JJF(津) 04-2020 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀校準(zhǔn)規(guī)范

天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀李時(shí)鑫(天津市計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)科學(xué)研究院)余松林(天津市計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)科學(xué)研究院)田昀(天津市計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)科學(xué)研究院)魏樹龍(天津市計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)科學(xué)研究院)王喆(天津市計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)科學(xué)研究院)張辰(軍事醫(yī)學(xué)研究院醫(yī)學(xué)計(jì)量測(cè)試研究站)宋雪陽(yáng)(國(guó)家體育總局體育科學(xué)研究所)李征(北京林電偉業(yè)電子技術(shù)有限公司)I 3.8平均降溫速率 8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá) 9復(fù)校時(shí)間間隔 附錄A熒光定量PCR儀校準(zhǔn)原始記錄參考格式 附錄B熒光定量PCR儀校準(zhǔn)證書內(nèi)頁(yè)參考格式 附錄C溫度示值誤差和閾值循環(huán)數(shù)示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例 本規(guī)范依據(jù)JJF1071-2010《國(guó)家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則》和JJF1001-2011《通用計(jì)量術(shù)語及定義》的要求編寫，依據(jù)JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》給出了溫度和閾值循環(huán)數(shù)示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例。計(jì)量特性等主要參考本規(guī)范為首次發(fā)布。1凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語YY/T1173-2010中界定的及以下術(shù)語和定義適用于本規(guī)范?；赑CR技術(shù)原理，模擬DNA或者RNA的復(fù)制過程，在模板、引物、聚合酶等3.3實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)分析儀real-timefluorescentquantitativePCR在溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀均熱塊設(shè)定溫度與所有采在溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀均熱塊所3.6溫度最大過沖量temperaturemaximumovershoot23.7平均升溫速率meanheatingrate在溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀均熱塊升溫過程中，所在溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀均熱塊降溫過程中，所3.9熒光染料fluorochrome短波長(zhǎng)激發(fā)光激發(fā)后，能夠釋放出可見光的試劑。(YY/T1173-2010)均熱塊測(cè)量孔在同一熒光條件下熒光強(qiáng)度重復(fù)測(cè)量值的一致性。(YY/T1173-3.11閾值循環(huán)數(shù)thresholdcycle均熱塊測(cè)量孔內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)指數(shù)擴(kuò)增時(shí)經(jīng)歷的循是以擴(kuò)增過程前3到15個(gè)循環(huán)的熒光值的10倍標(biāo)準(zhǔn)差為閾值，當(dāng)熒光值超過閾值時(shí)全總DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)降解一半時(shí)的溫度稱為PCR過程中均熱塊測(cè)量孔的熒光強(qiáng)度(縱坐標(biāo))與溫度(橫坐標(biāo))形成的曲線。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀校準(zhǔn)時(shí)，根據(jù)熔解曲線計(jì)算的熔解溫度值與光學(xué)模擬器熔解3.17通道峰值強(qiáng)度一致性(channe33.18線性靈敏系數(shù)(linearsensitivit4概述實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，全稱為實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)分fluorescentquantitativePCRanalyzer,RT-PCR,以下簡(jiǎn)稱熒光定量PCR儀)是通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)隨整個(gè)PCR進(jìn)程而變化的熒光信號(hào)強(qiáng)度，同時(shí)通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)行定量分析的儀器。