BJS 202413 食品中大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚的測定

食品補充檢驗方法BJS202413四氫大麻酚的測定2024-12-22發(fā)布國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布1BJS202413四氫大麻酚的測定1范圍本方法描述了食品中大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法。大麻酚的測定。2原理試樣中添加同位素內標,用乙腈提取,經固相萃取柱凈化,液相色譜-串聯(lián)質譜儀檢測,多反應離子監(jiān)測,以保留時間和定性離子的豐度比定性,以內標法定量。3試劑和材料除另有規(guī)定外,所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1試劑3.1.1甲醇(CH4O):色譜純。3.1.2乙腈(C2H3N):色譜純。3.1.3乙酸銨(C2H7NO2):色譜純。3.1.4氯化鈉(NaCl)。3.2試劑配制3.2.1乙酸銨溶液(5mmol/L):稱取0.385g乙酸銨(3.1.3),用水溶解并稀釋至1000mL。3.2.25%甲醇溶液:量取5mL甲醇(3.1.1),加水稀釋至100mL。3.3標準品3.3.1大麻酚(C21H26O2,CAS號:521-35-7):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品,相關信息見附錄A。3.3.2大麻二酚(C21H30O2,CAS號:13956-29-1):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。3.3.3四氫大麻酚(C21H30O2,CAS號:1972-08-3):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。3.3.4大麻酚-D3(C21H23D3O2,CAS號:1435934-54-5):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。3.3.5大麻二酚-D3(C21H27D3O2,CAS號:1435783-16-6):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。2BJS2024133.3.6四氫大麻酚-D3(C21H27D3O2,CAS號:81586-39-2):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。3.4標準溶液配制3.4.1標準儲備液分別稱取大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚標準品(3.3)各約10mg(精確至0.0001g),用乙腈(3.1.2)溶解,轉移至不同的10mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)分別定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為1000μg/mL的標準儲備液,并轉移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個月。3.4.2內標儲備液分別稱取大麻酚-D3、大麻二酚-D3、四氫大麻酚-D3標準品(3.3)5mg(精確至0.0001g),用乙腈(3.1.2)溶解,轉移至不同的10mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)分別定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為500μg/mL的內標儲備液,并轉移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個月。3.4.3混合標準中間液分別準確移取標準儲備液(3.4.1)1mL,置于同一100mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為10μg/mL的混合標準中間液,并轉移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個月。3.4.4混合內標中間液分別準確移取內標儲備液(3.4.2)1mL,置于同一50mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為10μg/mL的混合內標中間液,并轉移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期12個月。3.4.5工作溶液3.4.5.1混合標準工作液A:準確移取混合標準中間液(3.4.3)1mL,置于5mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為2μg/mL的混合標準工作液A,并轉移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期1個月。3.4.5.2混合標準工作液B:準確移取混合標準工作液A(3.4.5.1)1mL,置于20mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為0.1μg/mL的混合標準工作液B?