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35DB35/T2026—2021操作規(guī)程Detectionoffootandmouthdiseasevirus(Otype)antibodybyhypersensitivefluorimetricimmunoassay2021-11-23發(fā)布2022-02-23實施福建省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草本文件主要起草人:鄭騰、張體銀、吳冠英、吳俊清、章鍵、謝向機(jī)、張志燈、唐寰宇、林杰、1NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技5.1.3恒溫培養(yǎng)箱(20℃~25℃和37℃±1℃)。2把硝酸纖維素膜粘貼在PVC底板上,采用劃膜噴金機(jī)在硝酸纖維素膜上噴涂已經(jīng)稀釋成0.5mg/mL用封閉液(配制方法應(yīng)符合附錄A中的A.1)封閉硝酸纖維素膜30min,用10mmol/L磷酸鹽緩(配制方法應(yīng)符合附錄A中的A.2)清洗硝酸纖維素膜30min,室溫(20℃~25℃)干燥2h后備用。加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解,室溫(20℃~25℃)反應(yīng)30min后,在4℃下,18000r/min離心10min,取離心后沉淀物用50mL硼酸緩沖液(pH8.2,配制方法應(yīng)符合附錄A中的A.3)重懸,加入2mg透析過的雞IgY,在室溫(20℃~25℃)下攪拌反應(yīng)24h,行封閉,再加入5mL樣品稀釋液(配制方法應(yīng)符合附錄A中的A.4)保存(2℃~8℃)。加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解,室溫(20℃~25℃)反應(yīng)30min后在4℃下,18000r/min離心10min,取離心沉淀物用50mL的0.05mol/L硼酸緩沖液(pH8.2,25℃)下攪拌反應(yīng)24h,在4℃下,18000r/min離心10min,取離心沉淀物加入5mL含0.5%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖溶液封閉,再加入5mL樣品稀釋液(配制方法應(yīng)符合附錄A中的A.4)保存(2℃~8℃)。3將高敏熒光納米微球標(biāo)記的雞IgY抗體和口蹄疫病毒O型重組抗原,分別稀釋成0.1μg/mL和3μg/mL,采用點膜噴金機(jī)器噴涂在標(biāo)記物墊上,噴量為2.5μL/cm,然后在37℃±1℃的溫度PVC底板上從左到右依次粘貼樣品墊、標(biāo)記物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,樣品墊的右端搭在標(biāo)記靜置后的血液樣品在3000r/min下離心3m待檢血清在2℃~8℃下可保存48h,在-20℃條件下可以長期保存。將平衡至室溫的口蹄疫病毒(O型)抗體高敏熒光檢測試劑卡置于潔凈平坦的臺面上,在加樣孔內(nèi)4結(jié)果為可疑,需要重新進(jìn)行一次試驗,如果仍然為可疑,建議判定為陰性;當(dāng)抗體效價<15磷酸二氫鉀(KH2PO4,分析純),0.2g;磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O,分析純),2.9g;氯化鈉(NaCl,分析純),8.0g;氯化鉀(KCl,分析純),0.2g;牛白蛋白,5.0g;聚乙烯醇,磷酸二氫鉀(KH2PO4,分析純),0.2g;磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O,分析純),2.9g;氯化鈉(NaCl,分析純),8.0g;氯化鉀(KCl,分析純),0.2g。加水至1000mL,溶解后A.30.05mol/L
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