標(biāo)記有熒光染料的探針與模板基因混合后，完成高溫變性、低溫復(fù)性和適溫延伸的熱循環(huán)后，與模板基因互補(bǔ)應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下熒光染料發(fā)出熒光，隨著循環(huán)次基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)，通過實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，既熒光定量PCR儀均熱塊一般有32孔板、48孔板、96孔板和384孔板等幾種類型，其中96孔板應(yīng)用最為廣泛。如圖1所示，其主要由溫度控制模塊、微量熒光檢測(cè)圖1熒光定量PCR儀結(jié)構(gòu)示意圖熒光定量PCR儀計(jì)量性能指標(biāo)如表1所示。4序號(hào)備注1溫度示值誤差溫度項(xiàng)目2溫度均勻度34溫度項(xiàng)目56閾值循環(huán)數(shù)示值誤差光學(xué)系統(tǒng)物理項(xiàng)目7閾值循環(huán)數(shù)均勻度8閾值循環(huán)數(shù)精密度9熔解溫度飄移熔解溫度比熒光強(qiáng)度精密度物化學(xué)項(xiàng)目熒光線性相關(guān)系數(shù)6校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件環(huán)境溫度：(15～30)℃;相對(duì)濕度：(20～85)%RH。6.2測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)和其它設(shè)備6.2.1光學(xué)模擬器光學(xué)模擬器集成了溫度傳感器和發(fā)射光發(fā)生器兩部分。其溫度測(cè)量范圍為(0~120)℃,最大允許誤差為±0.1℃,發(fā)射光發(fā)生器的波長(zhǎng)范圍為(360～780)nm,相對(duì)光輻射強(qiáng)度在(10%～100%)范圍內(nèi)可調(diào)。6.2.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5校準(zhǔn)時(shí)應(yīng)采用國(guó)內(nèi)外有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，包括：質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、核糖核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其特性量值(拷貝數(shù)≥10°copies/μL,相對(duì)擴(kuò)展不確定度≤5%)。6.2.3移液器規(guī)格：2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL,且需要計(jì)量檢定合格。7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法7.1校準(zhǔn)項(xiàng)目可根據(jù)客戶要求與實(shí)際情況選擇光學(xué)系統(tǒng)物理校準(zhǔn)方法其中一種對(duì)熒光定量PCR儀進(jìn)行校準(zhǔn)。選擇光學(xué)系統(tǒng)物理方法對(duì)熒光定量PCR儀進(jìn)行校準(zhǔn)時(shí)，校準(zhǔn)項(xiàng)目為溫度選擇光學(xué)系統(tǒng)生物化學(xué)方法對(duì)熒光定量PCR儀進(jìn)行校準(zhǔn)時(shí)，校準(zhǔn)項(xiàng)目為溫度項(xiàng)目7.2校準(zhǔn)方法7.2.1校準(zhǔn)前的準(zhǔn)備工作將熒光定量PCR儀及光學(xué)模擬器各部件連接完好，光學(xué)模擬器為集成傳感器，下方為溫度傳感器，上方為熒光發(fā)射光源。在光學(xué)模擬器下量導(dǎo)熱油，以確保其與均熱塊測(cè)量孔接觸良好。如圖2所示，將7個(gè)光學(xué)模擬器分布7.2.2校準(zhǔn)過程JJF(津)04—20206按照儀器說明書設(shè)置校準(zhǔn)程序。典型的校準(zhǔn)設(shè)置程序如表2所示。程序運(yùn)行結(jié)束后，讀取標(biāo)準(zhǔn)值和測(cè)量值。校準(zhǔn)程序步驟1到步驟3為預(yù)熱程序，步驟4到步驟11為溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序(其中30℃的溫度指標(biāo)測(cè)量數(shù)據(jù)來源于步驟6;平均升、降溫速率的測(cè)量數(shù)據(jù)分別來源于步驟4到步驟5和步驟5到驟6)。步驟12、13為光學(xué)模擬器光學(xué)擴(kuò)增程序，熒光定量PCR儀在步驟12和步驟13設(shè)定程序之間循環(huán)32次。