中藥制劑高效液相色譜法-高效液相色譜法的操作規(guī)范

中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法的操作步驟案例導(dǎo)入固本咳喘片中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定本品是由黨參、白術(shù)（麩炒）、茯苓、麥冬、鹽補(bǔ)骨脂、炙甘草、醋五味子加工而成的片劑采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，本品中含補(bǔ)骨脂的量以補(bǔ)骨脂素和鹽補(bǔ)骨脂素的含量計(jì)算測(cè)定前先要進(jìn)行色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液45：55為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000高效液相色譜儀應(yīng)該如何操作?案例導(dǎo)入固本咳喘片中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)包含了哪些內(nèi)容？進(jìn)行這項(xiàng)試驗(yàn)有何意義？中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法一、概述高效液相色譜法（HPLC）是采用高壓輸液泵將流動(dòng)相泵入到裝有填充劑的色譜柱中進(jìn)行分離并測(cè)定含量的方法高效液相色譜儀一般由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)分析處理系統(tǒng)共同組成中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法測(cè)定前：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法色譜條件一般包括填充劑（固定相）、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)、洗脫方式等系統(tǒng)適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、靈敏度、拖尾因子和重復(fù)性等參數(shù)二、高效液相色譜儀的操作步驟其中理論板數(shù)、分離度都是色譜柱柱效的評(píng)價(jià)因素例：復(fù)方丹參片含量測(cè)定理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）用流動(dòng)相沖洗濾器，再把過(guò)濾頭浸入流動(dòng)相中，啟動(dòng)泵開(kāi)關(guān)

1.泵的操作（2）打開(kāi)泵的排放閥，用沖洗鍵(PURGE)進(jìn)行泵排氣，一般約需3分鐘，然后關(guān)閉排放閥（3）將流速調(diào)節(jié)至分析用流速，對(duì)色譜柱進(jìn)行平衡，同時(shí)觀察壓力指示應(yīng)穩(wěn)定，初始平衡時(shí)間一般需約30分鐘中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）開(kāi)啟檢測(cè)器電源開(kāi)關(guān)，選擇光源，選定檢測(cè)波長(zhǎng)，待穩(wěn)定后，測(cè)試參比和供試品光路的信號(hào)應(yīng)符合要求

2.檢測(cè)器和色譜工作站的操作（2）開(kāi)啟色譜工作站，設(shè)定處理方法，初步設(shè)定電壓范圍、時(shí)間范圍等參數(shù)（3）記錄基線，待基線穩(wěn)定后方能進(jìn)行后續(xù)操作中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）調(diào)節(jié)進(jìn)樣手柄置于采樣位置(LOAD)

3.進(jìn)樣操作-六通閥式進(jìn)樣器（手動(dòng)進(jìn)樣器）（2）用待進(jìn)樣溶液清洗配套的微量注射器，再用注射器抽取適量溶液，排除氣泡（3）把注射器的平頭針直插至進(jìn)樣器底部，注入待測(cè)溶液，整個(gè)過(guò)程注射器不應(yīng)取下（4）將進(jìn)樣器手柄轉(zhuǎn)至進(jìn)樣位置(INJECT)，此時(shí)樣品溶液被流動(dòng)相帶入色譜柱中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）將待測(cè)溶液用0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液至進(jìn)樣瓶中，蓋上帶有墊片的瓶蓋，順時(shí)針?lè)较蛐o

3.進(jìn)樣操作-自動(dòng)進(jìn)樣器（2）將樣瓶依次放入貯樣室內(nèi)，記錄樣瓶位置號(hào)（3）對(duì)自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行檢查校正，使自動(dòng)進(jìn)樣器為默認(rèn)位置，檢查進(jìn)樣針沖洗系統(tǒng)是否正常、管路內(nèi)是否無(wú)氣泡、是否具有足夠的沖洗液和流動(dòng)相（4）設(shè)定自動(dòng)進(jìn)樣參數(shù)，包括供試品溶液自動(dòng)進(jìn)樣的起始位置、進(jìn)樣體積、數(shù)據(jù)文件名等中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）進(jìn)樣的同時(shí)啟動(dòng)色譜工作站，開(kāi)始采集和處理色譜信息

4.色譜數(shù)據(jù)的收集和處理（2）組分的最后一峰出完后應(yīng)繼續(xù)走一段基線，確認(rèn)再無(wú)組分流出后方能結(jié)束（3）含量測(cè)定的對(duì)照品溶液和供試品溶液每份至少進(jìn)樣2次，由全部進(jìn)樣結(jié)果(n≥4)求得平均值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)不應(yīng)大于1.5％（4）色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)應(yīng)符合《中國(guó)藥典》2020年版通則規(guī)定中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）分析完畢，先關(guān)檢測(cè)器和色譜工作站，再用經(jīng)濾過(guò)和脫氣的適當(dāng)溶劑清洗色譜系統(tǒng)，各種沖洗劑一般沖洗15-30分鐘

5.清洗和關(guān)機(jī)（2）沖洗完畢后逐步降低流速至0，關(guān)泵。進(jìn)樣器也應(yīng)用相應(yīng)溶劑沖洗，可用進(jìn)樣閥所附專用沖洗接頭（3）關(guān)閉電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期、檢品、色譜柱、柱壓、使用時(shí)間以及儀器使用前后的狀態(tài)等中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)——高效液相色譜法（1）進(jìn)樣前色譜柱應(yīng)用流動(dòng)相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)適用性不符合規(guī)定，或填充柱已損壞，則應(yīng)更換色譜柱再進(jìn)行分析操作注意事項(xiàng)（2）以硅膠為載體的化學(xué)鍵合相的穩(wěn)定性受流動(dòng)相pH值的影響，使用時(shí)應(yīng)注意在規(guī)定的pH值范圍內(nèi)選擇流動(dòng)相，一般pH值范圍在2.5-7.5（3）色譜流通系統(tǒng)從泵、進(jìn)樣器、色譜柱到檢測(cè)器流通池，在分析完畢后均應(yīng)充分沖洗，特別是使用過(guò)含鹽流動(dòng)相的，更應(yīng)該注意先用水，再用甲醇-水或乙腈-水充分沖洗鏈接未來(lái)崗位中藥制劑中有效成分或特征性指標(biāo)成分含量的測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的優(yōu)劣具有重要意義，同時(shí)也是藥品質(zhì)量檢驗(yàn)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本講內(nèi)容既是知識(shí)體系中的重點(diǎn)內(nèi)容，也是崗位工作中的重要技能作為一名藥品檢驗(yàn)人員，須牢固樹(shù)立“質(zhì)量第一、安全操作”的意識(shí)，牢固掌握高效液相色譜儀的操作方