DB33T 2333-2021 飼料中β-胡蘿卜素的測定 高效液相色譜法

CCSB20DB33浙江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB33/T2333—2021請注意本標(biāo)準(zhǔn)的某些內(nèi)容可能涉及專利。本標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省畜牧獸醫(yī)和飼料標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（ZJQS/TC33本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省動物疫病預(yù)防控制中心（浙江省獸藥飼料監(jiān)DB33/T2333—20211飼料中β-胡蘿卜素的測定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中β-胡蘿卜素的高效液相色譜本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補(bǔ)充料、GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)5.1水：GB/T6682-2008，一級。5.5石油醚（沸程30℃~60℃)。5.10L-抗壞血酸乙醇溶液：稱取L-抗壞血酸0.5g，加4mL水加熱溶解，用無水乙醇稀釋至100mL混5.1150%氫氧化鉀溶液：稱取氫DB33/T2333—202125.13標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（500μg/mL稱取全反式β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品（CAS：7235-40-7，純度不低于95%）50mg（精確至0.01mg）至100mL棕色容量瓶中，加入10mL二氯甲烷（5.4）溶解，（5.4）稀釋并定容至刻度，混勻，每次臨用前按附錄A標(biāo)定。-20℃保存，有效期5.14標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100μg/mL精確移取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（5.13）10.0mL于506.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器/二極管陣6.2分析天平：感量分別為0.001g和0.0按GB/T20195制備試樣，至少200平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣配合飼料、精料補(bǔ)充料、濃縮飼料2g～5g或添加劑預(yù)混合飼料0.2g~醇溶液（5.10）50mL使試樣完全分散、浸濕），加熱超聲皂化20min，不時(shí)振蕩防止試樣粘附在瓶底和瓶壁上，皂化結(jié)束后取出迅速冷卻至室DB33/T2333—202138.4.1.1色譜柱：SB-C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)8.4.1.2流動相：甲醇+異丙醇+二氯甲烷=80+1準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見附錄B。以β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中的濃度為橫坐標(biāo)，色譜的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.999。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中β-胡蘿卜素的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)將試樣提取液用流動相稀釋（稀釋倍數(shù)n）至線性范圍內(nèi)，重新測定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中β-胡蘿卜素的濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理Wn……………………（1）式中:W——試樣中β-胡蘿卜素的含量，單位為毫克每千克（mg/kgC——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中β-胡蘿卜素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mLV——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升（mLV1——旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)所用試樣提取液的體積，單位為毫升（mLV2——旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后復(fù)溶液的體積，單位為毫升（mLm——試樣質(zhì)量，單位為克（gn——超出線性范圍后，需要進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。DB33/T2333—2021Wn……………（2）W——試樣中β-胡蘿卜素的含量，單位為毫克每千克（mg/kgCS——標(biāo)準(zhǔn)溶液中β-胡蘿卜素的濃度，單位為微克每毫升(μg/mLV——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升（mLV1——旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)所用試樣提取液的體積，單位為毫升（mLV2——旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后復(fù)溶液的體積，單位為毫升（mLm——試樣質(zhì)量，單位為克（gn——超出線性范圍后，需要進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。9.2結(jié)果的表示在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的10%。DB33/T2333—20215混勻。比色皿厚度為1cm,以正己烷（5.6）為空白,用分溶液濃度按式(A.1)計(jì)算:式中:X——β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL)；A——β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的紫外吸光值；E——β-胡蘿卜素在正己烷中的比吸光系數(shù)為0.2620；——測定過程中稀釋倍數(shù)的