酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)介紹：

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種酶聯(lián)免疫技術(shù)。用于檢測(cè)包被于固相板孔中的待測(cè)抗原(或抗體)。即用酶標(biāo)記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果。顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)正常值：

體內(nèi)菌群的種類和比例正常，人體處于動(dòng)態(tài)平衡健康狀態(tài)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)臨床意義：

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。常用的ELISA法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。在寄生蟲病方面，它用于對(duì)瘧原蟲、阿米巴、利日曼原蟲、錐蟲、血吸蟲、囊蟲、弓漿蟲、肺吸蟲、肝吸蟲、血絲蟲、旋毛蟲病等血清學(xué)診斷，這對(duì)人醫(yī)和獸醫(yī)都很重要。在病原微生物方面已用于檢查鏈球菌、沙門氏菌、布氏桿菌、結(jié)核桿菌、麻瘋桿菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體，還可用于破傷風(fēng)抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測(cè)定以及檢測(cè)斑疹傷寒立克次氏體感染后的抗體，可作診斷。對(duì)立克次氏體還可用以鑒別密切有關(guān)的種屬。也有用于檢查鸚鵡熱衣原體抗體的報(bào)導(dǎo)。試用于病毒抗體檢查報(bào)告的有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其敏感性都超過(guò)目前常用的檢查方法。在免疫性疾病方面有試用作自身疫病抗體測(cè)定以及對(duì)過(guò)敏的診斷，例如檢測(cè)各種過(guò)敏原的抗體、DNA抗體及甲狀腺球蛋白抗體，紅斑性痕瘡抗體等等。在衛(wèi)生學(xué)方面，可用于檢測(cè)食品中葡萄球菌腸毒素及沙門氏菌毒素等等。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.底物：各種酶都有對(duì)底物的特異性，所以使用不同種類的酶要求有不同的底物。一旦酶結(jié)合物已經(jīng)確定(如AP或HRP)，那么可供選擇底物的范圍是很有限的。在這有限底物的范圍內(nèi)如何選擇合適的底物呢?應(yīng)按下列幾個(gè)條件進(jìn)行選擇。(1)底物在未被酶催化以前應(yīng)該是無(wú)色的，而經(jīng)酶催化后有明顯的顏色變化，這樣可使結(jié)果分辨清楚;(2)所顯色澤易干洗脫;(3)顯色后的產(chǎn)物要求穩(wěn)定，在作定量測(cè)定時(shí)所產(chǎn)生的有色物質(zhì)應(yīng)該是可溶性的;(4)價(jià)廉，易得而且無(wú)毒。因此，對(duì)AP酶結(jié)合物來(lái)講，一般均用硝基苯磷酸鹽，顯色后呈桔黃色，色澤穩(wěn)定，用2mol/LNaOH終止反應(yīng)，可用波長(zhǎng)403nm測(cè)定O.D值。2.洗滌劑與稀釋劑：為了使特異性結(jié)合的抗體量盡可能多，包被微量反應(yīng)板凹孔的抗原應(yīng)該稍微過(guò)量。但在孵育或洗滌過(guò)程中，已吸附的抗原可能有部份會(huì)從固相載體上被洗滌下來(lái)。從而使加入被檢血清中的特異性抗體以外的蛋白質(zhì)很可能會(huì)吸附到原來(lái)包被抗原凹孔的空白處,增加本底顏色,產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng),這是限制ELISA特異性的一個(gè)因素.因此不少學(xué)者在稀釋劑及洗滌劑中加入各種保護(hù)性阻劑來(lái)抑制非特異性蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性吸附作用。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢查過(guò)程：

其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應(yīng)板)表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。根據(jù)ELISA所用的固相載體而區(qū)分為三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA，即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點(diǎn)ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA，稱為布ELISA(C