2025年上教版選擇性必修3生物上冊月考試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年上教版選擇性必修3生物上冊月考試卷710考試試卷考試范圍：全部知識點(diǎn)；考試時(shí)間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五總分得分評卷人得分一、選擇題(共9題，共18分)1、與常規(guī)武器相比；生物武器具有。

①傳染性強(qiáng)

②污染面積廣；不易被發(fā)現(xiàn)

③有一定的潛伏期

④像核武器一樣破壞建筑物

⑤自然條件下的大雪、低溫、干燥、日曬等不影響生物武器的殺傷力A.①②③B.②③④⑤C.①②③④⑤D.①②③④2、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用（）A.受精卵B.10代以內(nèi)的細(xì)胞C.傳代10~50代以內(nèi)的細(xì)胞D.處于減數(shù)分裂第二次分裂中期的次級卵母細(xì)胞3、下列關(guān)于高等哺乳動物受精與胚胎發(fā)育的敘述，正確的是（）A.絕大多數(shù)精卵細(xì)胞的識別具有物種特異性B.卵裂期每個(gè)細(xì)胞的體積隨分裂次數(shù)增加而不斷增大C.囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎兒的各種組織D.桑椹胚時(shí)發(fā)育分化形成內(nèi)外兩個(gè)胚層4、下圖表示高等動物的個(gè)體發(fā)育過程；下列說法正確的是（）

A.圖中①過程表示胚胎發(fā)育B.受精卵卵裂處于囊胚形成的過程中，每個(gè)細(xì)胞的體積不斷增大C.原腸胚已分化成三個(gè)胚層，DNA總量增加D.高等哺乳動物胚胎發(fā)育中的細(xì)胞分化開始于原腸胚期，終止于生命結(jié)束5、某興趣小組就“泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量變化”開展了研究；操作如下:2021年1月4日下午選取1；2、3號三只相同的泡菜壇，在每個(gè)壇中加入洗凈的新鮮蓮花菜，再分別倒入相同量的煮沸并冷卻的鹽水，將壇密封，置于同一環(huán)境中。封壇前進(jìn)行第一次取樣測定亞硝酸鹽含量，后來定時(shí)測定，結(jié)果如圖。

下列對該實(shí)驗(yàn)的分析錯(cuò)誤的是（）A.泡菜制作過程中鹽水需煮沸的目的是為了殺滅雜菌，冷卻后再用是為了防止溫度過高殺死所需菌種B.在腌制過程中泡菜壇中的溶液會增加，這是由于鹽水濃度大于細(xì)胞液濃度，植物細(xì)胞會通過滲透作用失水C.腌制泡菜的過程中，起主要作用的微生物是乳酸菌，乳酸菌是兼性厭氧菌，用水封壇的目的是為乳酸菌提供無氧環(huán)境D.由題圖知，該小組對每個(gè)壇中的數(shù)據(jù)分別畫出曲線，這是不科學(xué)的，設(shè)置三個(gè)泡菜壇目的是進(jìn)行平行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，取平均值，使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更真實(shí)6、動物細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)；通常要在培養(yǎng)基中補(bǔ)充一定濃度的某些物質(zhì)。如圖是血清對正常細(xì)胞和癌細(xì)胞培養(yǎng)影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。從該圖提供的信息不能獲得的結(jié)論是。

A.正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的增殖速率相同B.有無血清對正常細(xì)胞培養(yǎng)的影響不同C.培養(yǎng)基中補(bǔ)充血清有助于正常細(xì)胞的培養(yǎng)D.培養(yǎng)基中是否補(bǔ)充血清對癌細(xì)胞的培養(yǎng)影響不大7、DNA連接酶是重組DNA技術(shù)常用的一種工具酶。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.E.coliDNA連接酶既能連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，也能連接平末端B.DNA連接酶連接的是兩條單鏈上的磷酸和脫氧核糖C.DNA連接酶連接的是兩條鏈堿基對之間的氫鍵D.DNA連接酶可以將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到主鏈8、GUS基因作為一種報(bào)告基因，編碼β-葡萄糖苷酸酶，該酶可催化特定底物水解，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，借此用來觀察轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的表達(dá)情況，鑒定轉(zhuǎn)基因植株。下列說法錯(cuò)誤的是（）A.GUS基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，由多個(gè)核糖核苷酸構(gòu)成B.GUS基因編碼β-葡萄糖苷酸酶合成的過程包括轉(zhuǎn)錄和翻譯C.應(yīng)將GUS基因和外源基因融合后導(dǎo)入受體細(xì)胞以觀察表達(dá)情況D.藍(lán)色的深淺可表示外源基因表達(dá)量的多少9、綠葉海天牛（簡稱甲）吸食濱海無隔藻（簡稱乙）后，身體就逐漸變綠，這些“奪來”的葉綠體能夠在甲體內(nèi)長期穩(wěn)定存在，有科學(xué)家推測其原因是在甲的染色體DNA上可能存在乙編碼葉綠體部分蛋白的核基因。為證實(shí)上述推測，以這種變綠的甲為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，方法和結(jié)果最能支持上述推測的是（）A.給甲提供14CO2，一段時(shí)間后檢測到其體內(nèi)的部分有機(jī)物出現(xiàn)放射性B.用乙編碼葉綠體蛋白的核基因做探針與甲的染色體DNA雜交，結(jié)果顯示出雜交帶C.通過PCR技術(shù)能從甲消化道內(nèi)獲得的DNA中克隆出屬于乙的編碼葉綠體蛋白的核基因D.通過核酸分子雜交技術(shù)，在甲體內(nèi)檢測到乙的編碼葉綠體蛋白的核基因轉(zhuǎn)錄出的RNA評卷人得分二、多選題(共6題，共12分)10、下圖為雜交瘤細(xì)胞制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT-）；在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是（）

A.可用滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合B.未融合的細(xì)胞和融合的同種核細(xì)胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長C.雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)D.細(xì)胞膜的選擇透過性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)11、茯磚茶的制作包括發(fā)酵與發(fā)花等工序，發(fā)酵前要下“誘水”，下“誘水”就是將原有老茶煮水后噴灑在料堆之上。發(fā)花可使磚茶原料在加工過程中形成“金花”，學(xué)名“冠突散囊菌”——茶界“益生菌”，也是國家茶業(yè)界二級機(jī)密保護(hù)菌種。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.茯磚茶的制作需利用酵母菌等多種細(xì)菌進(jìn)行發(fā)酵B.下“誘水”相當(dāng)于微生物培養(yǎng)過程中的“接種”，推測相關(guān)菌種可耐熱C.發(fā)酵過程涉及多種酶催化，發(fā)酵后飲用有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收D.茯磚茶發(fā)酵完成后要滅菌并密封，有利于長期保存12、iPS細(xì)胞被稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，可通過轉(zhuǎn)入相關(guān)因子來制備。iPS細(xì)胞最初是由成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來，后來發(fā)現(xiàn)已分化的T細(xì)胞、B細(xì)胞等也能被誘導(dǎo)成該類細(xì)胞。下列說法正確的是（）A.導(dǎo)入的物質(zhì)可以是DN蛋白質(zhì)，還可用小分子物質(zhì)來誘導(dǎo)B.iPS細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要在無菌的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行C.T細(xì)胞、B細(xì)胞能被誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞，說明體內(nèi)細(xì)胞的分化是可逆的D.與胚胎干細(xì)胞相比，iPS細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是分裂能力強(qiáng)，分化程度低13、某實(shí)驗(yàn)小組利用下圖所示質(zhì)粒和目的基因來構(gòu)建基因表達(dá)載體，將目的基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞并表達(dá)。下列敘述正確的是（）

