腫瘤細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)

腫瘤細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)細(xì)胞生物學(xué)系劉清華WhatKindofDiseaseIsCancer?痰、消瘦就診。男性76歲，2003年9月3日因干咳、少CT檢查確診肺癌病例1：SomeCases01女性43歲，因上腹部時(shí)有疼痛伴返酸202年、加重1個(gè)月入院。03胃鏡活檢報(bào)告：胃幽門部黏膜內(nèi)低分化04癌。病例3：1患者男性，34歲。因發(fā)現(xiàn)右鎖骨腫塊3月入院。3膚無(wú)紅腫或靜脈怒張，無(wú)疼痛；肩關(guān)節(jié)活動(dòng)2檢查右鎖骨外段稍隆起，局部膨大，表面皮4稍受限。5X光示右鎖骨外段明顯骨質(zhì)破壞及增生。6病理報(bào)告為右鎖骨惡性淋巴細(xì)胞瘤。病例8：病例11：女性68歲，陰道不規(guī)則流血4-5個(gè)月。婦科檢查：子宮前位，如妊娠2月大小，可觸及數(shù)個(gè)結(jié)節(jié)，質(zhì)地中等。超聲檢查提示子宮混合性占位性病變。T診斷：宮體癌，右側(cè)卵巢囊腫。理診斷：子宮惡性混合性苗勒氏瘤，累及輸尿管。腫瘤學(xué)癌發(fā)生癌演進(jìn)臨床表現(xiàn)癌治療癌診斷SignaltransductionApoptosisCelljunctionProliferationDifferentiationTelomereCELLExtracellularmatrixWhatWeHaveKnownabouttheCellCycleControl?蛋白質(zhì)水平OncogeneAntioncogeneCheckpointsCellDivisionCycleGene,cdcgenes;CyclinsCyclinDependentKinases,CDKsCyclinDependentKinasesInhibitors,CDKIsSphasePromotingFactor,SPFMaturationPromotingFactor,MPF基因水平HowtoControlinaNormalCell?ControlofG1phaseControlofSphaseControlofG2phaseControlofMphaseControlofG1phaseProliferationfactorsCyclin-CDK（cyclinD-CDK4／6、cyclinE-CDK2）Checkpoint（G0／G1entrance、RPointG1／S）P105RBCDKI2341Checkpoint(DNAsynthesison、off)01Cyclin－CDKPCNA02ControlofSphaseSPF(cyclinA-CDK1)CyclinE-CDK2作為啟動(dòng)蛋白，識(shí)別autonomouslyreplicatingsequence，ARS，激活復(fù)制起點(diǎn)可能是originrecognitioncomplex，ORC的組成部分Cyclin－CDKABCDNA聚合酶δ的亞基直接參與DNA復(fù)制和修復(fù)細(xì)胞增殖核抗原PCNAControlofMphaseCheckpointMPF（cyclinB-CDK1)12G2／M：DNA復(fù)制沒(méi)有完成，激活wee1-mik1蛋白激酶，細(xì)胞阻滯于G2期。01M中／晚期：檢查微管蛋白的量、微管組織中心功能、紡錘體極性、微管與動(dòng)粒附著、或附著在動(dòng)粒上產(chǎn)生的張力。02CheckpointMPF的活性調(diào)節(jié)What’sWronginaTumorCell?01oncogene的過(guò)表達(dá)03cyclin基因和表達(dá)蛋白的異常02antioncogene的失活04cdki基因和表達(dá)蛋白的異常HowtoEvaluateCellProliferation?CellProliferationKinetics研究生物體內(nèi)各種細(xì)胞群體在新生、增殖、消亡過(guò)程中處于各種狀態(tài)的細(xì)胞數(shù)量、時(shí)間參數(shù)和分布位置的技術(shù)手段。細(xì)胞計(jì)數(shù)01生長(zhǎng)曲線02倍增時(shí)間03生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)04檢測(cè)方法丟失系數(shù)01標(biāo)記指數(shù)02分裂指數(shù)03細(xì)胞周期參數(shù)04直接計(jì)數(shù)－－臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)法01比色半定量－－四唑鹽法021.CellCounting[3-4,4-二甲基噻唑－2]，5－二苯基四氮唑溴鹽，簡(jiǎn)稱MTT;線粒體的琥珀酸脫氫酶將MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物;比色測(cè)定間接反映活細(xì)胞數(shù)量。四唑鹽法細(xì)胞培養(yǎng)顯色:加入MTT溶液(5mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，加DMSO，振蕩10min比色：490nm波長(zhǎng)測(cè)定光吸收值01020304BreastCancerResearchandTreatmeat2004;84:251-260TheirResearchStrategy?TheTechnologyTheyUsed?Cellculture;Cellcounting：每次至少3瓶，每瓶至少3次，取平均數(shù)；共做7天；作圖：培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上作圖。2.GrowthCurve0.10246810Time/dayCancerCellNormalCell0.11101001000單層培養(yǎng)CellNumber0.10246810Time/day0.11101001000CellNumber懸浮培養(yǎng)NormalCellCancerCellInvivo:DT=0.1×t/logDt–logDoDo:首次測(cè)得的腫瘤直徑（cm）Dt:t時(shí)間后測(cè)得的直徑（cm）1233.DoublingTimeComputedTomography某轉(zhuǎn)移癌：1Do＝2，Dt＝4，t＝902DT=0.1×90/0.6-0.3=30(d)3effectivedoublingtime,TDeff：考4慮細(xì)胞丟失因素的細(xì)胞倍增時(shí)間5potentialdoublingtime,TDpot：不6考慮細(xì)胞丟失因素的細(xì)胞倍增時(shí)間7原發(fā)性肺癌腺癌6421