，F(xiàn)用現(xiàn)配。3.4.5.3混合內標工作液(1μg/mL):準確移取混合內標中間液(3.4.4)1mL,置于10mL棕色容量瓶中,用乙腈(3.1.2)定容至刻度,搖勻,配制成質量濃度為1μg/mL的混合內標工作液,并轉移至深色容器中,于—18℃及以下密封避光保存,有效期1個月。3.4.6系列標準工作溶液分別精密移取混合標準工作液B(3.4.5.2)50μL、100μL,混合標準工作液A(3.4.5.1)25μL、50μL、100μL,混合內標工作液(3.4.5.3)20μL,置于一組1mL的棕色容量瓶中,分別用甲醇定容至刻度,搖勻,制得質量濃度依次為5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL且內標濃度均為20ng/mL的系列標準工作溶液,或依需要配制適當濃度的混合標準系列工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。3.5材料3.5.1基質增強脂肪去除固相萃取柱(300mg/3mL)或其他等效柱。3BJS2024133.5.2官能化聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取柱(200mg/6mL)或其他等效柱。3.5.3聚四氟乙烯濾膜:0.22μm。4儀器和設備4.1液相色譜-串聯(lián)質譜儀:配電噴霧離子源。4.2天平:感量分別為0.01g和0.00001g。4.3渦旋混合器:轉速應不低于1500r/min。4.4冷凍離心機:轉速應不低于10000r/min,可0℃~4℃控溫。4.5固相萃取裝置。4.6氮吹儀。4.7勻漿機。4.8組織搗碎機。4.9超聲儀:≥40KHz。5分析步驟5.1試樣制備和保存5.1.1液體試樣和粉狀固體試樣(食用植物油、液體飲料、固體飲料等)取多個包裝試樣,充分搖勻(含二氧化碳的試樣,超聲除去氣泡后搖勻),并在一個容器中攪拌均勻,裝入潔凈容器中密封并標記,于0℃~4℃避光保存。5.1.2糖果試樣取多個包裝試樣,于—18℃以下冷凍過夜,取出后立即用組織搗碎機搗碎,攪拌均勻(膠基糖果樣品需剪小塊后置于組織搗碎機搗碎均勻),裝入潔凈容器中密封并標記,于0℃~4℃避光保存。5.1.3巧克力試樣取多個包裝的試樣,50℃~60℃加熱熔融后,用勻漿機趁熱充分攪拌均勻,裝入潔凈容器中密封并標記,于0℃~4℃避光保存。5.1.4其他半固體或固體試樣取多個包裝試樣,用組織搗碎機搗碎,攪拌均勻,裝入潔凈容器中密封并標記,于0℃~4℃避光保存。5.2樣品前處理5.2.1提取5.2.1.1食用植物油稱取試樣1g(精確至0.01g)于10mL聚丙烯離心管中,加入40μL混合內標工作液(3.4.5.3),再加入5mL乙腈(3.1.2),渦旋混勻1min,常溫條件下超聲提取10min,于0℃~4℃條件下10000r/min離心5min,上清液轉移至另一10mL聚丙烯離心管中,殘渣中再加入5mL乙腈(3.1.2)重復提取一次,合并上清液,于40℃下氮吹至近干,再加入乙腈(3.1.2)至2mL,搖勻,待凈化。4BJS2024135.2.1.2其他試樣稱取試樣1g(精確至0.01g)于50mL聚丙烯離心管中,加入200μL混合內標工作液(3.4.5.3),加入1g氯化鈉(3.1.4),再加入5mL乙腈(3.1.2),渦旋混勻1min,超聲提取10min,于0℃~4℃條件下10000r/min離心5min,上清液轉移至另一個50mL聚丙烯離心管中,殘渣中再加入5mL乙腈(3.1.2),重復提取一次,合并上清液,加入10mL水,搖勻,—18℃及以下放置過夜(糖果、糕點、餅干、飲料無需冷凍過夜),取出后于4℃條件下10000r/min離心5min,取上清液待凈化。5.2.2凈化5.2.2.1食用植物油將提取液(5.2.1.1)加載至固相萃取柱(3.5.1)上,收集流出液于接收管中,搖勻,過0.22μm聚四氟乙烯濾膜(3.5.3),供測定。5.2.2.2其他試樣將提取液(5.2.1.2)加載至固相萃取柱(3.5.2)上[使用前依次用10mL甲醇(3.1.1)及10mL水活化],棄去流出液,用5%甲醇溶液(3.2.2)5mL淋洗,棄去淋洗液,吹干柱體,用10.0mL甲醇(3.1.1)洗脫,收集洗脫液于接收管中,搖勻,過0.22μm聚四氟乙烯濾膜(3.5.3),供測定。5.3儀器參考條件5.3.1液相色譜參考條件5.3.1.1色譜柱:苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱(2.1mm×150mm,5μm),或性能相當者。5.3.1.3進樣量:5μL。5.3.1.4流速:0.4mL/min。5.3.1.5流動相:A為5mmol/L乙酸銨溶液(3.2.1),B為甲醇(3.1.1),梯度洗脫條件見表1。表1液相色譜梯度洗脫條件時間/min流動相A/%流動相B/%0653565957.45957.565351065355.3.2質譜參考條件5.3.2.1離子源:電噴霧離子源(ESI源)。5.3.2.2掃描方式:負離子掃描。5.3.2.3監(jiān)測方式:多反應監(jiān)測(MRM)。5.3.2.4霧化氣(GS1)、氣簾氣(CUR)、輔助氣(GS2)、碰撞氣(CAD)均為高純氮氣或其他合適氣體,使用前應調節(jié)至質譜靈敏度達到檢測要求,參考條件詳見附錄B。5.3.2.5電噴霧電壓(IS)、離子源溫度(TEM)、碰撞能量(CE)、去簇電壓(DP)等參數應優(yōu)化至最佳靈5BJS202413敏度,監(jiān)測離子對和定量離子對等信息見附錄B。