VLP形式的跨膜蛋白在CAR-T免疫治療方面的研究進(jìn)展

VLP形式的跨膜蛋白在CAR-T免疫治療方面的研究進(jìn)展前

言膜蛋白是與細(xì)胞膜磷脂雙分子層結(jié)合的蛋白質(zhì)，在生命活動(dòng)中具有重要作用，人類的許多疾病與膜蛋白功能異常有關(guān)，據(jù)統(tǒng)計(jì)目前50%的小分子藥物的受體為膜蛋白，所以膜蛋白是重要的藥物靶點(diǎn)。義翹神州已搭建基于HEK293表達(dá)系統(tǒng)的VLP技術(shù)平臺(tái)，能夠?qū)⒛康哪さ鞍淄暾故驹赩LP表面，已上線的產(chǎn)品GPRC5D、Claudin18.2、Claudin6等，與抗體結(jié)合均展示出良好的活性。義翹神州還可為有需求的客戶提供定制服務(wù)，助力藥物研發(fā)。01跨膜蛋白與VLP技術(shù)平臺(tái)跨膜蛋白具有多種生理功能，包括蛋白連接、識(shí)別、轉(zhuǎn)運(yùn)、錨定和轉(zhuǎn)導(dǎo)等，其功能的異常與諸多的疾病相關(guān)，是重要的藥物靶點(diǎn)。然而表達(dá)量低、體外不溶、純化不穩(wěn)定、難保持天然構(gòu)象等問題的存在，限制了跨膜蛋白在藥物開發(fā)方面的進(jìn)程。病毒樣顆粒（virus-likeparticles,VLPs）是由病毒的衣殼蛋白通過自組裝而形成的納米級(jí)顆粒（直徑約100～300納米），不含病毒核酸，不能進(jìn)行自主復(fù)制，生產(chǎn)操作過程中較為安全。VLPs最初應(yīng)用在原子水平上分析病毒結(jié)構(gòu)，隨后研究發(fā)現(xiàn)其能夠?qū)⑼暾烊粯?gòu)象的膜蛋白展示在類病毒顆粒表面，產(chǎn)生非常適合免疫和抗體篩選的全長跨膜蛋白。義翹神州聚焦于膜蛋白產(chǎn)品的開發(fā)，搭建了基于HEK293表達(dá)系統(tǒng)的VLP技術(shù)平臺(tái)，能夠?qū)⒛康哪さ鞍淄暾故驹赩LP表面，使其能夠像普通可溶蛋白一樣用于免疫和抗體篩選檢測，助力藥物研發(fā)。02跨膜蛋白在CAR-T研究中的應(yīng)用四次跨膜蛋白：ClaudinClaudins（CLDN）是一類存在于上皮和內(nèi)皮中的整合素膜蛋白，主要功能有細(xì)胞間黏附、維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)細(xì)胞通透性、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分化。Claudin蛋白為4次跨膜蛋白。Claudin的異常表達(dá)導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，如Claudin1與結(jié)腸癌、Claudin10與肝癌、Claudin18與胃癌。Claudin作為細(xì)胞表面蛋白，可用于多種治療策略的靶點(diǎn)或評(píng)估預(yù)后價(jià)值。Claudin蛋白結(jié)構(gòu)的描述（源自參考文獻(xiàn)）1:Claudin18.2Claudin18.2作為一個(gè)高度特異性的細(xì)胞表面分子，在正常胃組織中僅表達(dá)于已分化的上皮細(xì)胞，但在原發(fā)性胃癌、轉(zhuǎn)移性胃癌、胰腺癌、食管癌、卵巢癌、肺癌等多種實(shí)體瘤中高表達(dá)，例如50%-80%的胃癌患者中存在Claudin18.2的表達(dá)。Claudin18.2暴露的胞外結(jié)構(gòu)可與抗體結(jié)合，使其成為理想的單克隆抗體開發(fā)靶點(diǎn)，尤其是實(shí)體瘤免疫治療。CT041是一種CAR-T細(xì)胞療法，目前已在晚期胃腺癌或胰腺癌患者中開展臨床試驗(yàn)。2：Claudin6Claudin6是繼Claudin18.2之后，CLDN家族中另一個(gè)癌癥治療的潛力靶點(diǎn)。Claudin6由上皮細(xì)胞表達(dá)，在組織發(fā)育、維持緊密連接完整性、上皮組織的通透性等方面發(fā)揮作用。研究發(fā)現(xiàn)Claudin6在多種癌癥和實(shí)體瘤中特異性高表達(dá)，在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，有作為癌胚抗原和治療靶點(diǎn)的潛力。BNT211是一種靶向Claudin6的CAR-T細(xì)胞療法，在BioNTech的早期臨床開發(fā)中用于治療實(shí)體瘤，目前處于臨床I/II期。七次跨膜蛋白：GPCRG蛋白偶聯(lián)受體（GPCR），也稱為七次跨膜受體或七螺旋受體，是真核生物中最大和最多樣化的膜受體蛋白家族。