馬錢子苷secoxyloganin3.52-120403.2/371.1-20403.2/179.2-2012斷馬錢子酸secologanicacid2.82-120373.0/59.0-20373.0/97.0-60附錄B（資料性）12種有效成分多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）質(zhì)量色譜圖12種有效成分多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）質(zhì)量色譜圖，見圖B.1。圖B.1 12種有效成分多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）質(zhì)量色譜圖附錄C（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求，見表C.1。表C.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求被測組分含量mg/kg精密度%>0.001≤0.01≤20>0.01≤0.1≤15>0.1≤1≤15>1≤10附錄D（資料性）12種有效成分中英文名稱和方法定量限12種有效成分中英文名稱和方法定量限，見表D.1。表D.112種有效成分中英文名稱和方法定量限序號中文名英文名方法定量限/mg/kg1新綠原酸neochlorogenicacid0.052綠原酸chlorogenicacid0.053異綠原酸AisochlorogenicacidA0.054異綠原酸BisochlorogenicacidB0.055異綠原酸CisochlorogenicacidC0.056木犀草苷lut