化學(xué)發(fā)光原理及應(yīng)用省公開課一等獎(jiǎng)全國示范課微課金獎(jiǎng)?wù)n件

化學(xué)發(fā)光原理及其應(yīng)用

第1頁主要內(nèi)容化學(xué)發(fā)光基本原理化學(xué)發(fā)光分類化學(xué)發(fā)光法臨床應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫測定特點(diǎn)第2頁P(yáng)artI.化學(xué)發(fā)光基本原理一、化學(xué)發(fā)光原理：伴隨化學(xué)反應(yīng)光發(fā)射現(xiàn)象

一些物質(zhì)在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)過程中，因?yàn)槲樟朔磻?yīng)產(chǎn)生化學(xué)能而被激發(fā)，從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，發(fā)射出一定波長光，這種吸收化學(xué)能使分子發(fā)光過程稱為化學(xué)發(fā)光(chemiluminescence)

。

化學(xué)發(fā)光反應(yīng)存在于生物體(螢火蟲、海洋發(fā)光生物)中，稱生物發(fā)光(bioluminescence)。生物發(fā)光本質(zhì)是化學(xué)發(fā)光第3頁1877年洛粉堿CL1905年洛粉堿類似物1928年魯米諾1935年光澤精發(fā)覺許多有機(jī)反應(yīng)可產(chǎn)生CL生物體化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象研究起源于古代，不過，直到十九世紀(jì)末，這種現(xiàn)象與簡單有機(jī)反應(yīng)相聯(lián)絡(luò)才得到解釋。第4頁二、化學(xué)發(fā)光反應(yīng)發(fā)生條件化學(xué)反應(yīng)是放熱反應(yīng)。必須存在形成電子激發(fā)態(tài)通道。激發(fā)態(tài)分子必須以輻射光子形式回到基態(tài),或?qū)⒛芰總鬟f給熒光分子。能量，通道，熒光物質(zhì)第5頁北京源德化學(xué)發(fā)光分析儀第6頁MAGLUMI化學(xué)發(fā)光分析儀第7頁P(yáng)artⅡ.化學(xué)發(fā)光分類按化學(xué)反應(yīng)類型可分為：酶促化學(xué)發(fā)光和非酶促化學(xué)發(fā)光兩類按發(fā)光連續(xù)時(shí)間可分為：閃光和輝光兩類第8頁P(yáng)artIII.化學(xué)發(fā)光法臨床應(yīng)用甲狀腺功效免疫分析糖代謝紊亂免疫分析常見腫瘤標(biāo)志物及其免疫分析常見傳染性疾病免疫檢測病毒性肝炎HIV感染嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS)其它免疫檢測項(xiàng)目第9頁甲狀腺功效免疫分析甲狀腺機(jī)能常見評(píng)價(jià)指標(biāo)及其臨床意義1.甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)

2.甲狀腺功效減退

3.低T3和低T3、T4綜合征

第10頁一、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)

1972年提出T3型甲亢診療標(biāo)準(zhǔn)：

1.甲亢癥狀和體征，常無突眼征，但心血管癥狀較顯著；

2.血清TT4、FT4值正常；

3.TT3、FT3值升高；

T3型甲亢在臨床上并非罕見，尤其是缺碘地域患功效自主性腺瘤部分患者，或用T3治療后出現(xiàn)碘甲亢，當(dāng)前認(rèn)為T3型甲亢不能算作一個(gè)獨(dú)立疾病，因?yàn)榘l(fā)覺T3型甲亢病人中有一部分即使TT3升高但FT3正常或低于正常，所以改稱高T3綜合征為妥。T4型甲亢，即T4毒癥患者血清T3、FT3濃度正常；而T4、FT4濃度升高。TSH值為正常低值或低于正常，并伴甲亢臨床癥狀。第11頁二、甲狀腺功效減退甲減為甲狀腺激素分泌不足引發(fā)代謝性疾病。臨床上分為原發(fā)性甲減，又稱魏甲狀腺性甲減；以及繼發(fā)性甲減，又稱垂體-下丘腦甲減兩類。血循環(huán)中甲狀腺激素濃度測定在診療甲減方面，TSH和FT3、FT4是靈敏診療指標(biāo)，顯著優(yōu)于總甲狀腺激素，如TT3、TT4等。其價(jià)值依次為TSH=FT4>TT4>FT3>TT3.第12頁