5.4標準曲線的制作將系列標準工作溶液(3.4.6)分別注入液相色譜-串聯(lián)質譜儀中,測定相應的峰面積的響應值,以標準系列工作液中目標化合物的濃度為橫坐標,以目標化合物峰面積的響應值與內標峰面積的響應值的比值為縱坐標,繪制標準曲線。大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚及其內標標準溶液的液相色譜-質譜/質譜多反應監(jiān)測色譜圖見附錄C。5.5試樣溶液的測定5.5.1定性測定在相同試驗條件下,試樣中待測物質的保留時間與標準溶液中對應的保留時間偏差在±2.5%之內,將試樣中被測組分定性離子的相對豐度與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較,若偏差不超過表2規(guī)定的范圍,則可判定為試樣中檢出對應的待測物。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%>50>20~50>10~20≤10最大允許偏差/%±20±25±30±505.5.2定量測定將試樣溶液(5.2)注入液相色譜-串聯(lián)質譜儀中,得到相應的峰面積,根據標準曲線得到待測物的濃度。用標準工作曲線對試樣進行定量,應使試樣溶液被測物質的響應值在儀器測定的線性范圍內,若被測物質含量超出標準曲線的測定范圍,則應重新處理試樣,適量減少稱樣量并相應增大內標添加量,用稀釋的方式使最終上樣溶液中內標濃度與標準溶液中內標濃度保持一致,使其上機濃度在線性范圍內再進行定量。6結果計算試樣中被測組分的含量按式(1)計算:m×1000X=c×V×f×1000(m×1000式中:X—試樣中被測組分的含量,單位為微克每千克(μg/kg);c—由標準曲線得出的樣液中被測組分的質量濃度,單位為納克每毫升(ng/mL);V—溶劑的定容體積,單位為毫升(mL);f—稀釋倍數;m—試樣稱取的質量,單位為克(g);1000—換算系數。以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,計算結果保留三位有效數字。7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算術平均值的15%。6BJS2024138其他當取樣量為1g時,大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚的檢出限為20μg/kg,定量限為50μg/kg。9結果表述如樣品配料表中含火麻仁或火麻仁加工品,使用本方法可測得試樣中大麻酚、大麻二酚或四氫大麻酚的含量。其余情況,檢出值超過50μg/kg時應結合執(zhí)法證據綜合研判。7BJS202413附錄A(資料性)標準品及內標的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式和相對分子質量標準品及內標的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式和相對分子質量見表A.1。表A.1標準品及內標的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式和相對分子質量序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質量1大麻酚Cannabinol521-35-7C21H26O2310.42大麻二酚Cannabidiol13956-29-1C21H30O2314.53四氫大麻酚Tetrahydrocannabinol1972-08-3C21H30O2314.54大麻酚-D3Cannabinol-D31435934-54-5C21H23D3O2313.45大麻二酚-D3Cannabidiol-D31435783-16-6C21H27D3O2317.56四氫大麻酚-D3Tetrahydrocannabinol-D381586-39-2C21H27D3O2317.58BJS202413附錄B(資料性)質譜參考條件質譜參考條件如下。a)離子源:電噴霧離子源(ESI源)。b)掃描方式:負離子掃描。c)檢測方式:多反應監(jiān)測(MRM)。d)電噴霧電壓(IS):—4500V(ESI—)。e)氣簾氣(CUR):68.95kpa。f)霧化氣(GS1):310.26kpa。g)輔助氣(GS2):310.26kpa。h)離子源溫度(TEM):600℃。注:本附錄所列質譜條件僅供參考,當采用不同質譜儀器時,儀器參數可能存在差異,測定前應將質譜參數優(yōu)化到最佳。大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚標準品及其內標的監(jiān)測離子對及質譜分析參數見表B.1。表B.1大麻酚、大麻二酚、四氫大麻酚標準品及其內標的監(jiān)測離子對及質譜分析參數化合物名稱保留時間/min母離子(m/≈)子離子(m/≈)去簇電壓Dp/V碰撞能量CE/eV大麻酚—130—39—60大麻二酚4.91—120—32—26四氫大麻酚5.23—140—37—36大麻酚-D3—130—44大麻二酚-D34.91—100—31四氫大麻酚-D35.23—130—37*定量離子對。大麻二酚與四氫大麻酚為一對同分異構體,需注意兩者的色譜分離,在該色譜條件下,大麻二酚、四氫大麻酚的保留時間分別為4.91min、5.23min。9BJS