A.圖中的質(zhì)粒用酶A切割后，會產(chǎn)生4個(gè)游離的磷酸基團(tuán)B.在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，可用酶A和酶C切割質(zhì)粒和目的基因C.成功導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌可在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長D.若用酶B和酶C切割，可以避免質(zhì)粒的自身環(huán)化14、自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立固定空氣中N2的細(xì)菌，將玉米種子用自身固氮菌拌種后播種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量?？蒲腥藛T進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如圖。以下敘述正確的是（）

A.步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥?；步驟③將土壤懸浮液稀釋了1000倍B.自生固氮菌是自養(yǎng)型生物，不可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板來計(jì)數(shù)土壤懸浮液中的菌體數(shù)C.步驟②需充分振蕩20min，主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中D.步驟④所用的接種工具是涂布器，該選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)是不添加氮源15、圖甲為培育轉(zhuǎn)基因生物時(shí)選用的載體，圖乙是含有目的基因的一段DNA序列，圖中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.若通過PCR技術(shù)提取該目的基因，應(yīng)該選用引物a和引物cB.構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)應(yīng)選用BamHⅠ和HindⅡ這兩種限制酶C.圖乙中一個(gè)DNA分子在PCR儀中經(jīng)過四輪復(fù)制得到所需目的基因的分子數(shù)為8個(gè)D.只利用含四環(huán)素的培養(yǎng)基就可以直接篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的受體細(xì)胞評卷人得分三、填空題(共8題，共16分)16、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。17、動物細(xì)胞融合的意義：克服了______，成為研究_____、_____、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。18、本課題對能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行了初步的篩選。但是，這只是分離純化菌種的第一步。對分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助生物化學(xué)的方法。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的___________將尿素分解成了_____________。氨會使培養(yǎng)基的________________，pH______________。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基______________來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_____________，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變________________。19、通常將DNAD的羥基（—OH）成為_______________端，而磷酸基團(tuán)的末端成為___________端。由于_______________，因此DNA需要引物，因此DNA的合成方向總是從_________________延伸。20、蛋白質(zhì)工程是指以______作為基礎(chǔ)，通過______，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行_____，或制造一種______，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)______的蛋白質(zhì)）

21、動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：

取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用______處理分散成______→制成______→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行______培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)_____培養(yǎng)。22、在日常生活中，我們還遇到哪些有關(guān)生物技術(shù)安全與倫理問題？我們能基于所學(xué)生物學(xué)知識參與這些問題的討論嗎？嘗試舉一個(gè)實(shí)例加以說明______。23、干細(xì)胞的應(yīng)用：有著_____能力及_____的干細(xì)胞，與組織、器官的發(fā)育、_____和_____等密切相關(guān)。評卷人得分四、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共12分)24、某興趣小組就“泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量變化”開展了研究；操作如下：1月4日下午選取1；2、3號三只相同的泡菜壇，在每個(gè)壇中加入洗凈的新鮮蓮花菜0.6kg，再分別倒入等量煮沸并冷卻的10%的鹽水，將壇密封，置于同一環(huán)境中。封壇前進(jìn)行第一次取樣測定亞硝酸鹽含量，后來定時(shí)測定，結(jié)果如下圖。

（1）測定亞硝酸鹽含量的方法是_______；其原理是：在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成_____，將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測比較，可以大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。

（2）實(shí)驗(yàn)中；鹽水加熱煮沸是為了______；冷卻之后再使用是為了保證_______等微生物的生命活動不受影響。

（3）在腌制過程中；壇中溶液量會增加，原因是_____。

（4）圖中數(shù)據(jù)表明；泡菜在腌制的第_____天亞硝酸鹽含量達(dá)到最大值，腌制到第______天以后再食用可以較好地避免亞硝酸鹽對人體健康的危害。

（5）實(shí)驗(yàn)中三只壇中產(chǎn)生的亞硝酸鹽含量存在差異；最可能的原因是__________。

（6）為了讓實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更好地表明泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量變化，對該實(shí)驗(yàn)所獲得的3組數(shù)據(jù)應(yīng)進(jìn)行怎樣的處理才更合理？_________________。25、人的血清白蛋白（HSA）在臨床上需求量很大；通常從人血中提取，但由于艾滋病病毒（HIV）等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對血液制品顧慮重重，如果應(yīng)用基因工程等技術(shù)，將人的血消白蛋白基因轉(zhuǎn)入奶牛細(xì)胞中，那么利用牛的乳腺細(xì)胞生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。其大致過程如下：

I．采用良種供體奶牛的卵母細(xì)胞和精子；通過體外受精，形成受精卵；

II．將人血消白蛋白基因?qū)肽膛Ｊ芫眩恍纬芍亟M細(xì)胞；

III．電脈沖刺激重組細(xì)胞；促使其形成早期胚胎；

Ⅳ．將胚胎移植到受體母牛的子宮中；最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。

請回答下列問題：

（1）實(shí)驗(yàn)步驟Ⅰ中，受精時(shí)，防止多精入卵的生理反應(yīng)包括____________________。

（2）實(shí)驗(yàn)步驟Ⅱ中，需先構(gòu)建基因表達(dá)載體，將HSA基因與__________等調(diào)控組件重組在一起；再導(dǎo)入奶牛受精卵。

（3）實(shí)驗(yàn)步驟Ⅲ中，進(jìn)行動物早期胚胎的體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中除了含有各種無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類、維生素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分外，還要添加__________。培養(yǎng)過程需要定期更換培養(yǎng)液，目的是__________。

（4）實(shí)驗(yàn)步驟Ⅳ中，應(yīng)選擇性別為__________的奶牛胚胎進(jìn)行移植；對早期胚胎（如囊胚）進(jìn)行性別鑒定的常用方法是____________________。移植前還需要檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受精卵，檢測方法是采用__________技術(shù)。26、餐廚垃圾廢液中的淀粉；蛋白質(zhì)、脂肪等微溶性物質(zhì)可以被微生物分解并利用；但由于初期有益微生物數(shù)量相對較少，存在發(fā)酵周期長、效率低等缺點(diǎn)，極易對環(huán)境造成污染。為探究用圓褐固氮菌、巨大芽孢桿菌處理某餐廚垃圾廢液時(shí)，單獨(dú)接種和混合接種的效果差異及最佳接種量比，以制備微生物菌劑，研究者做了如下實(shí)驗(yàn)：

（1）將兩種菌液進(jìn)行不同配比分組處理如下表所示：。編號R0R1R2R3圓褐固氮菌：巨大芽孢桿菌1：00：11：12：1

將上表菌液分別接種于l00mL________________中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)還需設(shè)置空白對照，對照組接種________________。

（2）培養(yǎng)3天后測定活菌數(shù)，取一定量菌液用_____________法接種于基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該方法包括_____________和____________兩個(gè)操作。進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，可依據(jù)______________對兩種菌進(jìn)行區(qū)分，并選取菌落數(shù)在__________內(nèi)的平板。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖所示，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知___________________。

27、黏多糖貯積癥是由IDUA基因突變導(dǎo)致的遺傳病?？蒲腥藛T對此病的治療進(jìn)行相關(guān)研究。

(1)黏多糖貯積癥患者細(xì)胞中IDUA基因由于堿基對___________造成突變，轉(zhuǎn)錄出的mRNA長度不變但提前出現(xiàn)終止密碼子，最終導(dǎo)致合成的IDUA酶分子量___________；與正常IDUA酶的空間結(jié)構(gòu)差異顯著而失去活性，積累過多的黏多糖無法及時(shí)清除，造成人體多系統(tǒng)功能障礙。

