PCR實驗室(新冠核酸檢測實驗室)SOP文件 (一)

XXX醫(yī)院檢驗科

基因擴增實驗室

標準操作規(guī)程

適用部門：基因擴增實驗室

XX醫(yī)院

目錄

第一部分工作制度及程序..................................................I

PCR實驗室各區(qū)工作制度及程序……1

PCR實驗室人員配置及培訓程序.........................................................4

PCR實驗室清潔程序.....................................................................5

PCR實驗室廢棄物處理程序.............................................................6

PCR實驗室生物安全防護程序.............................................................7

抱怨的處理程序................................8

PCR實驗室應急處理程序...............................................................9

第二部分標準操作規(guī)程...................................................11

臨床標本的采集及處理操作程序.........................................................11

標本接收、拒收及保存程序.............................................................12

實驗室化學試劑的管理和配制標準操作程序...............................................14

標本前處理（核酸純化）標準操作程序......................................................16

新型冠狀病毒核酸檢測標準操作程序.....................................................18

人乳頭瘤病毒分型檢測（基因芯片法）標準操作規(guī)程......................................24

核酸擴增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序.....................................................30

檢測結(jié)果分析的標準操作程序...........................................................31

檢測結(jié)果報告程序......................................................................34

實驗記錄管理程序......................................................................35

第三部分設(shè)備SOP文件..................................................36

AU1001-96全自動核酸提取儀（96通道）操作流程、校準及維護保養(yǎng)程序...................36

樂普Lepgen-96全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)操作流程、校準及維護保養(yǎng)程序..................41

凈化工作臺SW-CJ系列操作流程及維護保養(yǎng)程序..........................................48

博科生物安全柜操作流程及維護保養(yǎng)程序.................................................49

多恒DHG-9053BS-III電熱恒溫鼓風干燥箱操作流程及維護保養(yǎng)程序.........................54

多恒HH-100干式恒溫器（金屬?。┎僮髁鞒?、校準及維護保養(yǎng)程序........................56

多恒TD4Z低速離心機操作流程及維護保養(yǎng)程序...........................................60

多恒DH18R臺式高速冷凍離心機操作流程及維護保養(yǎng)程序.................................66

多恒MINI10K迷你離心機操作流程及維護保養(yǎng)程序........................................74

多恒MIX-25OO微型旋渦混合/勻器操作流程及維護保養(yǎng)程序..............................76

多恒2-96板式離心機操作流程及維護保養(yǎng)程序...........................................78

威高MSL.NC8O高壓滅菌器操作流程及維護保養(yǎng)程序.......................................80

紫外線消毒車操作規(guī)程操作流程及維護保養(yǎng)程序..........................................91

澳柯瑪藥品冷藏柜操作流程及維護保養(yǎng)程序.............................................93

澳柯瑪普通冰箱操作維護規(guī)程..........................................................95

移液器操作流程、校準及維護保養(yǎng)程序....................................................97

傳遞窗操作流程、校準及維護保養(yǎng)程序...................................................101

第四部分實驗室質(zhì)量控制...............................................102

實驗室試劑、耗材購買管理程序.........................................................102

試劑的質(zhì)檢標準操作程序..............................................................104

實驗耗材質(zhì)檢的標準操作程序.........................................................105

室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序................................................................107

室間質(zhì)評管理程序....................................................................Ill

第一部分工作制度及程序

PCR實驗室各區(qū)工作制度及程序

1目的：

實現(xiàn)PCR實驗室日常專人負責，確保實驗室操作的規(guī)范性。

2實驗室分區(qū)設(shè)置

2.1.1本院在檢驗科設(shè)置臨床基因擴增實驗室。

2.1.2按國家衛(wèi)生部《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》以及《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴

增檢驗實驗室工作導則》的要求，從房屋配置、裝修、采光、通風、隔離等條件將實驗室設(shè)置分為試

劑準備、貯存區(qū)（第一區(qū)）、標本制備區(qū)（第二區(qū)）及擴增和產(chǎn)物分析區(qū)（第三區(qū)）三個獨立區(qū)域。

各區(qū)門前有醒目標志，每個區(qū)都設(shè)置緩沖區(qū)，用于更換工作服、鞋套及維持空氣流向。進入各個工作

區(qū)域工作時，必須嚴格遵守單一方向順序：即從第一區(qū)的試劑貯存、準備區(qū)一-?第二區(qū)的標本制備區(qū)

—一第三區(qū)的擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。嚴禁誤入和逆向進入各工作區(qū)。

2.1.3各區(qū)的實驗物品（含移液器、試管架、吸頭盒、記錄本、筆等〕，不得混用，須貼上不同標

簽予以區(qū)別。

2.1.4各區(qū)配有不同顏色工作服：第一區(qū)試劑準備、貯存區(qū)為白色，第二區(qū)標本制備區(qū)為藍色，

第三區(qū)擴增及產(chǎn)物分析區(qū)為粉紅色。進入各區(qū)實驗室，必須更換本室有顏色標識的工作服，帶上手套。

3各分區(qū)工作制度

3.1試劑貯存、準備區(qū)工作制度

3.1.1本區(qū)只進行如卜工作：試劑的制備、分裝和反應液的制備及試劑貯存；其它操作不得在此

區(qū)進行。

3.1.2實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)專用藍色工作服。實驗中須戴一次性手套。

3.1.3記錄實驗室溫濕度和冰箱的溫度。

3.1.4根據(jù)當天所要檢測標本的種類、數(shù)量，取出和配制當天實驗所需的試劑，其余試劑要立即

收好放回冰箱內(nèi)。

3.1.5實驗中所使用的離心管、吸頭等需經(jīng)高壓滅菌處理，應在消毒有效期內(nèi)使用。

3.1.6試劑準備工作完成后，將使用過的離心管、吸頭置于盛2000mg/L有效氯消毒液的廢物盒

中，消毒清潔實驗臺面。

3.1.7將準備好的試劑放入一區(qū)到二區(qū)的傳遞窗。（注：傳遞窗的兩扇門不能同時開啟）；

3.1.8其他區(qū)的用品不得帶入本區(qū)。

3.1.9作好每次實驗記錄，書寫工整詳細，使用本室專用的、帶有本室標識的記錄本和筆。

3.1.10實驗完畢打開紫外燈消毒30?60分鐘，記錄紫外燈使用情況。

3.2標本制備區(qū)工作制度

3.2.1本區(qū)只進行如下工作：臨床標本的保存，核酸提取、貯存及加樣至擴增反應管，RNA檢測

逆轉(zhuǎn)錄（RT）合成cDNA；其它操作不得在此區(qū)進行。\

3.2.2實驗人員進入該區(qū)須穿本室專用白色工作服。實驗中須使用一次性手套，手套需常更換。

3.2.3從傳遞窗中取出試劑放入次箱冷凍室試劑存放專區(qū)暫存。

3.2.4記錄實驗室溫濕度和冰箱的溫度.

