核酸擴增技術分子生物學檢驗技術生物化學檢驗教研室82課件

分子生物學檢驗技術核酸擴增技術生物化學檢驗教研室學習目標掌握：PCR技術的基本原理及反應體系；及PCR產(chǎn)物電泳檢測方法。熟悉：PCR常見問題及體系優(yōu)化；實時熒光定量RCR的原理。了解：PCR衍生技術；產(chǎn)物的其他檢測方法；PCR方法標準化。目錄聚合酶鏈反應01PCR衍生技術02CONTENTS分子生物學檢驗技術CONTENTSPCR檢測技術的臨床應用03PCR檢測技術的臨床應用PART03PCR檢測技術的臨床應用01感染性疾病的診斷。02母嬰傳播的控制與觀察。03遺傳疾病的診斷。04腫瘤的診斷。05法醫(yī)學鑒定。06早期診斷。07病情評估和預后判斷。08抗病毒藥物療效的觀察、指導。09新藥驗證。一、感染性疾病病原體含量與病情之間的關系。01病原體含量與用藥之間的關系。02藥物及療法的研究與開發(fā)。03新的病原體分子診斷標準。04新的愈后指標。05傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預測與預防。06HBV-DNA定量檢測的臨床意義01“兩對半”：機體的免疫反應狀態(tài)；FQ-PCR：檢測的是HBV本身的遺傳物質—DNA，是病毒存在和復制的最可靠、最直接的指標。02“攜帶者”、“大三陽”、“小三陽”等免疫學指標不能反應體內病毒復制水平與感染程度。HBV-DNA定量與HBV復制水平及傳染性。HBV-DNA定量與乙肝藥物療效。a.專家提出<103copy/mL做為陰性或臨床治愈標準;b.HBV-DNA定量分析與干擾素治療（前、中、后）;c.拉咪呋啶。HBV-DNA定量與預后。a.含量高者急性肝炎患者易慢性化;b.癌變的幾率明顯高于含量低者。一、感染性疾病常見性傳播疾病病原體淋球菌（NGH）沙眼衣原體（CT）解脲脲原體（UU）梅毒螺旋體（TP）單純庖疹病毒（HSV）乳頭瘤病毒（HPV）人類免疫缺陷病毒（HIV）淋球菌感染與致病人是淋球菌的唯一宿主。發(fā)病率最高，在所STD疾病中，高達60%左右。發(fā)病趨勢：a.男性多于女性。b.城市走向農(nóng)村;c.高收入階層向低收入階層擴展。人對淋球菌感染無天然抵抗力，免疫不持久，再感染和慢性患者普遍存在。如母親為淋病患者，嬰兒出生時易患上淋球菌性結膜炎。沙眼衣原體感染與致病01嚴格的細胞內寄生。02不僅可致眼部感染、肺部感染、也是STD的主要病原體。03近年來在歐美等國，沙眼衣原體的感染率和危害性已超過淋球菌而居STD之首。04在我國，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。05泌尿生殖道感染，妨礙妊娠。06盆腔感染，可致生殖能力損害。解脲脲原體感染與致病合成尿素酶，分解尿素。在非淋球菌性尿道炎其感染率僅次于衣原體感染，居第二位。流產(chǎn)超過4次以上者，檢出率高達80%。有30-40%男性尿道炎是由感染UU所致。與男性不育相關。男性不育患者精液中，脲原體檢出率高達66.6％。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動力下降而升高。熒光定量PCR診斷NGH/CT/UU的意義01非培養(yǎng)或形態(tài)學檢查的診斷技術，快速、特異、敏感。02對無癥狀或癥狀輕者，可以早期確診。03對NGH、CT、UU等混合感染者，診斷和鑒別診斷。04指導用藥、考核療效。病毒實驗室檢測類型---病毒實驗室診斷方法方法檢測核酸檢測病毒檢測抗體/抗原ELISA/HI/PA蛋白印跡中和試驗基因芯片病毒分離ELISA電鏡免疫熒光RT-PCR實時熒光定量PCR二、腫瘤癌胚抗原、同工酶、抗體、激素、細胞因子、受體等。腫瘤標志物包括癌基因抗癌基因、腫瘤轉移基因及轉移抑制基因。腫瘤相