鱗癌8512

間變性癌5511乳腺癌1714結(jié)－直腸癌1990淋巴瘤274腫瘤類型病例數(shù)倍增時(shí)間（周）780例人體腫瘤體積倍增時(shí)間Steel（1977）（未完）4.GrowthFraction，GF腫瘤中增殖細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的比例GF=P/P+QP:proliferationQ：quiescent010203丟失系數(shù)Φ＝KL/KBKL：細(xì)胞群體在增殖過(guò)程中的丟失率KB：細(xì)胞群體在增殖過(guò)程中的生成率5.丟失系數(shù)Φ6.LabelingIndex,LI01LI＝Ns/N02Ns:Numbersphase常用方法：BrdU3H-TdRPCNA、Ki67013H-TdR023H-TdR和細(xì)胞短暫孵育；間隔時(shí)間取材；放射自顯影；圖像分析儀計(jì)數(shù)或液閃計(jì)數(shù)；SPSS統(tǒng)計(jì)分析。BrdU和細(xì)胞共孵育較長(zhǎng)時(shí)間；01取材固定；02加入BrdU抗體；03加入生物素標(biāo)記的二抗；04BrdU加入鏈霉菌抗生物素蛋白－過(guò)氧化酶；01DAB顯色；02圖像分析儀計(jì)數(shù)；03SPSS統(tǒng)計(jì)分析。04ChinesejournalofCancer2003;22(11):1127-1134取材固定；加入PCNA抗體；加入生物素標(biāo)記的二抗；加入底物；顯色；圖像分析儀計(jì)數(shù)；SPSS統(tǒng)計(jì)分析。PCNASynovialsarcomaImmunohistochemicalStrongstainingofPCNAJ.Vet.Sci2004;5(2):173-180PositivestainingforKi67,CancerCytopathl2004;102:142-9Ki-677.MitoticIndex，MI經(jīng)典方法免疫熒光方法經(jīng)典方法Synovialsarcome.MitoticfiguresJ.Vet.Sci2004;5(2):173-180JNipponMedSch2003;70（3）219-226免疫熒光方法8.ParameterofCellCycleTc、TG1、Ts、TG2和TM；常用的有3H-TdR標(biāo)記法和流式細(xì)胞技術(shù)flowcytometry利用流式細(xì)胞儀flowcytometre，F(xiàn)CM細(xì)胞快速、準(zhǔn)確、多參數(shù)的定量分析體積，DNA含量、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體量、表面抗原量等等FlowCytometry無(wú)菌分類收集活細(xì)胞。BreastCancerResearchandTreatment2004;84:251-260腫瘤的周期化、同步化治療1LI檢測(cè)對(duì)化療藥物的敏感性2提示療效和預(yù)后3癌前病變的檢測(cè)完4應(yīng)用作用特點(diǎn)藥物名稱非細(xì)