(2)抑制性tRNA（sup-tRNA）與普通tRNA的結(jié)構(gòu)、功能相同，但它的反密碼子可以與終止密碼子配對。在上述這一類突變基因的翻譯過程中，加入sup-tRNA可以發(fā)揮的作用是___________；從而誘導(dǎo)通讀獲得有功能的全長蛋白。

(3)不同的sup-tRNA可以攜帶不同氨基酸；為比較它們的通讀效果，科研人員進(jìn)行了相關(guān)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖。

注：“-”代表未加入。

據(jù)圖分析，實(shí)驗(yàn)組將___________基因?qū)胧荏w細(xì)胞，并采用___________技術(shù)檢測導(dǎo)入基因的表達(dá)情況。據(jù)結(jié)果分析，攜帶酪氨酸的sup-tRNA能___________。

(4)科研人員利用攜帶酪氨酸的sup-tRNA對IDUA突變基因純合小鼠及IDUA基因敲除小鼠進(jìn)行治療，檢測肝臟細(xì)胞IDUA酶活性和組織黏多糖的積累量，與不治療的小鼠相比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為_____________，表明攜帶酪氨酸的sup-tRNA可以治療黏多糖貯積癥。評卷人得分五、綜合題(共4題，共8分)28、腐乳是我國古代勞動人民創(chuàng)造出的一-種經(jīng)過微生物發(fā)酵的大豆食品。它“聞著臭；吃著香”且易于消化吸收，深受大眾喜愛，其制作方法廣為流傳。腐乳的生產(chǎn)過程一般分為前酵期（培菌）和后酵期（裝瓶后常溫條件下放置，自然發(fā)酵3個(gè)月），采集各時(shí)段腐乳坯樣品，測定相關(guān)物質(zhì)含量如圖1所示。請回答下列有關(guān)問題：

(1)民間制作腐乳時(shí)_________（填“需要”或“不需要”）滅菌，發(fā)酵好的豆腐上布滿了菌落，這些菌落_________（填“屬于”或“不屬于”）同一物種。

(2)吃腐乳時(shí)，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”，這層“皮”是________，它對人體______（填“有”或“無”）害。

(3)由圖1可知，加鹽腌制（腌坯）前，腐乳坯中的游離氨基酸含量______，原因是______。加鹽腌制（腌坯）之后，腐乳坯中的游離氨基酸含量下降的原因是______（答出兩點(diǎn)）。在用鹽腌制腐乳的過程中，若鹽的濃度過低易造成____________。以下關(guān)于鹽在腐乳制作中的作用正確的是____________（填序號）

①作為反應(yīng)物②防腐殺菌③調(diào)節(jié)口味④析出豆腐中水分。

(4)現(xiàn)代工藝生產(chǎn)腐乳是在嚴(yán)格_______的條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種直接接種在豆腐上。某研發(fā)小組將毛霉置于試管斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，制作斜面培養(yǎng)基時(shí)，對培養(yǎng)基滅菌的常用方法是__________，將試管傾斜的目的是______________。29、科研工作者將檉柳匙葉草液泡膜IIa+/K+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（TaNHX2基因）轉(zhuǎn)移到棉花細(xì)胞內(nèi)；獲得了耐鹽新品種。圖1是含有目的基因的DNA片段，Sau3AI；EcoRI、BamHI為三種限制酶（Sau3AI、BamHI切割形成的黏性末端相同）；圖2是農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖。請分析回答問題：

(1)目前常用_____方法從檉柳葉草基因組中獲取TaNHX2基因，該方法需有分別與兩條模板鏈結(jié)合的2種引物，引物是_____。

(2)計(jì)劃用EcoR1分別切割圖1中DNA片段和圖2所示質(zhì)粒；以構(gòu)建基因表達(dá)載體。

①構(gòu)建表達(dá)載體的目的是_____需要的工具酶是_____。

②本方案的缺陷是：可能導(dǎo)致_____以及目的基因與質(zhì)粒的反向連接。

③為避免上述缺陷，最佳方案是用_____切割圖1的DNA，用_____切割圖2質(zhì)粒。

(3)目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞后，還需要利用_____技術(shù)才能得到轉(zhuǎn)基因棉花苗，這一技術(shù)的原理是_____。

(4)要在個(gè)體生物學(xué)水平上檢測耐鹽新品種的培育效果，檢測方法是_____。30、酯酶結(jié)合熒光分析法可對有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行檢測；某研究院利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得一種催化效率高；農(nóng)藥敏感性強(qiáng)的微生物酯酶。請分析回答：

限制酶識別序列與切割位點(diǎn)限制酶識別序列與切割位點(diǎn)PstⅠ5′－CTGCA↓G－3′NdeⅡ5′－↓GATC－3′HindⅢ5′－A↓AGCTT－3′EcoRⅠ5′－G↓AATTC－3′DpnⅡ5′－↓GATC－3′AluⅠ5′－AG↓CT－3′

(1)人工合成酯酶基因后通過PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，為該過程提供原料的是________；還需要設(shè)計(jì)兩種引物，設(shè)計(jì)引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的_______端開始連接脫氧核苷酸。某質(zhì)粒圖譜和目的基因的序列如圖所示，應(yīng)選擇引物________（填下列數(shù)字）（①～④中加框表示識別序列前的保護(hù)堿基，增強(qiáng)上述酶與目的基因的結(jié)合。）。在PCR擴(kuò)增儀中加入所選擇的引物，需擴(kuò)增________代后才會得到等長的8條DNA片段。

①5′－CCGGAATTCATGCTTGATATGCCAATC－3′

②5′－CCCAAGCTTATGCTTGATATGCCAATC－3′

③5′－CCCAAGCTTCTAGTCGAACACAAGAAG－3′

④5′－CCGGAATTCCTAGTCGAACACAAGAAG－3′

(2)若提取高產(chǎn)酯酶野生菌的基因組DNA，用設(shè)計(jì)好的兩種引物和合適的條件進(jìn)行PCR，其產(chǎn)物可以通過________來鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有目的基因以外的雜帶存在，分析可能原因是________。解決措施是在目的基因的________（填“內(nèi)部”或“上；下游”）重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR。

(3)將PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒用限制酶酶切，酶切產(chǎn)物純化后，用_______連接，連接產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌前需用________處理大腸桿菌；使其處于感受態(tài)。

(4)將目的蛋白與某些標(biāo)簽融合表達(dá)形成含標(biāo)簽的融合蛋白，實(shí)現(xiàn)增溶、防降解、促進(jìn)分泌、便于純化和檢測等功能。6×His-Tag（組氨酸標(biāo)簽）含有的咪唑基團(tuán)選擇性地結(jié)合在已固定于層析介質(zhì)的Ni2＋、Co2＋等金屬離子上。高濃度的咪唑緩沖液可以競爭性洗脫結(jié)合在介質(zhì)上的His標(biāo)簽蛋白。據(jù)此推測，6×His-Tag的作用之一是________。31、為篩選出高效分解石油的微生物；研究人員取石油污泥10g加入到100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，適宜條件下培養(yǎng)2周，獲得富集培養(yǎng)液。將富集培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋并涂布于篩選平板上，適宜條件下培養(yǎng)后，篩選出分解石油效果較好的兩種菌株A和B。回答下列問題。

(1)在實(shí)驗(yàn)前需對基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，常用的方法是_________。涂布于篩選平板前，稀釋富集培養(yǎng)液的目的是__________。