對(duì)這些受體的研究和發(fā)現(xiàn)極大地影響了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，據(jù)估計(jì)，目前市場上約50%的藥物靶點(diǎn)是GPCRs。GPCRs結(jié)構(gòu)及信號(hào)通路概述（源自參考文獻(xiàn)）1：GPRC5DGPRC5D屬于GPCRs的一種孤兒受體，其配體和信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制尚未確定。在正常組織中GPRC5D僅表達(dá)于有免疫赦免性的毛囊區(qū)域，但在原代多發(fā)性骨髓瘤（MM）細(xì)胞表面高表達(dá)。數(shù)據(jù)顯示65%的MM患者（54/83）中GPRC5D的表達(dá)超過閾值，表明GPRC5D是MM治療的潛在靶點(diǎn)。作為候選藥物靶向CAR-T細(xì)胞治療MM時(shí)安全有效，其體內(nèi)活性等同于抗BCMA的CAR-T細(xì)胞。BCMA抗原丟失導(dǎo)致的腫瘤復(fù)發(fā)模型中，靶向GPRC5D的CAR-T細(xì)胞具有抗腫瘤活性。2：SSTR2生長抑素Ⅱ型受體SSTR2屬于GPCR，可阻止原癌基因的激活，抑制細(xì)胞的增殖，也可通過MAPK途徑使酪氨酸激酶失活，從而阻止細(xì)胞的增殖。近年來SSTR2在肢端肥大癥、消化道出血和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等治療方面應(yīng)用廣泛。SSTR2在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（NETs）中過表達(dá)，是診斷和治療的重要靶點(diǎn)。在小鼠模型中，抗SSTR的CAR-T細(xì)胞對(duì)NET細(xì)胞系具有靶向細(xì)胞毒性，可有效減緩腫瘤的生長速度，特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。3：CXCR4CXCR4是一種趨化因子受體，同樣屬于GPCR，對(duì)腫瘤的生長、侵襲、血管生成、轉(zhuǎn)移和對(duì)治療藥物的耐藥性起著重要作用，而且CXCR4過度表達(dá)還與許多癌癥亞型的不良預(yù)后相關(guān)。CXCR4廣泛表達(dá)于實(shí)體腫瘤和癌癥干細(xì)胞，在腫瘤細(xì)胞上具有較高的自我更新能力和強(qiáng)致瘤性。抑制CXCR4可加強(qiáng)T細(xì)胞和NK細(xì)胞浸潤，減少癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞募集，是增強(qiáng)CAR-T和CAR-NK細(xì)胞治療的潛在策略。?義翹神州全長跨膜蛋白產(chǎn)品義翹神州搭建了基于HEK293表達(dá)系統(tǒng)的VLP技術(shù)平臺(tái)，用于生產(chǎn)全長多次跨膜蛋白，已成功開發(fā)GPRC5D、Claudin6、Claudin18.2、SSTR2等蛋白，與抗體結(jié)合展示出良好的活性，具有如下優(yōu)勢：01全長蛋白，構(gòu)象完整02免疫原性高，適合抗體篩選03可用于多種檢測，如ELISA、SPR、BLI等產(chǎn)品驗(yàn)證數(shù)據(jù)HumanGPRC5D-VLPProtein,Cat:24447-HNAH高活性ImmobilizedHumanGPRC5D-VLP(FullLength)Protein(Cat:24447-HNAH)at5μg/mL(100μL/well)canbindanti-GPRC5DAntibody,theEC50

is3-10ng/mLHumanClaudin18.2-VLPProtein,Cat:30025-HNAH高活性ImmobilizedHumanClaudin18.2-VLP(FullLength)Protein

(Cat:30025-HNAH)

at5μg/mL(100μL/well)canbindAnti-Human

Claudin18.2

Antibody,HumanIgG1,theEC50

is5-20ng/mL.更多VLP跨膜蛋白貨號(hào)靶點(diǎn)種屬活性（EC50）24447-HNAHGPRC5DHuman3-10ng/mL24447-HNAH-BGPRC5DHuman4-12ng/mL16658-HNAHClaudin6Human2-10ng/mL30025-HNAHClaudin18.2Human5-20ng/mL30097-HNAHSSTR2Human5-20ng/mL11644-HNAHSSTR2Human10-30ng/mL11325-HNAH

CXCR4Human10-30ng/mL17646-HNA