325核對標本的編號、類型和標本數(shù)量。

3.2.6按操作規(guī)程在生物安全柜內(nèi)進行標本的裂解、提取和加樣，加樣后，將其放入二區(qū)到三區(qū)

的傳遞窗。（注：傳遞窗的兩扇門不能同時開啟）；

3.2.7使用帶有本室專用標志的加樣器以及經(jīng)過消毒處理的離心管和帶濾芯的一次性吸頭。

3.2.8使用過的離心管、吸頭須置于盛有2000mg/L有效氯消毒液的廢物盒中。

3.2.9污染的處理：實驗中若在操作臺面上發(fā)生液體外泄，應立即用浸有2000mg/L有效氯溶液

的濾紙覆蓋發(fā)生污染處半小時，然后用酒精擦洗，并開啟紫外燈消毒。

3.2.10作好每次實驗記錄，書寫工整詳細，使用本室專用的、帶有本室標識的記錄本和筆。

3.2.11標本處理完成后，關(guān)閉所有儀器，記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。

3.2.12其他區(qū)的用品不得帶入本室。

3.2.13實驗完畢要開啟紫外燈消毒30?60分鐘，記錄紫外燈使用情況。

3.3擴增及產(chǎn)物分析區(qū)工作制度

3.3.1本區(qū)只進行如下工作：DNA或cDNA的擴增、實時熒光PCR擴增產(chǎn)物的分析、結(jié)果判斷、

記錄結(jié)果和生成檢測報告等；其它操作不得在此區(qū)進行。

3.3.2實驗人員進入該區(qū)須穿本區(qū)專用粉紅色工作服。實驗中須使用一次性手套，手套需常更換。

3.3.3記錄實驗室溫濕度。

3.3.4將從傳遞窗接收來的加好樣離心后的反應管上機擴增。

3.3.5擴增結(jié)束后，關(guān)掉擴增儀。記錄儀器使用時間和運行狀態(tài)。

3.3.6擴增結(jié)果分析完后，在工作清單中填入檢測結(jié)果。

3.3.7得到當天室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果后，輸入質(zhì)控軟件。

3.3.8作好每次實驗記錄，書寫工整詳細，使用本室專用的、帶有本室標識的記錄本和筆。

3.3.9實驗完畢要打開紫外燈消毒30?60分鐘，記錄紫外燈使用情況。

PCR實驗室人員配置及培訓程序

1目的：保證實驗室有足夠數(shù)量的合格的具備開展該類實驗能力的實驗人員。

2適用范圍：適用于實驗室人員配置、管理、培訓及考核。

3細則：

3.1人員要求

3.1.1本實驗室工作人員應為醫(yī)學檢驗專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有初級以上技術(shù)職稱或?qū)？埔陨蠈W

歷。

3.1.2實驗室工作人員應參加山東省臨床檢驗中心舉辦的PCR技術(shù)培訓I,并取得臨床基因擴增檢驗技

術(shù)上崗證。

3.1.3對于新進入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓合格證，應在實驗室有培訓合格證的上級技

術(shù)人員的指導下進行實驗工作，實驗報告由有資格人員出具，并應盡快取得上崗培訓合格證。

3.2人員配置

3.2.1實驗室應根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員。

3.2.2各級技術(shù)人員履行相應的工作職責。

3.3人員培訓及考核

3.3.1實驗室工作人員每1?2年至少參加1次PCR技術(shù)的省級或國家級繼續(xù)教育項目，參加相關(guān)學

術(shù)交流會議。

3.3.2安排未取得上崗培訓合格證的工作人員在合適的時間內(nèi)參加技術(shù)培訓。

3.3.3科室定期組織實驗室內(nèi)部實驗人員進行業(yè)務(wù)小講課、PCR實驗室人員每年進行本小組內(nèi)核酸擴

增方面的相關(guān)培訓，提升自身的理論學習水平。

3.3.4本實驗室工作人員每年至少進行考核一次。

3.4人員管理

實驗室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學歷、任職資格、發(fā)表論文、研完成果、培訓等

相關(guān)材料復印件。

PCR實驗室清潔程序

1目的：保證實驗室環(huán)境的整潔，防止污染。適于實驗室工作環(huán)境、實驗臺面、工作服、移液器

等的清潔消毒工作。實驗室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。

2范圍：實驗室相關(guān)人員及醫(yī)院清潔工人。

3細則：

3.1合理規(guī)劃實驗室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無用的或使用效率低的物品放置到儲存處,

常用的物品要容易尋找到。

3.2抽屜、柜子、文件類物品要作好標記，以方便識別。

3.3實驗結(jié)束后清潔臺面，并用移動紫外燈進行消毒。

3.4每周對使用過的移液器用75%酒精進行擦拭，若使用過程中發(fā)生污染應隨時移液器咀進行

75%酒精浸泡15分鐘左右。

3.5實驗過程中如發(fā)生標本或試劑外濺，應立即用浸有2000mg/L有效氯溶液濾紙蓋上半小時,

然后用酒精擦洗，并用移動紫外燈消毒。

3.6每天實驗前開啟各區(qū)的通風系統(tǒng)，各區(qū)實驗結(jié)束后，分別打開傳遞窗紫外燈、移動紫外燈

（對實驗臺面消毒）、天花板紫外燈消毒實驗室，每次開啟30?60分鐘。

3.7待紫外燈消毒時間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。

3.8依次清潔三個區(qū)的實驗臺面和地面，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一

方向流程的原則來進行清潔。

3.9處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。

3.10每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔開洗滌。

PCR實驗室廢棄物處理程序

1目的：確保廢棄物得到恰當?shù)奶幚恚乐刮廴经h(huán)境。預防工作人員在實驗過程中被感染或污染。

保證實驗室、實驗人員和外部環(huán)境的安全。

2適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用化學試劑（NaOH、EDTA、乙醇、生理鹽水等）、實驗