(2)為了檢測A菌和B菌對石油污泥的實(shí)際分解石油效果，研究人員以石油污泥為底物進(jìn)行搖瓶實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)條件和結(jié)果如表所示。組別1234基礎(chǔ)物質(zhì)10g石油污泥、100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基10g石油污泥、100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基10g石油污泥、100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基10g石油污泥、100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)液種類無菌培養(yǎng)液1mLA菌液1mLB菌液1mLA菌液和B菌液各0.5mL7天后石油分解率17%86%70%92%

組別1中石油被分解的主要原因是___________。由表可知A菌和B菌在分解石油過程中具有一定的協(xié)同作用，判斷的依據(jù)是__________。

(3)為了確定A菌和B菌的種類，研究人員預(yù)利用PCR擴(kuò)增兩種菌的部分DNA片段，測定堿基排列順序后與已知序列對比。PCR的原理是_________，在PCR前需要設(shè)計(jì)特異性引物，引物的作用是___________，PCR每次循環(huán)一般分為_________三步。參考答案一、選擇題(共9題，共18分)1、A【分析】試題分析：生物武器種類：包括致病菌；病毒、生化毒劑；以及經(jīng)過基因重組的致病菌等。特點(diǎn)是①傳染性強(qiáng)②污染面積廣，不易被發(fā)現(xiàn)③有一定的潛伏期；自然條件會影響微生物的活性，進(jìn)而影響殺傷力；故選A。

考點(diǎn)：生物武器的特點(diǎn)。

點(diǎn)評：試題相對簡單，直接考查了生物武器的特點(diǎn)，注重基礎(chǔ)知識的考查。2、B【分析】【分析】

1；動物細(xì)胞核移植的概念：將動物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中；使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動物個(gè)體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。

2；原理：動物細(xì)胞核的全能性。

【詳解】

A；核移植的供體細(xì)胞一般為體細(xì)胞；A錯(cuò)誤；

B；傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞能保持正常的二倍體核型；適宜作為核移植的供體細(xì)胞，B正確；

C；傳代10～50代以內(nèi)的細(xì)胞；絕大多數(shù)細(xì)胞已死亡，存活的部分細(xì)胞的核型發(fā)生變化，所以不適宜用于核移植的供體細(xì)胞，C錯(cuò)誤。

D；處于減數(shù)第二次分裂中期的次級卵母細(xì)胞是核移植的受體細(xì)胞；D錯(cuò)誤。

故選B。

【點(diǎn)睛】

本題考查動物體細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞培養(yǎng)等知識，明確核移植的供體細(xì)胞是體細(xì)胞、受體細(xì)胞是去核卵母細(xì)胞是解決本題的關(guān)鍵。3、A【分析】【分析】

卵裂即為受精卵的有絲分裂；該過程中細(xì)胞數(shù)目增多；DNA總量增多，但是細(xì)胞總體積基本不變或略有減小，并且有機(jī)物總量減少。受精卵發(fā)育為囊胚的過程發(fā)生在輸卵管中，而后轉(zhuǎn)移到子宮中進(jìn)一步發(fā)育。囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層，其中內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將發(fā)育成各組織、器官，而滋養(yǎng)層細(xì)胞能發(fā)育成胎兒的胎膜和胎盤。

【詳解】

A；細(xì)胞膜表面均有糖蛋白；糖蛋白具有細(xì)胞識別功能，精子、卵細(xì)胞的相互識別保證了同種精卵結(jié)合，A正確；

B；受精卵在卵裂過程中；細(xì)胞的總體積基本不變或略有減小，而單個(gè)細(xì)胞的體積不斷減小，B錯(cuò)誤；

C；滋養(yǎng)層將發(fā)育成胎盤和胎膜；而內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒各種組織，具有發(fā)育的全能性，C錯(cuò)誤；

D；原腸胚發(fā)育分化形成內(nèi)中外三個(gè)胚層和一個(gè)原腸腔；桑椹胚時(shí)沒有胚層，D錯(cuò)誤。

故選A。4、C【分析】【分析】

胚胎發(fā)育過程：

（1）卵裂期：細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂；數(shù)量增加，胚胎總體積不增加；

（2）桑椹胚：32個(gè)細(xì)胞左右的胚胎；之前所有細(xì)胞都能發(fā)育成完整胚胎的潛能屬全能細(xì)胞；

（3）囊胚：細(xì)胞開始分化；其中個(gè)體較大的細(xì)胞叫內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胎兒的各種組織；而滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤；胚胎內(nèi)部逐漸出現(xiàn)囊胚腔；

（4）原腸胚：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)表層形成外胚層；下方細(xì)胞形成內(nèi)胚層，由內(nèi)胚層包圍的囊腔叫原腸腔。

【詳解】

A；個(gè)體發(fā)育包括胚胎發(fā)育和胚后發(fā)育；胚胎發(fā)育從受精卵到幼體，圖中①只能屬于早期胚胎發(fā)育，A錯(cuò)誤；

B；受精卵形成囊胚的過程中；胚胎總體積基本不變，細(xì)胞數(shù)目增多，因此每個(gè)細(xì)胞體積減小，B錯(cuò)誤；

C；原腸胚期開始出現(xiàn)內(nèi)、外胚層的分化；胚胎中DNA總量增加，C正確；

D；高等哺乳動物胚胎發(fā)育中的細(xì)胞分化開始于囊胚期；終止于生命結(jié)束，D錯(cuò)誤。

故選C。

【點(diǎn)睛】5、C【分析】【分析】

分析題圖：在1；2、3號壇中；亞硝酸鹽的含量變化都表現(xiàn)為先增加后下降的趨勢，其中在1月7日亞硝酸鹽含量最高，到1月14日亞硝酸鹽的含量下降到最低水平，之后亞硝酸鹽的含量基本保持不變。在泡菜腌制的初期，壇內(nèi)環(huán)境有利于硝酸鹽還原菌的繁殖，這些細(xì)菌可以促進(jìn)硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，但隨著腌制時(shí)間的增加，乳酸菌也大量繁殖，對硝酸鹽還原菌產(chǎn)生一定的抑制作用，使其生長繁殖受影響，造成泡菜中亞硝酸鹽含量又有所下降。

【詳解】

A；泡菜制作過程中需要消毒；鹽水需煮沸的目的是為了殺滅雜菌，冷卻后再用是為了防止溫度過高殺死所需菌種，A正確；

B；在腌制過程中由于加入鹽水；由于鹽水濃度大于細(xì)胞液濃度，植物細(xì)胞會通過滲透作用失水，泡菜壇中的溶液會增加，B正確；

C；腌制泡菜的過程中；起主要作用的微生物是乳酸菌，乳酸菌是厭氧菌，C錯(cuò)誤；

D；由題圖知；每個(gè)壇亞硝酸鹽含量測定間隔時(shí)間不同，該小組對每個(gè)壇中的數(shù)據(jù)分別畫出曲線，這是不科學(xué)的，設(shè)置三個(gè)泡菜壇目的是進(jìn)行平行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，取平均值，使實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更真實(shí)，D正確。

故選C。

【點(diǎn)睛】6、A【分析】【分析】

分析曲線圖：正常細(xì)胞在有血清和無血清培養(yǎng)時(shí)；同一培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)胞數(shù)目不同；癌細(xì)胞在有血清和無血清培養(yǎng)時(shí)，同一培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)胞數(shù)目變化趨勢一致；正常細(xì)胞與癌細(xì)胞在有血清（或無血清）的條件下培養(yǎng)，同一培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)胞數(shù)目不同。