表2校準(zhǔn)設(shè)置程序步驟設(shè)定溫度點(diǎn)持續(xù)時(shí)間備注1預(yù)熱程序234溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序56789擴(kuò)增變性程序熔解曲線分解程序7.2.3溫度示值誤差溫度示值誤差的計(jì)算按照公式(1)計(jì)算：式中：△T——采樣測(cè)量孔溫度示值誤差，℃;Ts——采樣測(cè)量孔的設(shè)定溫度值，℃;JJF(津)04—20207T?——第i個(gè)測(cè)量孔的溫度平均值，℃。7.2.4溫度均勻度溫度均勻度的計(jì)算按照公式(2)計(jì)算：式中：△Tu——采樣測(cè)量孔內(nèi)溫度均勻度，℃;Tumax——所有采樣測(cè)量孔溫度最大平均值，℃;Tumin——所有采樣測(cè)量孔溫度最小平均值，℃;7.2.5溫度最大過沖量圖3(a)和圖3(b)分別為單個(gè)采樣測(cè)量孔溫度上升和下降至設(shè)定溫度點(diǎn)的溫度最大過沖量示意圖。均熱塊所有采樣測(cè)量孔內(nèi)溫度最大過沖量的計(jì)算按照公式(3)計(jì)式中：△Tos——采樣測(cè)量孔內(nèi)溫度最大過沖量，℃;Tosmax——所有采樣測(cè)量孔測(cè)定溫度最大過沖值，℃;Ts——采樣測(cè)量孔的設(shè)定溫度值，℃。7.2.7平均升溫速率平均升溫速率是指在溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序中，熒光定量PCR儀均熱塊所有采樣測(cè)量孔從50℃升溫至90℃過程中，單位時(shí)間內(nèi)上升的平均溫度值，按公式(4)計(jì)算50℃→90℃的平均升溫速率：8TB——90℃溫度點(diǎn)所有采樣測(cè)量孔的溫度平均值，℃;TA——50℃溫度點(diǎn)所有采樣測(cè)量孔的溫度平均值，℃;tut——從50℃溫度點(diǎn)到達(dá)90℃溫度點(diǎn)的時(shí)間，S。7.2.8平均降溫速率平均降溫速率是指在溫度技術(shù)指標(biāo)校準(zhǔn)程序中，熒光定量PCR儀均熱塊所測(cè)量孔從90℃降溫至50℃過程中，單位時(shí)間內(nèi)下降的平均溫度值，按公式(5)計(jì)算tpT——從90℃溫度點(diǎn)到達(dá)50℃溫度點(diǎn)的時(shí)間，S。7.2.9閾值循環(huán)數(shù)示值誤差、均勻度和精密度閾值循環(huán)數(shù)Ct示值誤差的計(jì)算按照公式(6)計(jì)算，Ct均勻度的計(jì)算按照公式(7)計(jì)算，Ct精密度按照公式(8)計(jì)算(n為Ctqmax——所有采樣測(cè)量孔熒光信號(hào)達(dá)到閾值時(shí)熒光定量PCR儀實(shí)測(cè)的Ct最JJF(津)04—202097.2.10通道峰值強(qiáng)度一致性、線性靈敏系數(shù)當(dāng)DNA循環(huán)擴(kuò)增時(shí)從最大熒光強(qiáng)度100%逐漸減弱到20%過程中，理論上熒光定量PCR儀接收到的熒光強(qiáng)度也線性遞減。計(jì)算熔解曲線上熔解溫度(Tm)附近的溫度點(diǎn)對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度可得到通道峰值強(qiáng)度一致性(CPHC)和線性靈敏系數(shù)(LSF),其值分別按照公式(9)、公式(10)計(jì)算：式中：CPHCi——第i個(gè)采樣測(cè)量孔通道峰值強(qiáng)度一致性；Bi——第i個(gè)采樣測(cè)量孔熔解曲線上(Tm-2)℃對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度；Ci——第i個(gè)采樣測(cè)量孔熔解曲線上(Tm+2)℃對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度；B——所有采樣測(cè)量孔熔解曲線上(Tm-2)℃對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度平均值；C——所有采樣測(cè)量孔熔解曲線上(Tm+2)℃對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度平均值；LSF?——第i個(gè)采樣測(cè)量孔線性靈敏系數(shù)；A;——第i采樣測(cè)量孔熔解曲線上Tm℃對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度。7.2.11熔解溫度漂移和熔解溫度比熔解溫度漂移(△Tm)的計(jì)算按照公式(11)計(jì)算，熔解溫度比(RTm)的計(jì)算按照公式(12)計(jì)算。式中：△Tmi——第i個(gè)采樣測(cè)量孔熔解溫度漂移，℃;Tm;——第i個(gè)采樣測(cè)量孔熒光定量PCR儀實(shí)測(cè)的Tm值，℃;Tms——光學(xué)模擬器的Tm設(shè)定值，℃;Tmmax——所有采樣測(cè)量孔熒光定量PCR儀實(shí)測(cè)的Tm最大值，℃;Tmmin——所有采樣測(cè)量孔熒光定量PCR儀實(shí)測(cè)的Tm最小值，℃;tmax——設(shè)定Tm時(shí)，所有采樣測(cè)量孔光學(xué)模擬器測(cè)量的最大溫度值，℃;tmin——設(shè)定Tm時(shí)，所有采樣測(cè)量孔光學(xué)模擬器測(cè)量的最小溫度值，℃。7.2.12熒光強(qiáng)度精密度JJF(津)04—2020在熒光PCR儀均熱塊測(cè)量孔數(shù)量范圍內(nèi)，選取n個(gè)測(cè)量孔(一般n≥6)。