室廢棄物的處理；

3細則：

3.1科室職責應對本室工作人員講明本程序在預防交叉、實驗室污染及切斷傳播途徑中的重要

性，并要求嚴格執(zhí)行。

3.2實驗室所有垃圾，裝入專用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋

（黃色）。

3.3污染的標本容器、使用過的一次性消耗品（如試管、吸頭、離心管、等），置于盛2000mg/L

有效氯消毒液的的容器內(nèi)浸泡一晝夜后再交由醫(yī)院集中處理，使用過的手套、鞋套等直接放入

黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。

3.4無需保存的檢驗標本，不論檢驗結(jié)果如何，均需高壓滅菌或煮沸滅菌，或用強力消毒液處

理，污染的紙集中收集焚毀，污染的布可進行高壓滅菌。

3.5污水和標本不能直接流入下水道，必須經(jīng)過污水處理后再流入下水道。

3.6對各種有毒化學試劑應用后，要做相應的無害化處理，防止污染環(huán)境。

3.7日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交醫(yī)院處理。

PCR實驗室生物安全防護程序

1.目的：實驗人員和外部環(huán)境的生物防護。預防工作人員在實驗過程中被感染

或污染。

2.適用范圍：適用于實驗室人員和外部環(huán)境的生物防護

3.程序：

3.1工作人員在實驗過程中應嚴格遵守相應的操作規(guī)程。

3.2感染途徑：

3.2.1空氣傳播：如氣溶膠

3.2.2直接接種：工作中偶然的針刺、碎玻璃劃傷直接引起傳染。

3.2.3皮膚、粘膜接觸：臨床標本中的感染源通過破損皮膚，粘膜接觸造成感染。

3.3預防措施：

3.3.1所有來自病人的血液或體液標本均應視作傳染源，因此在標本的采集、運輸過程中，標本

容器應完好無泄漏。

3.3.2處理標本時應穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液

標本以及試劑，應立即沖洗干凈。

3.3.3在實驗過程中，病人標本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應立即用清水洗。

3.3.4實驗過程中在使用針具等銳器時，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時，應立即脫下手套,

盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時進行預防補救措施（如HBVDNA陽性

時可及時注射高效價的HBV特異性免疫球蛋白）。

3.3.5在實驗過程中病人標本（血液、體液）外漏工作泉面或地面時，應及時用4%84消毒劑清

潔桌面及地面，然后用清水擦凈。

抱怨的處理程序

1.目的：以病人為“中心”，以腦量為“核心”，優(yōu)質(zhì)服務(wù)?！氨г埂被趯εR床和病人（包

括家屬等）的返饋意見的重視，往往從中能發(fā)現(xiàn)實驗室存在的問題或漏洞。有利于提高檢驗和

服務(wù)質(zhì)量，減少醫(yī)療差錯和事故，鞏固和有效改進實驗室質(zhì)量體系，

2.范圍：來自于患者或家屬，臨床醫(yī)護人員或?qū)嶒炇夜ぷ魅藛T針對檢測結(jié)果質(zhì)量、服務(wù)

質(zhì)量和實驗室管理等問題的投訴或抱怨。

3.職責：

3.1通常由實驗室負責人負責抱怨的處理，必要時應會同科主任一起處理。

3.2對外部抱怨，實驗室工作人員不得推卸，應負責將抱怨人領(lǐng)到實驗室主任處，對電話抱怨須

作記錄并及時報告負責人。

4.工作流程：

4.1抱怨的接受：執(zhí)行者在接受抱怨時應熱情、友好、禮貌、嚴肅和認真，應記錄抱怨者姓名、

地址、聯(lián)系方式、抱怨內(nèi)容（首先注意穩(wěn)定抱怨者情緒）。

4.2抱怨的處理：

4.2.1能及時處理的抱怨應給予及時解決，記錄處理結(jié)果。

4.2.2不能及時處理的報怨應爭取與抱怨者約定反饋時間，盡可能將問題向?qū)嶒炇抑魅螀R報，尋

求妥善的處理方法，盡快答復抱怨者。

4.2.3抱怨的處理一般步驟：接受、安撫、傾聽、回應、致歉、解釋、處理、回復

4.2.4抱怨的處理以抱怨者的滿意為目的，但必須以遵重科學，遵重事實為原則，在不違背科學

原則，醫(yī)療行為規(guī)范的基礎(chǔ)上，爭取抱怨者最大程度的理解。

4.3抱怨處理的善后

4.3.1執(zhí)行人對報怨作兩份記錄：保留一份，上交檢驗科一份。

4.3.2對抱怨的審核遵照科內(nèi)部審核安排執(zhí)行。

4.3.3對抱怨中反映出的影響到試驗室質(zhì)量及質(zhì)量體系有效性的問題，室驗室負責人應會同相關(guān)

人員及時分析存在的問題，提出有效的糾正措施，并由試驗室負責人負責組織執(zhí)行。

4.4.4實驗室工作人員在向?qū)嶒炇邑撠熑藞笤沟貌坏綕M意解決時，有權(quán)向科主任提出報怨。

PCR實驗室應急處理程序

1.目的：在實際工作中，儀器設(shè)備發(fā)生故障、試劑盒發(fā)生質(zhì)量問題時，為保證檢驗結(jié)果的準確性、

及時，應正確采取應急措施，最大程度上避免或減輕不利影響。

2.適用范圍：適用于滿足核酸擴增熒光檢測實驗室檢測需要并可能對檢驗結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備

和試劑盒。

3.細則：

3.1核酸擴增熒光檢測實驗室工作人員在職責范圍內(nèi)均有責任熟悉各種儀器和相關(guān)設(shè)備的性能、要

求、維護和保養(yǎng)、常見故障的排除、尤其要嚴格按照操作規(guī)程操作，

3.2工作人員在職責范圍內(nèi)均有責任有意識地注意以求及時發(fā)現(xiàn)并報告儀器設(shè)備和試劑盒的異常情

況。

3.3作為應急處理，潛在著一定的可能影響檢測質(zhì)量的不確定因素。室負貢人負責在第一時間檢查

核實應急措施的有效性。

3.4儀器設(shè)備故障

3.4.1室負責人接到異常情況報警后，立即現(xiàn)場確認異常情況的性質(zhì)：觀察有無誤操作、偶發(fā)

現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。

3.4.2用紅牌故障標志標示故障儀器，以防被錯誤使用。

3.4.3有滿足要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備（準用儀器）。借用其他部門儀器設(shè)備時，及時

聯(lián)系借用并核實該設(shè)備的使用狀態(tài)。替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時，

必須同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。

3.4.4不能解決的問題，應及時與供應方會同解決。根據(jù)雙方合同約定，及時通知供應方。供應

方技術(shù)支持人員將在規(guī)定的時間內(nèi)隨身攜帶備用設(shè)備到達現(xiàn)場。

3.4.5儀器維修后，必須經(jīng)驗收合格并供需雙方簽字，調(diào)試實驗通過后才能重新啟用。取下紅色

故障標示（暫停使用），換上綠色正常標示（正常使用）。

3.4.6室主任須檢查并隨時跟蹤所采取措施的有效性。

3.4.7對未能及時排除故障時，必須及時上報科室，在科主任批準下，應積極聯(lián)系附近的其他已

得到山東省臨檢中心認證的臨床基因擴增檢驗實驗室檢驗，以滿足患者和臨床需求。

3.5試劑盒質(zhì)量發(fā)生問題，經(jīng)核實后，及時通知供貨商迅速更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)