【詳解】

A；正常細(xì)胞與癌細(xì)胞在有血清和無血清時(shí)曲線均不重疊；說明正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的增殖速率不同，A錯(cuò)誤；

B；正常細(xì)胞在有血清和無血清培養(yǎng)時(shí)；同一培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)胞數(shù)目不同，說明有無血清對正常細(xì)胞培養(yǎng)的影響不同，B正確；

C；正常細(xì)胞與癌細(xì)胞在有血清的條件下培養(yǎng)；同一培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)胞數(shù)目均比無血清時(shí)多，說明培養(yǎng)基中補(bǔ)充血清有助于正常細(xì)胞的培養(yǎng)，C正確；

D；癌細(xì)胞在有血清和無血清培養(yǎng)時(shí)；同一培養(yǎng)時(shí)間下細(xì)胞數(shù)目變化趨勢一致，說明培養(yǎng)基中是否補(bǔ)充血清對癌細(xì)胞的培養(yǎng)影響不大，D正確。

故選A。7、B【分析】【分析】

基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）；DNA連接酶、運(yùn)載體。

【詳解】

A；E.coliDNA連接酶只能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來；不能連接具有平末端的DNA片段，而T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端，A錯(cuò)誤；

BC；DNA連接酶是催化兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵；而不是氫鍵，B正確，C錯(cuò)誤；

D；DNA連接酶連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵；DNA連接酶不能將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到主鏈上，D錯(cuò)誤。

故選B。8、A【分析】【分析】

基因表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)過程；其中轉(zhuǎn)錄是以DNA的一條鏈為模板合成RNA的過程，該過程主要在細(xì)胞核中進(jìn)行，需要解旋酶和RNA聚合酶參與；翻譯是以mRNA為模板合成蛋白質(zhì)的過程，該過程發(fā)生在核糖體上，需要以氨基酸為原料，還需要酶；能量和tRNA等。

【詳解】

A；GUS基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段；DNA的基本單位是脫氧核苷酸，A錯(cuò)誤；

B；β-葡萄糖苷酸酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)；GUS基因編碼β-葡萄糖苷酸酶合成的過程包括轉(zhuǎn)錄（以基因的一條鏈為模板合成RNA）和翻譯（以mRNA為模板合成蛋白質(zhì)），B正確；

C；GUS基因作為一種報(bào)告基因；能夠在適宜條件下產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，故GUS基因和外源基因融合后導(dǎo)入受體細(xì)胞，可通過藍(lán)色的產(chǎn)生情況觀察表達(dá)情況，C正確；

D；GUS基因可編碼β-葡萄糖苷酸酶；β-葡萄糖苷酸酶可催化特定底物水解，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，將GUS基因和外源基因融合后導(dǎo)入受體細(xì)胞，理論上藍(lán)色的深淺可表示外源基因表達(dá)量的多少，D正確。

故選A。9、B【分析】【分析】

目的基因的檢測與鑒定：

1；分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

2；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A、給甲提供14CO2；一段時(shí)間后檢測到其體內(nèi)的部分有機(jī)物出現(xiàn)放射性，這說明甲中含有葉綠體，但不能說明的染色體DNA上存在乙編碼葉綠體部分蛋白的核基因，A錯(cuò)誤；

B；用乙編碼葉綠體蛋白的核基因做探針與甲的染色體DNA雜交；結(jié)果顯示出雜交帶，這說明甲的染色體DNA上存在乙編碼葉綠體部分蛋白的核基因，B正確；

C；通過PCR技術(shù)從甲體內(nèi)的DNA中克隆出屬于乙的編碼葉綠體蛋白的核基因；這只能說明甲體內(nèi)含有乙的編碼葉綠體蛋白的核基因，但不能說明甲的染色體DNA上存在乙編碼葉綠體部分蛋白的核基因，C錯(cuò)誤；

D；通過核酸分子雜交技術(shù)；在甲體內(nèi)檢測到乙的編碼葉綠體蛋白的核基因轉(zhuǎn)錄出的RNA，這只能說明甲體內(nèi)含有乙的編碼葉綠體蛋白的核基因，但不能說明甲的染色體DNA上存在乙編碼葉綠體部分蛋白的核基因，D錯(cuò)誤。

故選B。

【點(diǎn)睛】二、多選題(共6題，共12分)10、A:C【分析】【分析】

（1）動物細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜的流動性；細(xì)胞的增殖；誘導(dǎo)手段有電激、聚乙二醇、滅活的病毒等，結(jié)果產(chǎn)生雜交細(xì)胞，主要用于制備單克隆抗體。

（2）單克隆抗體制備的原理包括：①免疫理：B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體；②細(xì)胞融合原理：利用病毒對宿主細(xì)胞的穿透性使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合；③動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)；體外培養(yǎng)。

（3）制備單克隆抗體過程中的幾種細(xì)胞：①免疫B細(xì)胞（漿細(xì)胞）：能產(chǎn)生單一抗體；但不能無限增殖；②骨髓瘤細(xì)胞：能無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體；③雜交瘤細(xì)胞：既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖。

【詳解】

A；誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法有電激、聚乙二醇、滅活的病毒（如滅活的仙臺病毒）等；A正確；

B；兩兩融合的細(xì)胞包括免疫B細(xì)胞與免疫B細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的具有同種核的細(xì)胞、免疫B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞；骨髓瘤細(xì)胞雖然能無限增殖，但缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，免疫B細(xì)胞雖然有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但不具有無限增殖的本領(lǐng)，所以在HAT篩選培養(yǎng)液中，兩兩融合的具有同種核的細(xì)胞都無法生長，只有雜交瘤細(xì)胞才能生長，B錯(cuò)誤；

C；因每個(gè)免疫B細(xì)胞只分泌一種特異性抗體；因此在HAT篩選培養(yǎng)液中篩選出來的眾多的雜交瘤細(xì)胞所分泌的抗體，不一定都是人類所需要的，還需要進(jìn)一步通過專一抗體陽性檢測，把能分泌人類所需要抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選出來，C正確；

D；動物細(xì)胞融合是以細(xì)胞膜的流動性為基礎(chǔ)的；D錯(cuò)誤。

故選AC。

【點(diǎn)睛】11、A:D【分析】【分析】

根據(jù)題意分析：茯磚茶的制作包括發(fā)酵與發(fā)花等工序；發(fā)酵過程涉及多種酶催化，發(fā)酵后飲用有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

【詳解】

A；酵母菌是真菌；不是細(xì)菌，A錯(cuò)誤；

B；下“誘水”就是將原有老茶煮水后噴灑在料堆之上；相當(dāng)于微生物培養(yǎng)過程中的“接種”，推測相關(guān)菌種可耐熱，B正確；

C；發(fā)酵過程涉及多種酶催化；發(fā)酵后富含多種小分子營養(yǎng)物質(zhì)，因此發(fā)酵后飲用有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，C正確；

D；茯磚茶在儲藏過程中仍然繼續(xù)自然發(fā)酵；因此滅菌并密封處理，不利于長期保存，D錯(cuò)誤。

故選AD。12、A:B【分析】【分析】

iPS細(xì)胞被稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞；具有分裂和分化的能力。

【詳解】

A；目前已采用多種方法來制備iPS細(xì)胞；包括借助載體將特定的基因?qū)爰?xì)胞中，直接將特定的蛋白導(dǎo)入細(xì)胞中或者用小分子化合物等來誘導(dǎo)形成iPS細(xì)胞，A正確；