分別將配制高、中、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)熒光染料溶液置入選取的測(cè)量孔中進(jìn)行一次測(cè)量，光學(xué)系統(tǒng)收集各測(cè)量孔的熒光強(qiáng)度。按照公式(14)計(jì)算熒光強(qiáng)度精密度。式中：RSDF——熒光強(qiáng)度精密度；F?——第i采樣測(cè)量孔單次測(cè)得的熒光強(qiáng)度。7.2.13樣本測(cè)量精密度選用配套使用的標(biāo)準(zhǔn)熒光染料對(duì)高、中、低濃度DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，每一濃度重復(fù)檢測(cè)6個(gè)測(cè)量孔，按照公式(15)計(jì)算C值的樣本測(cè)量精密度。式中：RSDs——樣本測(cè)量精密度；Si——第i采樣測(cè)量孔單次測(cè)得的C值。7.2.14熒光線性相關(guān)系數(shù)將已知濃度標(biāo)準(zhǔn)熒光染料梯度稀釋后(至少稀釋5個(gè)梯度)進(jìn)行測(cè)量，每種濃度重復(fù)測(cè)量n次取其平均值(一般取n=3),按公式(16)計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r:XFi——各個(gè)濃度梯度熒光染料第i次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)值；XF——各個(gè)濃度梯度熒光染料n次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)平均值；YFi——各個(gè)濃度梯度熒光染料第i次實(shí)驗(yàn)的測(cè)量值；yF——各個(gè)濃度梯度熒光染料n次實(shí)驗(yàn)的測(cè)量值平均值。7.2.15樣本線性相關(guān)系數(shù)將已知濃度DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋后(至少稀釋5個(gè)梯度)進(jìn)行測(cè)量，每種濃度重復(fù)測(cè)量n次取其平均值(一般取n=3),按公式(17)計(jì)算樣本線性相關(guān)系數(shù)rs:Xs——各個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)n次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)平均值；ys——各個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)n次實(shí)驗(yàn)的測(cè)量平均值。a)標(biāo)題“校準(zhǔn)證書”;b)實(shí)驗(yàn)室名稱和地址；c)進(jìn)行校準(zhǔn)的地點(diǎn)(如果與實(shí)驗(yàn)室的地址不同);d)證書的唯一性標(biāo)識(shí)(如編號(hào)),每頁(yè)及總頁(yè)數(shù)的標(biāo)識(shí)；k)校準(zhǔn)結(jié)果及其測(cè)量不確定度的說明；1)對(duì)校準(zhǔn)規(guī)范的偏離的說明；0)校準(zhǔn)結(jié)果僅對(duì)被校對(duì)象有效性的聲明；p)未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室書面批準(zhǔn)，不得部分復(fù)制校準(zhǔn)證書的聲明。附錄A送校信息：送校單位：校準(zhǔn)地點(diǎn)：生產(chǎn)單位：出廠編號(hào)：校準(zhǔn)證書編號(hào)：校準(zhǔn)依據(jù)：環(huán)境溫度：℃環(huán)境濕度：%RH標(biāo)準(zhǔn)器名稱出廠編號(hào)不確定度/準(zhǔn)確度等級(jí)證書編號(hào)有效日期標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱型號(hào)規(guī)格批號(hào)不確定度證書編號(hào)有效日期設(shè)定溫度點(diǎn)采樣測(cè)量孔實(shí)測(cè)溫度平均值(℃)溫度誤差溫度均勻度設(shè)定溫度點(diǎn)(℃)溫度最大過沖量平均升溫速率(℃/s)平均降溫速率(℃/s)類別光學(xué)模擬器不同分布位置測(cè)量的C值誤差均勻度精密度熒光定量光學(xué)模擬器Tm設(shè)定值：℃ABC光學(xué)模擬器分布位置/標(biāo)準(zhǔn)熒光染料溶液濃度不同采樣測(cè)量孔實(shí)測(cè)值熒光強(qiáng)度精密度(%)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液濃度不同采樣測(cè)量孔實(shí)測(cè)值精密度(%)七、熒光線性相關(guān)系數(shù)(光學(xué)系統(tǒng)生物化學(xué)項(xiàng)目)標(biāo)準(zhǔn)熒光染料溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)實(shí)測(cè)值實(shí)測(cè)熒光線性相關(guān)系數(shù)八、樣本線性相關(guān)系數(shù)(該光學(xué)系統(tǒng)生物化學(xué)項(xiàng)目與光學(xué)系統(tǒng)物理項(xiàng)目可選擇其中一樣本物質(zhì)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)實(shí)測(cè