量檢測，合格后方可使用。

3.6儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問題不能得到解決，預期將會影響到檢測報告的及時發(fā)出，可將標

本送至其它已得到上海市臨檢中心認證的臨床基因擴增檢驗實驗室檢查；如已影響到報告的

及時發(fā)出，應在門診取報告處向病人公告或向相關(guān)病區(qū)公告，取得病人的諒解。

3.7影響到檢測報告發(fā)出的情況，應在應急處理記錄表作記錄。

第二部分標準操作規(guī)程

臨床標本的采集及處理操作程序

1.目的：規(guī)范臨床待檢標本的正確采集、送檢和處理。

2.適用范圍：基因擴增檢驗實驗室的所有臨床檢測標本。

3.職責：所有采集標本的人員均需按本SOP操作，實驗室工作人員有責任向臨床醫(yī)生、護士或病

人宣教。

4.操作程序

4.1本實驗室檢測標本為：血清或血漿、痰、生殖道拭子標本、尿液及腦脊液和胸腹水。

4.2血液標本：用真空采集管采集血液標本，病區(qū)標本由護士采集，門診標本由門診抽血處專人采

集，血標本采集后在2小時內(nèi)送去實驗室。實驗室工作人員對標本進行查驗，如標本采血量不

足、嚴重溶血、采樣時間過長（特別是進行RNA檢測時）或出現(xiàn)其它不合要求的情況，應拒收

標木，登記并告知相關(guān)科室.

4.3痰標本：用帶蓋的無菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標本送檢。（對于無痰或少痰的患者，可

用45c加溫的100g/LNaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對于小兒可以輕壓

胸骨柄上方以誘導咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標本。）標本在室

溫下保存不能超過24小時。樣本處理時，在樣本中加入2倍體積的4%NaOH溶液，吹打均勻后

于室溫放置30分鐘使之液化。取液化后的痰標本1ml于1.5ml無菌離心管中，15000r/min離

心lOmin,棄上清，在沉淀中加TE溶液1ml（自備）混勻，15000r/min離心lOmin棄上

清，重復上述洗滌步驟一次。沉淀中加入50ulTBDNA提取液，震蕩混勻后100攝氏度沸水浴

15分鐘，15000r/min離心】0分鐘備用。

4.4生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時送檢。

采集生殖道拭子標本，要求病人在采樣有2小時內(nèi)不能排尿，采樣時，將棉拭子伸入男性尿道

及女性宮頸口2—3cm,轉(zhuǎn)動一周以獲得上皮細胞。將取樣后的棉拭子放入含1ml無菌生理鹽水

離心管中洗滌片刻，在管壁上擠干后丟棄拭子，13000rpm離心10mi「，棄上清，保留沉淀。

4.5尿液：由病人自留尿液于無菌封比的試管中送檢。取1ml于無菌離心管中，13000rpm離心lOmin,

棄上清，保留沉淀。

4.6腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時送檢。取1ml于無菌離心管中，

13000rpm離心lOmin,棄上清，保留沉淀，置-20℃保存。

標本接收、拒收及保存程序

1.目的：本程序是對分析前標本的質(zhì)量管理，是與確保檢驗質(zhì)量為臨床提供準確有效結(jié)果密切相

關(guān)，實驗室工作人員必須重視標本的采集、處理、貯存、安全處置等全過程。

2.范圍：PCR擴增的臨床各類檢測標本；

3.職責：PCR檢測實驗室現(xiàn)有工作人員須熟知標本的采集、處理、貯存、安全處置等全過程。并有

責任向臨床醫(yī)護人員進行宣傳培訓如PCR項目選擇、標本采集、運用、處理等技術(shù)要求和注意

事項。

4.標本的唯一性標識：標識由三部分構(gòu)成：檢測項目、標本采集日期、該檢測批次的標本序號，

三部分間無間隔符號，例如：B111210001分別表示實驗項目、年、月、日、序號，序號

（001-999）,整個標識為10-11位；

4.1由于標本容器太小，對應標本唯一性標識,產(chǎn)生工作標本序號，其組成有檢驗項目加序號（1-99）。

HBV用B表示、HCV用C、TB用TB、CT用CT、UU用UU表示等。

4.2標本種類用中文表示：全血、血清、血漿、痰、尿、分泌物、各種穿刺物、組織等。

4.3標本的唯一性標識須字跡清晰明了，不得隨意作任何涂改；必須時，在舊標識上劃雙線更改，

更改后應保持舊標識可辨識。

5.標本的接收：

5.1所有標本均可能具有傳染性，須嚴格遵守醫(yī)院有關(guān)院內(nèi)感染及醫(yī)用垃圾的管理和處理規(guī)定，工

作人員須注意保持并隨時檢查容器的完整和無標本外泄發(fā)生。

5.2接收標本時應核對標本與檢驗申請單的一致性。工作人員有權(quán)拒收與檢驗申請單不一致的標本、

標識不清的標本。檢驗申請有不清晰情況時，應即時與臨床科室或相關(guān)人員聯(lián)系核實。

5.3標本接收人須檢查標本狀態(tài).

5.4標本合乎要求，須在可接收標本記錄本上按內(nèi)容記錄，作進一步處理，標本不合乎要求，須在

記錄本上記錄拒收原因。

6.標本的拒收：標本在下列情況下，視為不合格，工作人員有權(quán)拒收標本；

①無被檢標本基本信息或與申請單不符合（姓名、年齡、性別、住院號、檢驗項目等）

②使用不適當?shù)娜萜鳎?/p>

③容器有破損；

④標本外泄污染；

⑤標本溶血；

⑥標本量不足

⑦其它如后續(xù)處理過程中發(fā)現(xiàn)的不合格，應記錄其狀態(tài)并通知臨床重新送檢。

對拒檢的不合格標本應登記在拒收標本記錄本上。填寫不合格標本處置單，并隨同申請單送返

送檢科室。必要時電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護士。

7.標本的保存：

7.1處理前的標本保存：

a）HBV：全血樣本可4c下短期（1?2周）保存，或分離出血清（血漿），保存于-20C下。

b）HCV：在室溫下1小時內(nèi)分離血清，吸取200回，保存于-20℃。盡可能快的提取RNA。

c）TB：液化的痰標本如果不立即用于核酸提取，可保存于-20C下。處理后的痰或胸腹水、腦

脊液、膿液用于TB檢測的標本可置于4℃下短期保存。長期保存于-20C下。

d）CT和UU：處理后的沉淀標本可置于一20C下短期保存。

7.2報告發(fā)出后的標本保存：

a）提取的核酸標本當天檢測可置4c保存，如當天不檢測應置-20C保存。報告發(fā)出后丟棄。

b）原始血清/血漿樣本在報告發(fā)出后放入低溫冰箱-20C保存3個月，以備查。超過3個月保

存期的標本由室負責人酌情處理，一?般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。

c）血清/血漿標本放置低溫冰箱保存時須有記錄，按檢測項目分類存放，并由專人負責管理。

實驗室化學試劑的管理和配制標準操作程序

1目的：保證實驗中用到的各種溶液符合實驗要求。

2.適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室常用溶液：4%NaOH溶液、75%的酒精、4%84消毒液、2000mg/L