B、iPS細(xì)胞的體外培養(yǎng)是利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，需要在無菌的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；B正確；

C；T細(xì)胞、B細(xì)胞能被誘導(dǎo)為iPS細(xì)胞；說明離體的已分化的細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)可轉(zhuǎn)化為能分化的狀態(tài)，C錯(cuò)誤；

D；胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞均具有分裂能力強(qiáng)；分化程度低的特點(diǎn)，D錯(cuò)誤。

故選AB。13、A:D【分析】【分析】

分析題圖：圖中質(zhì)粒和外源DNA都含有限制酶A；B、C的識別序列和切割位點(diǎn)；若用酶A切割會同時(shí)破壞質(zhì)粒上的兩個(gè)抗性基因。

【詳解】

A；質(zhì)粒中含有2個(gè)酶A的酶切位點(diǎn)；所以切割后會產(chǎn)生4個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，A正確；

B；如果用酶A和酶C同時(shí)切割質(zhì)粒；會破壞質(zhì)粒的標(biāo)記基因，B錯(cuò)誤；

C；根據(jù)B項(xiàng)分析；需要用酶B和酶C切割質(zhì)粒和目的基因，導(dǎo)致四環(huán)素抗性基因被破壞，所以不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長，C錯(cuò)誤；

D；若用酶B和酶C切割；產(chǎn)生不同的黏性末端，可避免質(zhì)粒自身環(huán)化，D正確。

故選AD。14、A:C:D【分析】【分析】

微生物常見的接種的方法。

（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A；自生固氮菌是需氧型生物；步驟①土樣應(yīng)取自表層的土壤，步驟③中的稀釋梯度分別為10，100，1000倍，所以土壤懸浮液稀釋了1000倍，A正確；

B；自生固氮菌是異養(yǎng)型生物；可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或稀釋涂布平板法來計(jì)數(shù)土壤懸浮液中的菌體數(shù)，B錯(cuò)誤；

C；步驟②需充分振蕩20min；主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中，C正確；

D；步驟④為稀釋涂布平板法接種；所用的接種工具是涂布器，該選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)是不添加氮源，利用的是空氣中的氮?dú)?，D正確。

故選ACD。15、B:D【分析】【分析】

分析題圖：構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)；不能選用限制酶BamHⅠ，否則會導(dǎo)致兩種抗性基因都被破壞，因此應(yīng)該選擇Bc1I和HindⅢ這兩種限制酶，根據(jù)引物的延伸方向，所用的引物為圖乙中引物a和引物c。

【詳解】

A；PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合；根據(jù)引物的延伸方向，所用的引物為圖乙中引物a和引物c，A正確；

B；根據(jù)圖甲可知；BamHⅠ會導(dǎo)致兩種抗性基因都被破壞，同時(shí)為防止目的基因自身環(huán)化，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割，B錯(cuò)誤；

C；圖乙中一個(gè)DNA分子在PCR儀中經(jīng)過四輪復(fù)制可得到16個(gè)DNA片段；其中所需目的基因的分子數(shù)為8個(gè)，C正確；

D；由于選擇BclI和HindⅢ這兩種限制酶；破壞了氨芐青霉素抗性基因，但沒有破壞四環(huán)素抗性基因，因此應(yīng)該先用含四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出含有基因表達(dá)載體和普通質(zhì)粒的大腸桿菌，再用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，培養(yǎng)基加氨芐青霉素含普通質(zhì)粒的大腸桿菌能生存，而含重組質(zhì)粒的不能生存，從而篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的受體細(xì)胞，D錯(cuò)誤。

故選BD。三、填空題(共8題，共16分)16、略

【解析】①.接種②.平板劃線法③.稀釋涂布平板法17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】遠(yuǎn)緣雜交的不親和性細(xì)胞遺傳細(xì)胞免疫、18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】脲酶氨堿性增強(qiáng)升高pH的變化酚紅指示劑紅19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】3，5，DNA聚合酶不能從頭開始合成，而只能從3，端延伸DNA子鏈的5，端向3，端20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系基因修飾或基因合成改造新的蛋白質(zhì)自然界已存在21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】胰蛋白酶單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液原代傳代22、略

【分析】【詳解】

在日常生活中；我們遇到的有關(guān)生物技術(shù)安全與倫理問題有：生殖性克隆人倫理問題；試管嬰兒與設(shè)計(jì)試管嬰兒倫理問題、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性與倫理問題和生物武器的安全性等。

例如轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性：轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全性的爭議；主要集中在兩個(gè)方面，一是對人是否安全，二是對環(huán)境的影響。

對人的安全方面；支持轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為投放市場的轉(zhuǎn)基因作物都是經(jīng)過充分實(shí)驗(yàn)的，被改變的基因僅限于增加作物的抗病；抗災(zāi)害能力，并且在北美地區(qū)轉(zhuǎn)基因食品已經(jīng)使用的很多年，可以說現(xiàn)在美國加拿大20歲左右的年輕人從小就是吃轉(zhuǎn)基因食品長大的；反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品有害，他們的證據(jù)主要是一位科學(xué)家的實(shí)驗(yàn)證明，用轉(zhuǎn)基因食品喂養(yǎng)的小白鼠癌癥發(fā)病率明顯升高，但問題是這個(gè)實(shí)驗(yàn)只成功過一次，后來別的科學(xué)家在相同的條件下都沒能再現(xiàn)這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

在環(huán)境方面對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的爭議是最大的；也是歐洲人反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的重要依據(jù)，反對人持有的觀點(diǎn)是，通過改良基因創(chuàng)造出抵抗病蟲害和其他災(zāi)害的植物，這種技術(shù)如果失去控制可能會把農(nóng)作物改造成適應(yīng)性極強(qiáng)的超級植物，自然平衡使任何生物都不可能占絕對優(yōu)勢地位，但轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)生的超級植物可能會打破自然平衡而泛濫成災(zāi)。

倫理問題：由于轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新打破了物種界限,使不同物種間的基因可以進(jìn)行前所未有的新組合,其可能造成的危害難以預(yù)見,這就使轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新呈現(xiàn)前所未有的復(fù)雜性,并不可避免地會引發(fā)很多全新的社會倫理問題,引出種種有關(guān)生物科學(xué)家的道德責(zé)任和學(xué)術(shù)自由的哲學(xué)爭論。在轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新中,功利主義的預(yù)設(shè)和學(xué)術(shù)自由的主張必須以人類的價(jià)值、尊嚴(yán)和社會公正為前提條件。相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)家必須擔(dān)當(dāng)起必要的道德責(zé)任,把握好倫理橫桿,以促使轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新沿著科學(xué)的軌道健康發(fā)展?！窘馕觥吭谌粘Ｉ钪?；我們遇到的有關(guān)生物技術(shù)安全與倫理問題有：生殖性克隆人倫理問題；試管嬰兒與設(shè)計(jì)試管嬰兒倫理問題、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性與倫理問題和生物武器的安全性等。

例如轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性：轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全性的爭議；主要集中在兩個(gè)方面，一是對人是否安全，二是對環(huán)境的影響。

對人的安全方面；支持轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為投放市場的轉(zhuǎn)基因作物都是經(jīng)過充分實(shí)驗(yàn)的，被改變的基因僅限于增加作物的抗?。豢篂?zāi)害能力，并且在北美地區(qū)轉(zhuǎn)基因食品已經(jīng)使用的很多年，可以說現(xiàn)在美國加拿大20歲左右的年輕人從小就是吃轉(zhuǎn)基因食品長大的；反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品有害，他們的證據(jù)主要是一位科學(xué)家的實(shí)驗(yàn)證明，用轉(zhuǎn)基因食品喂養(yǎng)的小白鼠癌癥發(fā)病率明顯升高，但問題是這個(gè)實(shí)驗(yàn)只成功過一次，后來別的科學(xué)家在相同的條件下都沒能再現(xiàn)這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