三、低T3和低T3、T4綜合征

低T3綜合征是一個(gè)因?yàn)榉羌谞钕偌膊≡斐杉谞钕偌に禺惓?，其發(fā)生與機(jī)體代謝狀態(tài)，基礎(chǔ)疾病性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及外來原因，如用藥等相關(guān)。代謝狀態(tài)差、基礎(chǔ)病情加重時(shí)其發(fā)生率隨之增高；當(dāng)病情好轉(zhuǎn)、機(jī)體健康情況趨于正常時(shí)，低T3狀態(tài)可自行消失。第13頁四、其它與甲狀腺疾病相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)抗甲狀腺球蛋白抗體（TGAb）多見于橋本氏甲狀腺炎、本身免疫性甲狀腺疾病、原發(fā)性甲狀腺功效減退、甲狀腺功效亢進(jìn)患者等。抗甲狀腺微粒體抗體（TMAb）多見于橋本氏甲狀腺炎、本身免疫性甲狀腺疾病、原發(fā)性甲狀腺功效亢進(jìn)、原發(fā)性甲狀腺功效減退。第14頁小結(jié)總而言之，若對(duì)甲狀腺功效指標(biāo)進(jìn)行全方面評(píng)價(jià)，則上述各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)甲亢診療價(jià)值依次為FT3>FT4>TT3>TT4；各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)甲減診療價(jià)值依次為FT4=TSH>TT4>FT3>TT3第15頁二、糖尿病免疫學(xué)檢測以下是臨床上常見相關(guān)糖代謝紊亂免疫分析指標(biāo)：

1.C肽

2.胰島素

3.胰島素抗體

4.谷氨酸脫羧酶抗體（GAD-Ab）

5.胰高血糖素第16頁C肽

C肽測定用于了解II型糖尿病人是否需要胰島素治療，假如C肽水平較低，葡萄糖刺激反應(yīng)差，則表示表明馬上或最終需要胰島素治療，也可用于評(píng)價(jià)糖尿病酮癥酸中毒病人胰島功效。C肽另一個(gè)主要臨床用途是各種低血糖病因判別。C肽水平升高科見于輕型糖尿病患者，常見空腹血糖升高不多者C肽大多高于正常。胰島素瘤患者，如血中存在胰島素抗體，血清C肽大都增高。胰腺腫瘤患者行胰腺切除后，如血清C肽仍可測出，提醒手術(shù)未能全部切除胰腺組織。假如手術(shù)后一度陰性，后又稱為陽性，提醒腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。在肝硬化時(shí)，血漿胰島素有升高趨勢，其原因在于肝臟攝取和降解胰島素降低；但空腹血糖正常。