有效氯溶液等。

3.管理程序：

3.1化學試劑的購買或領(lǐng)用：每月清點一次試劑，發(fā)現(xiàn)試劑存量不足時，及時領(lǐng)用或提交請購申請。

發(fā)現(xiàn)有試劑過期或明顯變質(zhì)時要立即報廢，并將報廢試劑妥善處理。

3.2化學試劑貯存：臨床基因擴增實驗室常用化學試劑均置于避光、陰涼、干燥處保存。實驗中常

用到的一些化學試劑則根據(jù)要求保存于不同環(huán)境（如預冷乙醇保存于4C）。PCR試劑一律貯存于

-20ro

3.3化學試劑使用：臨床基因擴增實驗室常用化學試劑均無毒性或僅有低腐蝕性，故使用時主要應

注意分類、分區(qū)保存、關(guān)注失效日期和使用后的及時清潔等。

4配制

4.1用具干燥潔凈的1000ml量筒一只，200ml量筒一只，50ml量筒一只，三角燒瓶兩只，天平一

架，250ml、1000ml廣口瓶各一只。

4.2配制步驟

4.2.1配制4%NaOH溶液

a.用天平稱取4克分析純的NaOll固體，置于一只三角燒瓶中。

b.用200ml量筒準確取100ml蒸鐳水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。

c.搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。

d.然后緩緩傾倒入250ml廣口瓶中密封保存?zhèn)溆谩?/p>

4.2.2配制4%84消毒液

a.用50ml量筒準確取401nl84消毒液原液，緩緩注入一只三角燒瓶中。

b.用1000ml量筒準確取960ml水，緩緩注入盛84消毒液的三角燒瓶中。

c.搖蕩混勻溶液，將混勻的溶液轉(zhuǎn)移入廣口瓶中e

4.2.3配制2000mg/L有效氯溶液消毒劑

本室采用片劑配制有效氯溶液，根據(jù)實際配制液體體積加入適當數(shù)量片劑。

4.2.4配制1%-2%甲基橙溶液

a.用天平稱取2克分析純的甲基橙固體，置于一只三角燒瓶中。

b.用200ml量筒準確取100ml蒸懦水，緩緩注入盛放甲基橙固體的三角燒瓶中。

C.搖蕩三角燒瓶使甲基橙固體充分溶解。

d.然后緩緩傾倒入250nli廣口瓶中密封保存?zhèn)溆谩?/p>

4.2.5配制75%酒精溶液

a.一般常規(guī)消毒的75%酒精由醫(yī)院庫房提供。

b.RNA提取的75%酒精的配制，試劑盒提供DEPC水，酒精用分析純的無水酒精。

c.根據(jù)當天的標本數(shù)量配制。

注意事項：每份配制好的溶液保質(zhì)期為14天。

標本前處理（核酸純化）標準操作程序

1.目的

規(guī)定DNA和RNA核酸樣本提取和純化實驗應遵守的操作。

2.適用范圍

從人體體液、細胞、組織等標本大批量提取和純化DNA和RNA。，并包括對核酸樣本的長期保存。

3.定義和術(shù)語

3.1DNADeoxyribonucleicAcid

即脫氧核糖核酸,是遺傳信息儲存及傳遞者。

3.1RNARibonucleicAcid

由脫氧核糖核酸（DNA）為模板轉(zhuǎn)錄合成的核糖核酸的片斷。

4.職責

4.1實驗技術(shù)員負責從不同樣本中提取和純化DNA和RNAo

5.沒備和器材

見正文內(nèi)容

6.正文

6.1實驗室設(shè)置

6.1.1在實驗室內(nèi)，試劑貯存，核酸提取，核酸質(zhì)量控制以及核酸樣本保存的區(qū)域應相互隔離。嚴禁

不同工作區(qū)內(nèi)的設(shè)備物品如加樣器、試劑等的移出移進造成不同的工作區(qū)間發(fā)生交叉污染。

6.1.2進入各個工作區(qū)的所有人員和物品必須遵循嚴格的順序，只能按單一方向進行，即從試劑貯存

和準備區(qū)一提取區(qū)一質(zhì)量分析區(qū)—標本保存區(qū)。

6.1.3工作人員穿著的工作服應經(jīng)常洗滌，盡量避免不同工作區(qū)內(nèi)的工作服相互混穿，造成污染。同

時，應假定樣本可能含有病原微生物，樣本DNA提取工作應參考P2級實驗室操作規(guī)范進行。

6.2工作區(qū)域功能和設(shè)備

6.2.1試劑貯存和準備區(qū)

該工作區(qū)用于貯存溶液的制備、溶液的分裝。本工作區(qū)儀器設(shè)備配置應包括如下：

A.4℃冰箱和-20℃冰箱、混勻器、微量加樣器（覆蓋1?1000川各個容量的加樣器）、生物安全柜（帶

紫外燈）；

B.專用辦公用品、專用工作服和工作鞋；

C.消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的高心管和加樣器吸頭等。

6.2.2提取區(qū)

該工作區(qū)用于標本貯存、核酸提取。本工作區(qū)儀器設(shè)備配置應包括如下：

A.4c冰箱、一20℃冰柜、高速臺式冷凍離心機、混勻器、水浴箱或加熱模塊、微量加樣器（包括I?

