實訓中藥制劑的含量測定UVVis法講解

實訓中藥制劑的含量測定——UV-Vis法【實訓目標】1.熟練掌握排石顆粒中總黃酮含量的測定方法；2.學會紫外-可見分光光度計的使用與保養(yǎng)方法?！緝x器、材料與試劑】1.儀器紫外-可見分光光度計；分析天平；恒溫干燥箱；超聲處理儀；量瓶（100ml、50ml、10ml）；容量瓶（10ml）；具塞錐形瓶等?！緝x器、材料與試劑】2.材料排石顆粒（市售品）；蘆?。▽φ掌罚?.試劑乙醇；5%亞硝酸鈉溶液；50%甲醇；10%硝酸鋁溶液；1%氫氧化鈉溶液等?！緦嵱栐怼孔贤?可見分光光度法是通過測定被測物質在紫外-可見光區(qū)(190～800nm)對光的吸光度或發(fā)光強度，進行物質定性定量分析的方法，主要用于藥品的鑒別、檢查和含量測定?！緦嵱栐怼颗攀w粒系由連錢草、車前子（鹽炒）、木通、徐長卿、石韋、瞿麥、忍冬藤、滑石、苘麻子、甘草制成的顆粒劑。本實訓利用排石顆粒中含有的黃酮類成分在亞硝酸鈉的堿性溶液中，與Al3+產(chǎn)生高靈敏度的橙紅色配合物（λmax＝510nm），用可見分光光度法（比色法）測定排石顆粒中總黃酮的含量?！緦嵱杻热菖c步驟】1.對照品溶液的制備取無水蘆丁對照品約20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含無水蘆丁0.2mg）?！緦嵱杻热菖c步驟】2.標準曲線的制備

精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4ml，再加50%甲醇至刻度，搖勻。以相應的溶液為空白。照紫外-可見分光光度法（通則0401），在510nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線，并計算回歸方程和相關系數(shù)?！緦嵱杻热菖c步驟】3.供試品溶液的制備

取裝量差異項下的本品，研細，取約5g或約1g（無蔗糖），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，稱定重量，加熱回流提取20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻?！緦嵱杻热菖c步驟】3.供試品溶液的制備

精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為空白對照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至5ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4ml，再加50%甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。4.測定分別取供試品溶液和空白溶液，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》通則0401）測定吸光度并記錄5.含量計算由回歸方程A=a+b*C→C供(mg/ml)=(A供-a)/b，將測得的A供代入公式計算出供試品溶液中總黃酮的濃度C供總黃酮含量計算公式：

【實訓提示】由于中藥制劑成分復雜，不同組分的紫外吸收光譜彼此重疊，干擾測定，因此在測定前必須經(jīng)過適當?shù)奶崛?、凈化或采用專屬的顯色反應等步驟，排除干擾?！緦嵱枅蟾妗坑涗洔y定結果，并將其與藥品標準相比較