第17頁胰島素胰島素在糖尿病分型和診療中意義重大，其中I型又稱胰島素依賴型糖尿?。↖DDM），空腹血漿胰島素較低，口服葡糖糖試驗(yàn)（OGTT)或饅頭餐后上升及下降極遲緩，甚至無任何改變，說明其胰島β細(xì)胞功效極差。II型又稱非胰島素依賴型糖尿?。∟IDDM），包含需胰島素治療和不需胰島素治療兩類，其特點(diǎn)為空腹高胰島素血癥；OGTT后胰島素釋放延遲，高峰后移，但總釋放量不低，約12%病人呈低反應(yīng)或延遲反應(yīng)說明II型糖尿病和I型糖尿病有本質(zhì)區(qū)分。另外胰島素對(duì)肝病、胰島素瘤、甲狀腺功效亢進(jìn)診療也有一定意義。第18頁常見腫瘤標(biāo)志物及其檢測胚胎性腫瘤標(biāo)志物含糖物質(zhì)類標(biāo)志物酶類標(biāo)志物激素類標(biāo)志物第19頁胚胎性腫瘤標(biāo)志物這一類腫瘤標(biāo)志物是指那些原本只能在胎盤期出現(xiàn)，但在機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，其基因表示被再度激活，從而重新再成年個(gè)體出現(xiàn)蛋白，其常見檢測標(biāo)志以下：標(biāo)志名稱生化本質(zhì)相關(guān)腫瘤組織細(xì)胞起源甲肽蛋白糖蛋白肝細(xì)胞、胚細(xì)胞癌胚鐵蛋白糖蛋白肝癌胚抗原糖蛋白結(jié)腸、直腸、胰腺、肺、乳腺胰癌胚抗原糖蛋白胰腺鱗狀細(xì)胞抗原糖蛋白肺、皮膚、頭和頸部組織多肽抗原細(xì)胞角蛋白乳腺、結(jié)腸第20頁CEA原發(fā)性結(jié)腸癌，患者CEA升高者占45-90%.胰腺癌、膽管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系腫瘤，陽性率50-70%。結(jié)腸癌患者手術(shù)切除后1-3周內(nèi)血中CEA水平可降至正常水平。如術(shù)后CEA連續(xù)陽性，說明手術(shù)切除不完全或癌腫發(fā)生轉(zhuǎn)移，提醒病人預(yù)后較差或者有復(fù)發(fā)可能。良性腫瘤、炎癥和退行性疾病，如結(jié)腸息肉、潰瘍性結(jié)腸炎、胰腺炎盒酒精性肝硬變病人CEA也有部分升高，但遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于惡性腫瘤，普通小于20μg/L.所以測定CEA可作為良性與惡性腫瘤判別診療依據(jù)。吸煙也可能造成CEA升高。第21頁AFP原發(fā)性肝癌：AFP作為原發(fā)性肝癌主要指標(biāo)之一，特異性強(qiáng)，靈敏度高。所以AFP為十分有價(jià)值臨床檢驗(yàn)及普查項(xiàng)目，陽性率達(dá)90%。血清含量大于400μg/L作為原發(fā)性肝癌診療閾值。孕婦血清AFP與胎兒狀態(tài)當(dāng)胎兒患低氧癥、宮內(nèi)死亡、遺傳缺點(diǎn)、先天性神經(jīng)管畸形、無腦兒、脊柱裂等，母體血清AFP異常增高。其它腫瘤有報(bào)道指出，68%-92%卵黃囊腫瘤患者血清AFP上升第22頁含糖物質(zhì)類標(biāo)志物CA125是上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌標(biāo)志物CA153存在于各種腺癌內(nèi)，如乳腺癌、肺癌、肺胰癌及卵巢癌等，是檢測乳腺癌比較主要抗原CA199通常作為胰腺癌和結(jié)、直腸癌標(biāo)志物CA50是胰腺和結(jié)、直腸癌標(biāo)志物CA72-4其檢測結(jié)果與CEA有互補(bǔ)作用，可用于檢測原發(fā)性乳癌、胃癌、直結(jié)腸癌以及卵巢癌患者殘余腫瘤細(xì)胞，可與CA-125聯(lián)適用于卵巢腫瘤診療及復(fù)發(fā)檢測，可與CA-199聯(lián)合應(yīng)用于胃癌診療以提升陽性率，也可用于胃癌術(shù)后監(jiān)測早期復(fù)發(fā)。CA242可用于胃腸道惡性腫瘤病人治療監(jiān)控和復(fù)發(fā)檢測。第23頁酶類標(biāo)志物前列腺特異性抗原PSA是前列腺癌特異性標(biāo)志物，也是當(dāng)前少數(shù)幾個(gè)器官特異性腫瘤標(biāo)志物之一。前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)主要囊性腫瘤，血清PSA定量測定陽性臨界值大于10μg/L,此時(shí)前列腺癌診療特異性達(dá)90-97%。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）對(duì)小細(xì)胞肺癌診療，判別診療、病情判斷及療效預(yù)計(jì)都有實(shí)際意義。第24頁激素類標(biāo)志物降鈣素：（1）甲狀腺髓樣癌此種癌起源于甲狀腺濾泡旁細(xì)胞，可產(chǎn)生各種生物活性物質(zhì)，其中以降鈣素為主，患者血清降鈣素水平高于正常數(shù)十到數(shù)百倍。（2）肺小細(xì)胞癌人絨毛膜促性腺激素（HCG）

HCG測定對(duì)葡萄胎、絨癌診療和化療后療效觀察，以及葡萄胎終止后隨訪有重大意義，普通而言，良性葡萄胎、惡性葡萄胎、絨癌治療前HCG均增高，其升高次序?yàn)椋航q癌>惡性葡萄胎>良性葡萄胎。第25頁常見傳染性疾病免疫檢測病毒性肝炎HIV感染及艾滋?。ˋIDS）嚴(yán)重急性呼吸綜合征第26頁病毒性肝炎甲型病毒性肝炎經(jīng)過糞-口路徑傳輸引發(fā)急性傳染性肝炎，當(dāng)前還未發(fā)覺有慢性病例。乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引發(fā)肝臟炎性損害，是我國當(dāng)前流行最廣泛、危害最嚴(yán)重一個(gè)轉(zhuǎn)染病。乙肝常見免疫學(xué)指標(biāo)有：A、潛伏期,HBsAg陽性或伴有乙肝病毒脫氧核糖核酸聚合酶(HBVDNAP)和HBsAg陽性。B、急性期，HBsAg，HBeAg,HBcAg,HBV-DNA,HBVDNAP，前S蛋白均可陽性。第27頁乙肝定量檢測方法及其優(yōu)點(diǎn)