在環(huán)境方面對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的爭議是最大的；也是歐洲人反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的重要依據(jù)，反對人持有的觀點(diǎn)是，通過改良基因創(chuàng)造出抵抗病蟲害和其他災(zāi)害的植物，這種技術(shù)如果失去控制可能會把農(nóng)作物改造成適應(yīng)性極強(qiáng)的超級植物，自然平衡使任何生物都不可能占絕對優(yōu)勢地位，但轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)生的超級植物可能會打破自然平衡而泛濫成災(zāi)。

倫理問題：由于轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新打破了物種界限,使不同物種間的基因可以進(jìn)行前所未有的新組合,其可能造成的危害難以預(yù)見,這就使轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新呈現(xiàn)前所未有的復(fù)雜性,并不可避免地會引發(fā)很多全新的社會倫理問題,引出種種有關(guān)生物科學(xué)家的道德責(zé)任和學(xué)術(shù)自由的哲學(xué)爭論。在轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新中,功利主義的預(yù)設(shè)和學(xué)術(shù)自由的主張必須以人類的價(jià)值、尊嚴(yán)和社會公正為前提條件。相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)家必須擔(dān)當(dāng)起必要的道德責(zé)任,把握好倫理橫桿,以促使轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新沿著科學(xué)的軌道健康發(fā)展。23、略

【分析】略【解析】自我更新分化潛能再生修復(fù)四、實(shí)驗(yàn)題(共4題，共12分)24、略

【分析】試題分析：本題考查泡菜的制作；考查對泡菜制作原理；亞硝酸鹽含量檢測原理的理解和識記。解答此題，可根據(jù)圖中曲線升降規(guī)律判斷泡菜制作過程中亞硝酸鹽含量變化趨勢，分析其升降原因，確定適合食用的發(fā)酵時(shí)間。

（1）測定亞硝酸鹽含量可用比色法；其原理是：在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N—1—萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行目測比較，可以大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。

（2）高溫可使微生物中的蛋白質(zhì)變性；殺死微生物，實(shí)驗(yàn)中鹽水加熱煮沸可殺滅雜菌；冷卻之后再使用是為了避免高溫使乳酸菌死亡。

（3）在腌制過程中；由于鹽水溶液濃度過高，細(xì)胞滲透失水，使壇中溶液量會增加。

（4）據(jù)圖可知；1；2、3號泡菜壇中，在腌制的第7天亞硝酸鹽含量均達(dá)到最大值，腌制到第14天以后亞硝酸鹽含量降到較低水平，可以避免亞硝酸鹽對人體健康的危害。

（5）泡菜制作過程中亞硝酸鹽含量變化與微生物的數(shù)量和代謝強(qiáng)度有關(guān)；實(shí)驗(yàn)中三只壇中產(chǎn)生的亞硝酸鹽含量存在差異，最可能的原因是各壇中微生物種類和數(shù)量可能存在差異。

（6）為讓實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更好的表明泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量變化，避免偶然因素造成的數(shù)據(jù)誤差，應(yīng)對該實(shí)驗(yàn)所獲得的三組數(shù)據(jù)先求平均值，再繪制一條曲線(將三個(gè)壇中每次測定的亞硝酸鹽的含量分別記錄，求出平均值，然后以日期為橫坐標(biāo)，亞硝酸鹽的平均含量為縱坐標(biāo)畫出一條曲線)?！窘馕觥勘壬倒寮t色染料殺滅雜菌乳酸菌外界溶液濃度過高使細(xì)胞滲透失水814各壇中微生物種類和數(shù)量可能存在差異(或其他合理答案)先求平均值，再繪制一條曲線（將三個(gè)壇中每次測定的亞硝酸鹽的含量分別記錄，求出平均值，然后以日期為橫坐標(biāo)，亞硝酸鹽的平均含量為縱坐標(biāo)畫出一條曲線）25、略

【分析】1；體外受精過程包括卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、體外受精；其中卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)的方法：

（1）主要方法是：用促性腺激素處理；使其超數(shù)排卵，然后，從輸卵管中沖取卵子，直接與獲能的精子體外受精。

（2）第二種方法：從已屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞。

（3）第三種方法：是直接從活體動物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞；叫活體采卵。

2；受精過程為：頂體反應(yīng)→穿越放射冠→穿越透明帶（透明帶反應(yīng)）→卵細(xì)胞膜反應(yīng)（卵黃膜封閉作用）→卵子完成減數(shù)第二次分裂并釋放第二極體→雌雄原核的形成、核膜消失；雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂開始。

【詳解】

（1）受精時(shí)；往往一個(gè)卵母細(xì)胞只能和一個(gè)精子結(jié)合，透明帶反應(yīng)是阻止多精入卵的第一道屏障，卵細(xì)胞膜反應(yīng)是阻止多精入卵的第二道屏障。

（2）該實(shí)驗(yàn)是利用牛的乳腺細(xì)胞生產(chǎn)血清白蛋白；因此實(shí)驗(yàn)步驟Ⅱ中構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要先將HSA基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起，再導(dǎo)入奶牛受精卵。

（3）動物早期胚胎的體外培養(yǎng)時(shí)；培養(yǎng)液中除了含有各種無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類；維生素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分外，還要添加激素和動物血清。培養(yǎng)過程需要定期更換培養(yǎng)液，清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害。

（4）血清白蛋白要從乳汁中提?。恢挥写菩阅膛２拍墚a(chǎn)生乳汁，因此胚胎移植時(shí)，必須選取雌性奶牛的胚胎進(jìn)行移植；對早期胚胎（如囊胚）進(jìn)行性別鑒定的常用方法是取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行染色體檢查或DNA分析；移植前還需要檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受精卵，通常采用DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測。

【點(diǎn)睛】

解答本題的關(guān)鍵是掌握體外受精、受精過程、基因工程等知識，要求考生識記體外受精技術(shù)的過程及方法、受精作用的過程、基因工程的操作步驟及應(yīng)用，并能夠聯(lián)系實(shí)際答題。【解析】透明帶反應(yīng)和卵細(xì)胞膜反應(yīng)乳腺蛋白基因的啟動子激素和動物血清清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害雌性取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行染色體檢查或DNA分析DNA分子雜交26、略

【分析】微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)操作：1；制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的過程為：計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板。2、純化大腸桿菌：（1）原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞；使其長成單個(gè)的菌落，這個(gè)單個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。（2）微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的開始部分，微生物往往連在-起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

（1）將上表菌液分別接種于100mL餐廚垃圾廢液中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)；振蕩處理的目的是增加溶液中的溶氧量；有利于目的菌與溶液充分接觸；本實(shí)驗(yàn)還需設(shè)置對照組為接種等量無菌水。

（2）測定活菌數(shù)；需要利用稀釋涂布平板法，接種時(shí)故需要取一定量菌液進(jìn)行梯度稀釋，然后分別取0.1mL的菌液采用涂布法接種于基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)。進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，可依據(jù)菌落的特征對兩種菌進(jìn)行區(qū)分，并選取菌落數(shù)在30-300內(nèi)的平板。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：兩種菌混合接種時(shí)有效菌落數(shù)均大于單獨(dú)接種；兩菌種接種量比例為1:1時(shí)，廢液中兩種菌種的有效活菌數(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)同步最大化。