1000W各個容量的加樣器）、核酸提取儀、可移動紫外燈（近工作臺面）；

B.超凈工作臺和超聲波水?。ㄌ幚泶蠓肿覦NA）,專用辦公用品、專用工作服和工作鞋；

C.消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭等。

6.2.3質(zhì)量分析區(qū)

該工作區(qū)用于核酸濃度和純度測定。本工作區(qū)儀器設(shè)備配置應包括如下：

A.核酸分析儀；微量加加樣器若干支（覆蓋1?lOOpl）；

B.專用辦公用品、專用工作服和工作鞋；

C.消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、離心管和加樣器吸頭等。

6.2.4標本保存區(qū)

該工作區(qū)用于標本貯存。本區(qū)儀器設(shè)備配置應包括?80℃冰柜。

6.3RNA嗨污染源及預防

6.3.1實驗室用的普通玻璃器皿和塑料制品經(jīng)常有RNA酶污染，使用前必須于180℃干烤8小時或更

長時間（玻璃器皿）。

632對于塑料制品等不適合高溫烘烤的材料，使用RNA酶的抑制劑焦碳酸二乙酯（DEPC）處理。

通常是以0.1%的DEPC水溶液浸泡用于制備RNA的燒杯，試管和其他用品。灌滿DEPC的玻璃或

塑料器皿在37c放置2小時，在121c高壓蒸汽滅菌15分鐘。

633預防研究人員造成的污染

RNA酶最主要的潛在污染源是研究人員的手。因此，在準備分離的和分析RNA的材料和溶液時，

主要涉及RNA的一切操作過程中，都應戴一次性手套，接觸“臟的”玻璃器皿和其他物品以后，手套

就可能沾染上RNA酶，因此進行RNA實驗時應勤換手套。

6.3.4防止溶液的污染

用高壓滅菌的水和RNA研究專用的化學試劑配制溶液，用干烤過的藥匙稱取試劑，將溶液裝入無

RNA酶的玻璃器皿?？赡艿脑捜芤壕鶓?.1%DEPC于37℃至少處理12小時，然后于100℃加熱

15分鐘或在151bf/in2（1.034x105Pa）的高壓下蒸汽滅菌15分鐘。

注；DEPC可與胺類迅速發(fā)生化學反應，因此不能用來處理含有Tris一類的緩沖液。

6.4核酸標本保存

質(zhì)檢完畢后，打印條碼貼于樣品凍存管外壁，置于-80℃保存，可保存5年以上。做好標本貯存登記。

新型冠狀病毒核酸檢測標準操作程序

1目的

在當前新型冠狀病毒肺炎疫情期間，規(guī)范PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸的工作程序，保證實驗

結(jié)果的正確可靠。

2范圍

適合于檢驗科PCR實驗室。

3職責

3.1檢驗人員負責按照本檢測細則對被檢樣本進行檢測；

3.2復核人員負責對檢測操作是否規(guī)范以及檢測結(jié)果是否準確進行復核；

3.3專業(yè)組負責人負責對專業(yè)組綜合管理和檢測報告的審核。

4檢測流程

4.1核酸檢測前的生物安全防護（工作人員個人三級防護的穿戴）

4.1.1穿戴流程：

在基因擴增實驗室的清潔區(qū)（更衣區(qū)）或者普通實驗室的潔凈區(qū)，工作人員按順序依次穿戴好一次

性帽子、醫(yī)用N95口罩、一次性防護服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防護目鏡和雙層乳膠手套,

進入樣本處理工作區(qū)域或?qū)嶒炇摇?/p>

4.1.2要點提示：

?具備標準基因擴增布局條件的實驗室，應在清潔更衣區(qū)做好個人三級防護，條件有限的實驗室亦可

選擇在一潔凈的實驗室中按流程穿戴好個人三級防護。

?需佩戴醫(yī)用N95口罩，若無醫(yī)用N95口罩，可以考慮用普通N95/KN95口罩外加一次性外科口罩

的組合方式，但不要佩戴有呼吸閥的N95口罩。

?佩戴N95口罩時需檢查密閉性，通過雙手按壓、深呼吸、左右轉(zhuǎn)頭等動作嚴格檢查口罩是否佩戴

正確。

?一次性防護服已具備新型冠狀病毒核酸檢測的防護需求，有條件時可以考慮加穿一次性反穿隔離

衣，穿衣時需由他人協(xié)助。

?穿戴整齊的工作人員，應按要求盡快進入樣本處理的實驗區(qū)域開展工作，嚴禁穿戴三級防護后再進

入普通實驗區(qū)域或辦公區(qū)域。

4.2樣本的滅活處理

4.2.1操作流程：

兩名完成三級防護的工作人員，進入樣本處理區(qū)或樣本處理專用實驗室，將接收到的樣本二級包裝

在安全柜內(nèi)打開，檢查樣本主容器是否為嚴格密閉；對密封袋表面進行消毒后，對送檢樣本進行56℃

下30分鐘的滅活，滅活后的樣本管需在生物安全柜內(nèi)打開最內(nèi)層的容器，將拭子保存液混勻后進行

分裝和用于核酸提取。

4.2.2要點提示：

?涉及高致病性病原微生物的實驗室活動，需由兩名工作人員完成，其中一人負責主要實驗操作，一

人提供必要的協(xié)助。主操作者應避免反復多次進出安全柜。

?滅活形式：可以采用水浴或空氣加熱形式完成滅活，采用空氣加熱時可適當延長滅活時間。有條件

時可以采用小型化設(shè)備在安全柜內(nèi)操作，減少樣本進出安全柜的次數(shù)。滅活前的樣本嚴禁在生物安

全柜外打開和操作。

?應特別檢查采樣管是否擰緊、有無樣本溢漏等情況。

?樣本管每次進出安全柜均需對外表面進行消毒。

?應就近配備適量的消毒處理物品，以防止實驗操作過程中可能發(fā)生的意外溢灑事故，有條件時建議

在安全柜內(nèi)配備一次性吸水臺布。

4.3樣本的核酸提取

A、手工核酸提取操作流程

(1)裂解液配制：在基因擴增實驗室的試劑配制區(qū)或單獨的普通試劑配制實驗室中，準備核酸提取

所需的洗液1(AW1)、洗液2(AW2)和carrierRNA。按照要求，分別向洗液1和洗液2中加入

分子生物學級別的130ml和160ml的無水乙醇并及時做好標記;取3103洗脫液(AVE)溶解310pg/

支的CarrierRNA,配置好后，通過傳遞窗進入核酸提取區(qū)或由工作人員送入核酸提取專用實驗室。

(2)樣本裂解：取5603AVL裂解液到1.5ml無菌EP管中，加入5.63配制好的CarrierRNA,

再加入已經(jīng)滅活的1403樣本(例如咽拭子、血漿等)，混勻振蕩15秒，室溫靜置10分鐘，充分

裂解樣本中的核酸。將EP管瞬時離心后加入560Pl無水乙醇，充分混勻15秒，再次瞬時離心后備

用。吸取6303裂解產(chǎn)物，小心加入至離心柱中，8000rpm(或6000g)離心1分鐘，轉(zhuǎn)移離心柱

至新收集管，將剩余6303裂解產(chǎn)物加到離心柱中，重復上一離心操作(若樣本體積大于1403，則

在此步驟重復將6303裂解產(chǎn)物過濾收集在一個離心柱上)。

(3)核酸的洗滌：取500川洗液1(AW1)至離心柱中，8000rpm(或6000g)離心1分鐘；換新

收集管后，取5003洗液2(AW2)至離心柱中，8000rpm(或6000g)離心1分鐘；換新收集管

后，用14000rpm(或20000g)離心3分鐘，去除洗液2(AW2)；換新收集管后，繼續(xù)用離心機

最大轉(zhuǎn)速(20000g)離心1分鐘，充分甩離殘留的洗液2(AW2).