)值實(shí)測(cè)一、溫度項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果設(shè)定溫度點(diǎn)溫度示值誤差溫度均勻度溫度最大過沖平均升溫速率(℃/S)平均降溫速率(℃/S)二、光學(xué)系統(tǒng)物理項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果Ct值精密度(%)/三、光學(xué)系統(tǒng)生物化學(xué)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果熒光強(qiáng)度精密度標(biāo)準(zhǔn)熒光染料溶液濃度測(cè)量數(shù)值(%)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液濃度測(cè)量數(shù)值(%)熒光線性相關(guān)系數(shù)1、溫度示值誤差的擴(kuò)展不確定度：U=JJF(津)04—2020溫度示值誤差和閾值循環(huán)數(shù)示值誤差測(cè)量結(jié)果的不確定度評(píng)定示例C.1溫度示值誤差不確定度評(píng)定C.1.1測(cè)量方法將熒光定量PCR儀及光學(xué)模擬器各部件連接完好，光學(xué)模擬器為集成傳感器，下方為溫度傳感器，上方為熒光發(fā)射光源。在光學(xué)模擬器下方溫度傳感器表面上涂抹適量導(dǎo)熱油，以確保其與均熱塊測(cè)量孔接觸良好。如圖2所示，將7個(gè)光學(xué)模擬器分布于均熱塊測(cè)量孔中。溫度示值誤差的計(jì)算按照公式(C.1.1)進(jìn)行計(jì)算。C.1.2測(cè)量模型式中：△T——測(cè)量孔內(nèi)溫度示值誤差，℃;Ts——測(cè)量孔的設(shè)定溫度值，℃;T——第i個(gè)測(cè)量孔的測(cè)定溫度平均值，℃。C.1.3不確定度來源根據(jù)上述數(shù)學(xué)模型及測(cè)量方法，其不確定度來源主要包括以下三個(gè)方面：a)測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u?;b)光學(xué)模擬器溫度傳感器分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量ui;c)光學(xué)模擬器溫度傳感器測(cè)溫精度引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u?;各分量中，由于u?和ui存在一定關(guān)聯(lián)，計(jì)算中取兩者較大者。u?與其它兩個(gè)分量互C.1.4測(cè)量不確定度評(píng)定以溫度示值誤差最大的95℃為例，對(duì)同一臺(tái)熒光定量PCR儀，在相同的測(cè)量條件下，使用推薦的設(shè)定程序運(yùn)行10個(gè)循環(huán)，溫度穩(wěn)定后7溫度傳感器的重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)見JJF(津)04—2020次數(shù)測(cè)量點(diǎn)不同測(cè)量點(diǎn)的溫度傳感器測(cè)量結(jié)果(℃)123456789合并樣本標(biāo)準(zhǔn)偏差Sp按公式(C.1.2)計(jì)算：Ykj——第j個(gè)測(cè)量點(diǎn)第k次的測(cè)量值，℃;通過(C.1.2)計(jì)算出合并樣本標(biāo)準(zhǔn)偏差如下：由于每個(gè)測(cè)量點(diǎn)實(shí)際記錄1次(n=1),因此重復(fù)測(cè)量引入的不確定度分量u?為：C.1.4.2光學(xué)模擬器溫度傳感器分辨力引入的不確定度u1光學(xué)模擬器溫度傳感器的分辨力為0.01℃,分散區(qū)間半寬為0.005℃,按均勻JJF(津)04—2020由于重復(fù)測(cè)量引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u?大于光學(xué)模擬器溫度傳感器分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量ui,兩者具有一定的相關(guān)性，因此在不確定度計(jì)算時(shí)不考慮由讀數(shù)分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量ui.C.1.4.3光學(xué)模擬器溫度傳感器引入的不確定度u?光學(xué)模擬器溫度傳感器的最大允許誤差±0.1℃,按均勻分布計(jì)算，則C.1.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量一覽表標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量如表C.1.2所示。靈敏度系數(shù)不確定度來源標(biāo)準(zhǔn)不確定度(℃)溫度傳感器測(cè)量精度合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度ucUC.2閾值循環(huán)數(shù)測(cè)量結(jié)果不確定度評(píng)定C.2.1測(cè)量方法將熒光定量PCR儀及光學(xué)模擬器各部件連接完好，光學(xué)模擬器為集成傳感器，下方為溫度傳感器，上方為熒光發(fā)射光源。在光學(xué)模擬器下方溫度傳感器表面上涂抹適量導(dǎo)熱油，以確保其與均熱塊測(cè)量孔接觸良好。如圖2所示，將7個(gè)光學(xué)