藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證文稿演示

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證文稿演示（優(yōu)選）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證第十二條質(zhì)量控制的基本要求：（四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或確認(rèn)；第一百三十九條企業(yè)的廠房、設(shè)施、設(shè)備和檢驗(yàn)儀器應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)確認(rèn)，應(yīng)當(dāng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝、操作規(guī)程和檢驗(yàn)方法進(jìn)行生產(chǎn)、操作和檢驗(yàn)，并保持持續(xù)的驗(yàn)證狀態(tài)。第一百四十二條當(dāng)影響產(chǎn)品質(zhì)量的主要因素，如原輔料、與藥品直接接觸的包裝材料、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)環(huán)境（或廠房）、生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)方法等發(fā)生變更時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行確認(rèn)或驗(yàn)證。必要時(shí)，還應(yīng)當(dāng)經(jīng)藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。第一百四十三條清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證法規(guī)要求：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范第一百四十七條應(yīng)當(dāng)根據(jù)確認(rèn)或驗(yàn)證的對(duì)象制定確認(rèn)或驗(yàn)證方案，并經(jīng)審核、批準(zhǔn)。確認(rèn)或驗(yàn)證方案應(yīng)當(dāng)明確職責(zé)。第一百四十八條確認(rèn)或驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)按照預(yù)先確定和批準(zhǔn)的方案實(shí)施，并有記錄。確認(rèn)或驗(yàn)證工作完成后，應(yīng)當(dāng)寫(xiě)出報(bào)告，并經(jīng)審核、批準(zhǔn)。確認(rèn)或驗(yàn)證的結(jié)果和結(jié)論（包括評(píng)價(jià)和建議）應(yīng)當(dāng)有記錄并存檔。第一百四十九條應(yīng)當(dāng)根據(jù)驗(yàn)證的結(jié)果確認(rèn)工藝規(guī)程和操作規(guī)程。第一百六十二條質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、工藝規(guī)程、操作規(guī)程、穩(wěn)定性考察、確認(rèn)、驗(yàn)證、變更等其他重要文件應(yīng)當(dāng)長(zhǎng)期保存。第二百二十三條物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：（一）企業(yè)應(yīng)當(dāng)確保藥品按照注冊(cè)批準(zhǔn)的方法進(jìn)行全項(xiàng)檢驗(yàn)；（二）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證法規(guī)要求：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范1.采用新的檢驗(yàn)方法；2.檢驗(yàn)方法需變更的；3.采用《中華人民共和國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。（三）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；（四）檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)有書(shū)面操作規(guī)程，規(guī)定所用方法、儀器和設(shè)備，檢驗(yàn)操作規(guī)程的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與經(jīng)確認(rèn)或驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法一致；第二百三十條產(chǎn)品的放行應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：（一）在批準(zhǔn)放行前，應(yīng)當(dāng)對(duì)每批藥品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，保證藥品及其生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合注冊(cè)和本規(guī)范要求，并確認(rèn)以下各項(xiàng)內(nèi)容：1.主要生產(chǎn)工藝和檢驗(yàn)方法經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證法規(guī)要求：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范方法驗(yàn)證就是根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗(yàn)證內(nèi)容和驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)要求，并通過(guò)設(shè)計(jì)合理的實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證所采用分析方法是否符合檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求。?建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)對(duì)分析方法中的各檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行完整的驗(yàn)證；?當(dāng)藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法修訂時(shí)，可根據(jù)變更的內(nèi)容決定對(duì)分析方法進(jìn)行部分驗(yàn)證還是完整的驗(yàn)證；?當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生變更時(shí)，可能引人新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢査方法和含量測(cè)定方法的專(zhuān)屬性就需要進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測(cè)新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對(duì)主成分的含量測(cè)定應(yīng)無(wú)干擾；?當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項(xiàng)目分析方法發(fā)生部分改變時(shí)，如采用高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測(cè)限、定量限、專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗(yàn)證，證明修訂后的分析方法的合理可行；?