(4)核酸的洗脫和回收：取一1.5ml無菌EP管，將離心柱放入其中，加入洗脫液(AVE)40~60pl,

室溫靜置1分鐘后，用8000rpm離心1分鐘回收核酸，以備PCR檢測使用。

要點提示：

?新鮮裂解液的配制應盡可能在專門的潔凈區(qū)域或單獨的實驗室進行。

?要用分子生物學級別的無水乙醇試劑進行配制。

?向離心柱中加入裂解產(chǎn)物、洗液時操作要非常小心，盡量將洗頭下探到離心柱內(nèi)部后靠管壁加樣，

切忌出現(xiàn)溢灑后污染到離心柱的密封圈，這可能會導致乙醇殘留，抑制后續(xù)PCR反應。

?從離心機中取出離心柱時應小心操作，避免離心柱下緣被收集管中的濾過殘液污染。

?加入洗液2(AW2)后的第二次空管全速離心非常關(guān)鍵，能幫助充分甩離離心柱濾膜中殘留的洗液

2殘液，確保洗脫核酸的純度。

?洗脫液加樣時需小心操作，確保洗脫液盡可能覆蓋全部離心柱濾膜，充分洗脫核酸，提高核酸提取

的產(chǎn)量。

?手工核酸提取可優(yōu)選使用檢測試劑盒說明書推薦的配套手工提取試劑，也可選用通用手工提取試

劑。

?樣本處理過程中，工作人員覺得有必要時，應隨時更換新的外層乳膠手套。

B、采用核酸提取儀提取核酸的操作流程

根據(jù)核酸提取儀和試劑的說明書準備好提取試劑，取200川樣本上機提取核酸，并按照要求回收提

取好的核酸備用。

要點提示：

?不同的提取儀器和試劑的提取效率可能存在差異，請一定嚴格按照提取試劑盒的說明書進行核酸提

取操作。

?有條件時可以考慮配備小型化的核酸提取儀在安全柜內(nèi)使用，以進一步加強生物安全防護；若使用

在安全柜外的核酸提取儀，則一定要做好生物安全防護及樣本的防污染保護。

4.4PCR體系的配制和模板加樣

4.4.1操作流程：

在基因擴增實驗室的試劑配制區(qū)或單獨的專用實驗室，配制PCR體系。根據(jù)試劑盒說明書的要求，

將試劑盒的不同組分(一般包括反應液、悔、引物等)按照各自必須的體積量進行配制混合，充分

混勻并離心后，通過傳遞窗傳遞到核酸提取和加樣區(qū)，或由專人從試劑配制實驗室送至核酸提取和

加樣專用實驗室。在加樣專用生物安全柜內(nèi)，根據(jù)檢測樣本例數(shù)分裝體系到每個反應管中，逐一將

樣本核酸加入到對應的反應管中，并加蓋密閉好PCR反應管；每批次檢測需要做一個陽性對照和3

個陰性對照。

4.4.2要點提示：

?試劑配制必須嚴格在試劑配制區(qū)或單獨、潔凈的專用實驗室和安全柜內(nèi)進行，以確保試劑不會有被

污染的可能。

?試劑配制時要根據(jù)檢測樣本數(shù)量進行合理配制，每批次檢測均需要包括3個陰性對照和1個陽性

對照的試劑，同時還需要考慮試劑分配過程中的正常損耗等消耗。

?加樣可以和樣本處理/核酸提取在同一分區(qū)或同一間實驗室進行，但如有條件最好在單獨的加樣區(qū)

或至少使用專用安全柜進行加樣。

?體系分裝建議每次更換新的吸頭，避免反復使用帶來體積誤差和交叉污染。

?應配置體系加樣登記表，確保加樣過程準確無誤。

?PCR密閉管蓋應特別謹慎，建議更換新的手套，防止手套等接觸管蓋內(nèi)部帶入污染的風險。

4.5上機檢測及結(jié)果分析

4.5.1操作流程：

在擴增區(qū)或?qū)Ｓ脭U增實驗室，由專人取出配制好的PCR檢測管，混勻、離心后，小心上機檢測，按

照試劑盒說明書設(shè)置擴增參數(shù)并分析判讀結(jié)果。進行結(jié)果分析時，應認真閱讀試劑盒說明書，在了

解該試劑盒的靈敏度、檢測方法和局限性等技術(shù)特點的基礎(chǔ)上，結(jié)合該批次陰性質(zhì)控的結(jié)果，綜合

判讀樣本的檢測結(jié)果。檢測結(jié)束后，為防止可能的擴增污染，擴增結(jié)束后的PCR管嚴禁開蓋或帶離

擴增實驗室，應盡快通過可密封塑料袋等容器盛裝密閉后，放入指定專用醫(yī)療垃圾桶中做進一步處

理。

4.5.2要點提示：

?因基因擴增區(qū)存在污染的風險，應設(shè)專門的擴增區(qū)域或在單獨的專用實驗室進行擴增，必須和核酸

提取、試劑配制區(qū)域有嚴格的物理分割。

?不同操作區(qū)域的工作服不要混穿，特別是基因擴增區(qū)的工作服，建議僅在擴增區(qū)域或擴增實驗室內(nèi)

使用。

?熟悉檢測用PCR儀器的基本性能和特點，能客觀分析判斷檢測結(jié)果。

4.6檢測后的消毒處理

4.6.1操作流程：

(1)生物安全柜內(nèi)：在完成樣本核酸提取后，應在安全柜內(nèi)用75%消毒酒精對外層手套進行消毒

處理，并將外層手套取下后棄至安全柜內(nèi)的垃圾桶中。小心收納并丟棄使用過的一次性吸水臺布，

用0.5%~1%的有效氯消毒劑或75%酒精擦拭安全柜臺面、移液器等安全柜內(nèi)全部儀器的表面。將

安全柜內(nèi)產(chǎn)生的新型冠狀病毒相關(guān)醫(yī)療垃圾經(jīng)3層包裝后，轉(zhuǎn)移至實驗室的專用醫(yī)療垃圾桶中。開