【點(diǎn)睛】

本題結(jié)合圖表，考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記制備培養(yǎng)基的過程;識記接種微生物常用的兩種方法及微生物的計(jì)數(shù)方法，能結(jié)合柱形圖中信息準(zhǔn)確答題?！窘馕觥磕巢蛷N垃圾廢液等量無菌水稀釋涂布平板系列（梯度）稀釋涂布平板菌落特征30~300兩種菌混合接種時(shí)有效菌落數(shù)均大于單獨(dú)接種；兩菌種接種量比例為1：1時(shí)，廢液中兩種菌種的有效活菌數(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)同步最大化27、略

【分析】【分析】

基因突變是指DNA分子中發(fā)生堿基對的替換；增添和缺失；而引起的基因結(jié)構(gòu)的改變。翻譯是指在核糖體上，以mRNA為模板、以氨基酸為原料合成蛋白質(zhì)的過程，該過程還需要tRNA來運(yùn)轉(zhuǎn)氨基酸。

密碼子由位于mRNA上決定一個(gè)氨基酸的三個(gè)相鄰的堿基組成。終止密碼子的作用是終止翻譯過程。

基因工程中檢測目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)可以用抗原-抗體雜交技術(shù)。

【詳解】

（1）由題干信息可知；黏多糖貯積癥患者細(xì)胞中IDUA基因突變后，轉(zhuǎn)錄出的mRNA長度不變，說明其沒有發(fā)生堿基對的增添和缺失，因?yàn)檫@兩者改變會導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄出的mRNA長度改變，因此推測其基因突變是由于堿基對替換。由于終止密碼子提前出現(xiàn)，導(dǎo)致翻譯提前終止，肽鏈變短，IDUA酶分子量變小，空間結(jié)構(gòu)改變而失活。

（2）由題干可知；抑制性tRNA（sup-tRNA）可以最終誘導(dǎo)核糖體通讀mRNA上的遺傳信息合成具有功能的全長蛋白，并且抑制性tRNA（sup-tRNA）與普通tRNA的結(jié)構(gòu)；功能相同，據(jù)此推測該抑制性tRNA可以攜帶氨基酸至核糖體并與終止密碼子堿基配對使翻譯過程繼續(xù)。

（3）本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖潜容^攜帶不同氨基酸的sup-tRNA的通讀效果；需要保證實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞含有突變IDUA基因，即其不能合成具有正常功能的IDUA酶（防止正常IDUA酶對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾），同時(shí)保證在不同的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中可以轉(zhuǎn)錄出攜帶不同中氨基酸的sup-tRNA，因此實(shí)驗(yàn)組中受體細(xì)胞中應(yīng)該含有導(dǎo)入攜帶不同氨基酸的sup-tRNA基因和突變IDUA基因。若要判斷各個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中攜帶不同氨基酸的sup-tRNA是否成功誘導(dǎo)了具有功能的IDUA酶，可以采用該酶的特異性抗體對其進(jìn)行檢測，即進(jìn)行抗原-抗體雜交。分析題圖可知，與對照組（含正常IDUA基因的組）相比，含攜帶酪氨酸的sup-tRNA的受體細(xì)胞中表達(dá)的全長IDUA蛋白量比其他實(shí)驗(yàn)組都多，說明其能有效恢復(fù)細(xì)胞中全長IDUA蛋白的合成，且效果最好。

（4）由以上實(shí)驗(yàn)可知，攜帶酪氨酸的sup-tRNA能有效誘導(dǎo)核糖體對突變IDUA基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA進(jìn)行通讀，進(jìn)而產(chǎn)生具有正常功能的IDUA酶，因此利用攜帶酪氨酸的sup-tRNA對IDUA突變基因純合小鼠進(jìn)行治療，與不進(jìn)行治療的IDUA突變基因純合小鼠相比，治療組小鼠的IDUA酶活性高，組織黏多糖積累量少；同時(shí)，利用攜帶酪氨酸的sup-tRNA對IDUA基因敲除小鼠進(jìn)行治療，與不進(jìn)行治療的IDUA基因敲除小鼠相比，由于二者都不含有IDUA基因，則其細(xì)胞內(nèi)都沒有相應(yīng)mRNA，因此攜帶酪氨酸的sup-tRNA無法發(fā)揮作用，最終導(dǎo)致治療組與不治療組的IDUA酶活性與組織黏多糖積累量無明顯差異?！窘馕觥?1)替換減少。

(2)識別終止密碼子并攜帶氨基酸至核糖體使翻譯過程繼續(xù)。

(3)攜帶不同氨基酸的suptRNA基因和變IDUA抗原一抗體雜交恢復(fù)細(xì)胞中全長IDUA蛋白的合成；且效果最好。

(4)IDUA突變基因純合小鼠IDUA酶活性高，組織黏多糖積累量少；IDUA基因敲除小鼠IDUA酶活性與組織黏多糖積累量無明顯差異五、綜合題(共4題，共8分)28、略

【分析】【分析】

1；腐乳的制作原理：（1）腐乳的發(fā)酵在多種微生物的協(xié)同作用下進(jìn)行；其中起主要作用的是毛霉，它是一種絲狀真菌，新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型；（2）毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可以將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸。2、培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。

(1)

民間制作腐乳是不需要嚴(yán)格滅菌的；發(fā)酵時(shí)主要利用的是空氣中的毛霉孢子，空氣中還存在其他微生物，因此發(fā)酵好的豆腐上布滿的菌落，這些菌落不屬于同一物種。

(2)

腐乳外部一層致密的皮是毛霉的匍匐菌絲形成的；對人體無害，可以食用。

(3)

加鹽腌制前；豆腐經(jīng)歷從“白塊”到“晾曬2d”，該過程中毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將蛋白質(zhì)分解成氨基酸，使氨基酸含量增加；加鹽腌制后，一方面食鹽使毛霉的酶活性降低，另一方面加鹽使豆腐中的水分析出，部分氨基酸隨之析出，所以，腐乳坯中的游離氨基酸含量下降；鹽濃度過低，不足以抑制微生物的生長，導(dǎo)致腐乳腐爛變質(zhì)；加鹽能析出豆腐中水分，使豆腐塊變硬，能抑制微生物的生長，防腐殺菌，還能調(diào)節(jié)口味。

(4)

為了保證腐乳的品質(zhì)；能延長儲存時(shí)間，現(xiàn)代工藝生產(chǎn)腐乳是在嚴(yán)格滅菌的條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種直接接種在豆腐上；滅菌方法包括灼燒滅菌法；干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法，其中制作斜面培養(yǎng)基時(shí)對培養(yǎng)基滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌法，將試管傾斜的目的是增大接種面積。

【點(diǎn)睛】

本題考查腐乳的制作等相關(guān)知識，要求考生識記參與腐乳制作的微生物及其代謝類型，掌握腐乳制作的原理、條件及操作要點(diǎn)等基礎(chǔ)知識，能結(jié)合曲線圖作出準(zhǔn)確的分析。【解析】(1)（1）不需要不屬于。

(2)發(fā)酵時(shí)豆腐表面上匍匐的菌絲（匍匐菌絲）無。

(3)上升/增多/增加毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成氨基酸加鹽使毛霉的酶活性降低；加鹽使豆腐中的水分析出；部分氨基酸隨之析出豆腐腐爛變質(zhì)②③④

(4)滅菌高壓蒸汽滅菌法增大接種面積29、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：從基因文庫中獲??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】