a.檢測方法：當(dāng)前有時(shí)間分辨，熒光定量PCR定量檢測，化學(xué)發(fā)光法。因?yàn)橐腋尾《据p易發(fā)生變異，再加上乙肝定性試驗(yàn)不足，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，造成不能及時(shí)發(fā)覺乙肝感染，也就不能及時(shí)得到治療，對(duì)醫(yī)護(hù)人員和其它患者也存在被傳染威脅。乙肝五項(xiàng)定量檢測當(dāng)前最先進(jìn)化學(xué)發(fā)光法，防止了假陰性和漏檢問題，而且準(zhǔn)確，尤其對(duì)乙肝病人療效觀察提供了依據(jù)，這是檢驗(yàn)發(fā)展趨勢。乙肝五項(xiàng)定量檢測獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)：一、對(duì)于乙肝患者而言：1、經(jīng)過定量檢測乙肝標(biāo)志物，能直觀地顯示體內(nèi)五項(xiàng)指標(biāo)詳細(xì)情況，不再是簡單“陰性”和“陽性”，有利于動(dòng)態(tài)觀察病情，為選擇治療方案提供主要依據(jù)；2、定量檢測方法更靈敏，能測出低水平復(fù)制樣本，尤其是“窗口期”感染者，定量檢測法能夠有效檢出，能降低漏診；3、定量檢測測定范圍更寬，定性檢測時(shí)候，高濃度乙肝表面抗原樣本需要稀釋，不然會(huì)有假陰性出現(xiàn)，不過，定量檢測能有效檢出高濃度乙肝表面抗原樣本。二、對(duì)正常體檢者而言：1、可反應(yīng)HBV-抗體濃度改變，有利于對(duì)機(jī)體免疫情況進(jìn)行評(píng)定，對(duì)注射乙肝疫苗有指導(dǎo)意義。第28頁幾個(gè)常見乙肝模式HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb臨床意義1+-+-+急性期、慢性期、有較強(qiáng)傳染性，俗稱“大三陽”2+---+急性或慢性期，傳染性較強(qiáng)3+--++恢復(fù)期，傳染性弱，長久連續(xù)易癌變，俗稱“小三陽”4-+--+既往感染。仍有免疫力，非經(jīng)典恢復(fù)期5---++既往感染，急性乙型肝炎恢復(fù)期，基本無產(chǎn)燃性（少數(shù)仍有傳染性）6----+急性窗口期，既往過后康復(fù)期7-+---注射乙肝疫苗后，乙肝感染后已康復(fù)，有免疫力8-+-++急性感染期后康復(fù)期，既往感染，含有免疫力9-----未感染過乙肝第29頁幾個(gè)少見模式HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb臨床意義1+----急性HBV感染早期，慢性攜帶者，傳染性弱2+--+-慢性期，傳染性弱3+-+--早期HBV感染者或慢性攜帶者活動(dòng)期，傳染性強(qiáng)4+-+++急性感染，趨向恢復(fù)，慢性乙肝攜帶者5++---亞臨床型乙肝感染早期，不一樣亞型乙肝二次感染6++--+亞臨床型乙肝感染早期，不一樣亞型乙肝二次感染7++-+-亞臨床型或非經(jīng)典肺炎8+++-+亞臨床型感染或非經(jīng)典性感染早期9--+--非經(jīng)典性急性感染10--+-+非經(jīng)典性急性感染11--+++急性乙肝感染中期12-+-+-乙肝感染已恢復(fù)13-++--非經(jīng)典性或亞臨床型乙肝感染14-++-+非經(jīng)典性或亞臨床型乙肝感染第30頁病毒性肝炎丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎即HCV感染所致。其傳輸路徑與乙肝類似，主要包含血液傳輸、性接觸傳輸、母嬰傳輸、日常生活接觸等。第31頁其它檢測項(xiàng)目臨床常見藥品濃度檢測1.抗心甙類：西地蘭、地