啟紫外燈照射生物安全柜，時間應大于30分鐘。

(2)樣本核酸提取工作人員實驗室內(nèi)：他人協(xié)助用0.5%~1%的有效氯消毒劑或75%酒精均勻噴灑

內(nèi)層手套、袖口、手臂及隔離衣后，將外層反穿隔離衣脫下至新型冠狀病毒專用醫(yī)療垃圾桶中送高

壓處理。

(3)樣本處理實驗室內(nèi)：用0.5%~1%的有效氯消毒劑或75%酒精消毒實驗室臺面和地面；開紫外

燈進行大于30分鐘的空間消毒。

(4)工作人員摘脫三級防護：在緩沖區(qū)戴新的外層手套，摘護目鏡置于75%酒精浸泡消毒，從頭

開始，自上而下、由內(nèi)而外緩慢翻轉(zhuǎn)脫下一次性防護服，直到將一次性防水靴套全部脫下，將防護

服置于新型冠狀病毒專用醫(yī)療垃圾桶中送高壓處理。摘口罩、帽子、內(nèi)層鞋套和內(nèi)層手套后同樣置

于新型冠狀病毒專用醫(yī)療垃圾桶中送高壓處理。

(5)新型冠狀病毒相關(guān)醫(yī)療垃圾：所有新型冠狀病毒相關(guān)醫(yī)療垃圾均需經(jīng)濕熱高壓滅菌后再作為普

通醫(yī)療垃圾處理，且垃圾袋上應標注新型冠狀病毒醫(yī)療垃圾的相關(guān)信息。高壓處理前后的垃圾要嚴

格區(qū)分，在高壓滅菌專用區(qū)域?qū)π滦凸跔畈《踞t(yī)療垃圾進行濕熱高壓滅菌處理，高壓參數(shù)為121C、

30分鐘。高壓要做物理、生物指示，以確保高壓滅菌的效果。

4.6.2要點提示：

?生物安全柜內(nèi)是風險最高區(qū)域，操作者的外層手套經(jīng)消毒后必須脫在安全柜內(nèi)。

?靴套或鞋套的主要作用是對操作者的腳和腿部進行防護，要求必須防水，以確保在實驗室內(nèi)發(fā)生意

外遺灑時可隔離污染。

?核酸提取儀內(nèi)部、生物安全柜內(nèi)部和實驗室空間均應進行紫外線消毒，但紫外線對空氣的消毒效果

好，對物體表面的消毒效果隨距離變遠而減弱，故在紫外線消毒前，仍需對各種儀器表面、臺面、

地面用消毒劑進行擦拭消毒。

?工作人員在摘脫個人三級防護后，仍應參照實驗室原有實驗后操作流程進行嚴格認真的常規(guī)消毒處

理，特別是實驗后的手衛(wèi)生環(huán)節(jié)。

人乳頭瘤病毒分型檢測（基因芯片法）標準操作規(guī)程

1.0目的

規(guī)范人乳頭瘤病毒分型檢測（基因芯片法）操作程序。

2.0范圍

臨床基因擴增實驗室對HPV樣本進行基因分型檢測的操作。

3.0職責

取得臨床基因擴增檢驗上崗證的實驗室人員負責本規(guī)程的實施。

4.0內(nèi)容

4.1樣本收集

4.1.1標本類型生殖道脫落細胞（如宮頸口、尿道口等部位脫落細胞）。

4.1.2采樣方法對可疑生殖道HPV感染者，采樣前拭去宮頸口或尿道口過多的分泌物。

將棉拭子（或?qū)m頸刷）于子宮頸外口或尿道口處，輕壓并依順時針方向旋轉(zhuǎn)3?4周，

取得脫落細胞。對尖銳濕疣患者，將棉拭子（或?qū)m頸刷）于疣體表面反復擦拭以取得脫

落細胞。

將采樣棉拭子（或?qū)m頸刷）浸入盛有1ml無菌生理鹽水的樣本管中，充分漂洗。

將棉拭子（或?qū)m頸刷）貼壁擠干后丟棄，立即送檢。

4.L3標本保存采集的標本應盡快送檢，建議標本4℃保存不超過24小時，-20℃保存

不超過6個月，需要長期保存的標本應置于-70℃保存，避免多次凍融。

4.2樣本處理

4.2.1標本預處理

取出待處理標本，振蕩混勻；置離心機中以13,000rpm離心5分鐘；棄上清，保

留沉淀物。

（注意：-20℃保存的標本，應置室溫自然解凍后再使用！）

4.2.2DNA提取

4.2.2.1.準備2個離心管，分別加入陰性對照和陽性對照各￡uk

4.2.2.2.分別向上述對照品管及1.1項標本管加入50ulHPVDNA提取液，振蕩混

勻；然后沸水?。ɑ蚋稍。?0分鐘。

4.2.2.3.將上述樣本管置離心機中，13,000rpm離心10分鐘，保留上清液（DNA樣

品），備用。

4.2.3DNA樣品保存

建議DNA樣品立即用于PCR檢測，否則4℃保存；當天不檢測的樣品，-20℃保存。

4.3PCR擴增

4.3.1PCR反應混合液配制

根據(jù)待檢測總樣本數(shù)（包括對照品和臨床標本）和表1,配制PCR反應混合液。

（注意：實際計算用量時應計入損耗量）。

將PCR反應混合液充分混勻并短暫離心后，按每管28ul分裝至各PCR反應管中。

表1PCR反應混合液配制

組份HPVPCR反應液Taq/UNG

單份用量（口1）27.60.4

4.3.2加樣

取2ul待測DNA樣品分別加至上述PCR反應管中。蓋緊管蓋，混勻并短暫離心，

立即用于檢測。

（注意：-20℃保存的DNA樣品，應在加樣前取出，置室溫自然解凍并混勻后，13,000

rpm離心1分鐘，取上清用于檢測!）

4.3.3PCR擴增

將待檢測反應管小心置于PCR擴增儀中，按表2要求設(shè)置PCR擴增參數(shù)。

表2PCR擴增參數(shù)設(shè)置

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間

1150℃2min

2195℃10min

95℃30sec

34052℃45sec

65℃30sec

4165℃5min

4.4DNA雜交

4.4.1準備

4.4.1.1準備試劑：將雜交中和液及洗液B置55℃預熱。

4.4.1.2準備濕盒:

建議制作方法：用適當大?。ú恍∮?0cmX15cmXIOcm）的帶蓋塑料盒，內(nèi)置

吸水紙，加水浸濕，以無流動水為宜，55c預熱。