《煙草主要病毒核酸恒溫擴增檢測工作報告》

PAGEPAGE1煙草主要病毒核酸恒溫擴增檢測工作報告一、工作簡況《煙草主要病毒核酸恒溫擴增檢測》項目為國家煙草專賣局2010年下達的標準預(yù)研項目，屬標準類技術(shù)報告，由中國農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所主持實施，本項目自2010年1月份國家煙草專賣局下達了項目任務(wù)后，積極自籌經(jīng)費，在中國煙草資源平臺的支持下，依據(jù)目標任務(wù)、起止時間按照技術(shù)路線、實施方案、預(yù)期成果開展相關(guān)技術(shù)研究。項目從論證、立項、實施至總結(jié)計劃開展2年研究，到2011年10月結(jié)束，項目按期完成。二、本項目的適用范圍1、適用范圍本研究為煙草主要病毒病原檢測技術(shù)，適用于煙草育苗和田間植株的現(xiàn)場監(jiān)測，預(yù)防病毒感染，切斷病毒傳播，保障我國煙草行業(yè)健康持續(xù)發(fā)展。2、相關(guān)領(lǐng)域的國內(nèi)外研究情況目前用于煙草病毒檢測的方法主要有生物學診斷、電子顯微鏡、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）以及分子生物學等方法：生物學方法主要是鑒別寄主反應(yīng)或指示植物等，這種僅僅以鑒別寄主反應(yīng)或指示植物為依據(jù)的方法,雖曾廣泛運用,卻由于其檢測速度慢、受環(huán)境和季節(jié)影響較大等諸多因素限制而運用較少。電子顯微鏡技術(shù)雖然可以直接觀察到病毒粒子的存在，但其操作復(fù)雜、耗費時間長；酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）雖具簡便、快速等優(yōu)點,但靈敏度較差,且存在非特異性反應(yīng)，在PVY尚未引發(fā)感染或感染的極早期很難用抗體法檢測出來；上述三種方法均不能快速、簡便、準確地檢測煙草普通花葉病毒。近年來發(fā)展起來的以分子生物學技術(shù)為基礎(chǔ)的病毒檢測方法主要有RT-PCR法以及PCR微量板雜交等檢測方法，克服了上述三種方法的缺點，在實驗室條件下實現(xiàn)了煙草普通花葉病毒的相對快速、準確檢測。由于常規(guī)的PCR檢測需要昂貴的PCR儀，凝膠電泳和成像系統(tǒng)，使得RT-PCR檢測法難以用于現(xiàn)場的快速檢測，這大大限制了RT-PCR檢測方法在生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用。進行煙草主要病毒病早期檢測并采取預(yù)防措施是煙草生產(chǎn)中降低煙草病毒病流行風險、減少發(fā)病造成巨額經(jīng)濟損失的有效手段，所以建立簡單、快速、高靈敏的檢查方法，并開發(fā)適于現(xiàn)場應(yīng)用的煙草主要病毒檢測方法就顯得極為重要。三、項目的主要研究成果（1）提供詳細的技術(shù)研究報告，可形成煙草TMV、PVY病毒病檢測的技術(shù)規(guī)范或標準。（2）發(fā)表SCI論文一篇。YanhuaLiu，ZhideWang，YumeiQian，etal“Rapiddetectionoftobaccomosaicvirususingthereversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplificationmethod”[J]，ArchVirol(2010)155:1681–1685。（3）申請發(fā)明專利兩項。煙草普通花葉病環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法，申請?zhí)枺?009102299106；一種用于檢測馬鈴薯Y病毒的試劑盒及檢測方法，申請?zhí)枺?011100474061。四、項目預(yù)期可產(chǎn)生的社會、經(jīng)濟效益由國家煙草專賣局牽頭，將本研究成果盡快形成技術(shù)規(guī)范或標準發(fā)布，為漂浮育苗苗期檢疫以及栽培土壤環(huán)境的監(jiān)測，預(yù)防病毒感染，切斷病毒傳播，保障我國煙草生產(chǎn)的健康持續(xù)發(fā)展。1．社會經(jīng)濟效益通過本研究提供煙草普通花葉病毒、馬鈴薯Y病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法，簡化檢測程序，比普通PCR檢測靈敏度高100倍，且不需要特殊、昂貴的實驗儀器，一把熱水壺或普通金屬浴即可滿足實驗要求，檢測的特異性強，實現(xiàn)了方便、快捷的田間、現(xiàn)場檢測。為煙草生產(chǎn)中病毒病的檢測及防治提供科學依據(jù)。在國內(nèi)外同領(lǐng)域研究屬領(lǐng)先水平。2．在經(jīng)濟發(fā)展中的作用該研究成果預(yù)計在形成技術(shù)規(guī)范或標準后可快速、準確地鑒定煙草普通花葉病、馬