犬細(xì)小病毒和犬冠狀病毒雙重RT-PCR檢測方法征求意見稿_第1頁
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1犬細(xì)小病毒和犬冠狀病毒雙重RT-PCR檢測方法本文件規(guī)定犬細(xì)小病毒病和犬冠狀病毒的雙重RT-NY/T5414縮略語CPV：犬細(xì)小病毒（CanineParvovRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reversetranscription-polymeraseRNA：脫氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）DEPC:焦碳酸二乙酯（Diethylpyrocarbona向1L超純水中加1mlDEPC（使終濃度為1‰），靜置4h以上，121℃高壓3025.3其他試劑5.5陽性對照和陰性對照含CPV和CCV的犬腎傳代細(xì)胞（MDCK）細(xì)胞毒、CPV和CCV的疫苗株、CPV和CCV的DNA片6.3高速臺式冷凍離心機(jī)：可控溫至4℃、離6.5漩渦震蕩器。37.2.1病毒核酸抽提使用Trizol手工提取，也可以使用等效的商品化病毒核酸提取7.2.2取n個(gè)滅菌的1.5mL離心管，其min。反復(fù)洗滌兩次后，將離心管倒扣于吸其反應(yīng)體系見附錄C，也可參考使用等效的商業(yè)化的PCR檢測試實(shí)驗(yàn)室生物安全要求應(yīng)符合GB19489的相關(guān)要求。4溶液配置將8.0gNaCl、0.2gKCl，1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4依次加入到800mL蒸于室溫。56體積(μL）終濃度(μM）2×MultiplexRT-PCR緩沖液Multiplex

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