當(dāng)變更達(dá)到一定程度時(shí)，則需要完整的驗(yàn)證。如分析方法完全改變，則應(yīng)按新方法進(jìn)行完整的驗(yàn)證。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證的一般原則：通常情況下，分析方法需進(jìn)行方法驗(yàn)證。對(duì)于僅需按照實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試操作步驟即可測(cè)定的檢驗(yàn)項(xiàng)目不需要進(jìn)行驗(yàn)證，如外觀、崩解時(shí)限、密度、重量、pH值、灰分、裝量等。方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點(diǎn)確定。同一分析方法用于不同的檢驗(yàn)項(xiàng)目會(huì)有不同的驗(yàn)證要求。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)項(xiàng)目檢驗(yàn)項(xiàng)目是為控制藥品質(zhì)量，保證藥品安全有效而設(shè)定的測(cè)試項(xiàng)目。根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)定目的和驗(yàn)證內(nèi)容的不同要求，將需驗(yàn)證的檢驗(yàn)項(xiàng)目分為四類(lèi)：?鑒別試驗(yàn)；?雜質(zhì)的限度檢查；?雜質(zhì)的定量測(cè)定；?含量測(cè)定，包括原料藥或制劑中有效成分的含量，制劑中其他成分（如防腐劑等）的含量，溶出度與釋放度等檢查中的溶出量，以及含量均勻度。除此之外還有一些物理項(xiàng)目的檢測(cè)如粒徑分布、旋光度、熔點(diǎn)和硬度，其要求與其他檢驗(yàn)項(xiàng)目有所不同，通常其分析方法驗(yàn)證應(yīng)有不同的要求。鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其他物質(zhì)。用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性和耐用性。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證雜質(zhì)檢査主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如無(wú)機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查分為限度檢査和定量測(cè)定兩部分。用于限度檢査的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專(zhuān)屬性、檢測(cè)限和耐用性。用于定量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性。含量測(cè)定對(duì)準(zhǔn)確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度和線性等要求。《中國(guó)藥典》2010年版中規(guī)定了不同的檢驗(yàn)項(xiàng)目需要驗(yàn)證不同的內(nèi)容，詳見(jiàn)下表：第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證驗(yàn)證內(nèi)容檢驗(yàn)項(xiàng)目鑒別雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確度否是否是精密度重復(fù)性否是否是中間精密度否是*否是*專(zhuān)屬性**是是是是檢測(cè)限否是***是否定量限否是否否線性否是否是范圍否是否是耐用性是是是是備注：1.*:已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度；2.**：如一種方法不夠?qū)?，可由其他分析方法予以補(bǔ)充；3.***：視具體情況予以驗(yàn)證；4.“是”代表該項(xiàng)內(nèi)容需要驗(yàn)證，“否”代表該項(xiàng)內(nèi)容不需要驗(yàn)證。方法驗(yàn)證內(nèi)容（本次主要介紹HPLC法含量測(cè)定方法的驗(yàn)證過(guò)程）1、色譜方法開(kāi)發(fā)流程主要包括以下步驟：選擇分離模式選擇色譜柱和填料規(guī)格選擇流動(dòng)相溶劑如果分離模式需要，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值進(jìn)行等度或梯度初步實(shí)驗(yàn)，以確定邊界條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證模式選擇通常分離模式是由以上因素決定：目標(biāo)物的類(lèi)型和溶解度、目標(biāo)物分子量（MW）、樣品基質(zhì)以及可使用的固定相和色譜柱。如：分子量＜2000在有機(jī)相中選擇正相、反相，在水相中選擇反相、離子對(duì)試劑反相或離子交換；分子量＞2000在有機(jī)相中可選擇凝膠滲透，在水相中選擇凝膠過(guò)濾、大孔填料的離子交換或大孔填料的反相色譜。又如：在水相/有機(jī)相中單糖和二糖可采用正相氨基、離子交換，多環(huán)芳烴采用反相C18，有機(jī)酸采用配位相互作用反相離子對(duì)，堿性、極性化合物采用極性反相C8、C18或反相C18離子抑制，位置異構(gòu)體采用反相C8，強(qiáng)極性化合物采用HILIC模式；在有機(jī)相非極性化合物采用正相Si，極性化合物采用正相氨基、氰基。在水相中合成的多分散性聚合物并限定分子量范圍采用體積排阻，合成多肽采用反相，聚合物采用水相GPC，重組多肽和Pr采用反相、陰離子或陽(yáng)離子交換；在有機(jī)相中合成的多分散性聚合物和其它可溶于有機(jī)溶劑的聚合物采用凝膠滲透，低聚物采用反相。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證選擇色譜柱和填料規(guī)格通常我們需考慮色譜柱固定相孔徑、填料的粒徑、長(zhǎng)度和內(nèi)徑。要進(jìn)行高通量分析可采用小粒徑短柱（如亞2μm）若對(duì)包括多種組分的樣品進(jìn)行復(fù)雜的分離，可以選擇小顆粒長(zhǎng)柱。若要進(jìn)行高靈敏度分析可采用2.1mm內(nèi)徑的色譜柱。填料的孔徑非常用重要，因?yàn)榇郎y(cè)分子必須與多孔結(jié)構(gòu)“相匹配”，才能與固定相發(fā)生相互作用。較小孔徑的填料（孔徑80到120?）適合分離分子量2000以下的小分子，對(duì)于分子量超過(guò)2000的較大分子，需要使用較大孔填料；例如：分離Pr的?？讖绞?00?。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證選擇流動(dòng)相溶劑（介紹反相）流動(dòng)相主要由兩部分組成：1、水：可含緩沖液，或用酸或堿調(diào)節(jié)pH值2、可與水混溶的有機(jī)溶劑反相色譜有多種用途，有時(shí)在同一色譜分析中就可以分離非極性、極性、可離子化的和離子型分子。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于可離子化的化合物，為了增加保留和改善峰形，我們會(huì)在流動(dòng)相中加入改性劑，以抑制離子化，減弱其極性，使其保留更強(qiáng)。一般來(lái)說(shuō)，反相LC的流動(dòng)相包括水（190nm）和作為改性劑的乙腈（190nm）或甲醇（205nm）,不太常用的改性劑還有四氫呋喃（THF212nm）和異丙醇（205nm）。選擇性差異和樣品的保留都會(huì)因流動(dòng)相不同而明顯改變。樣品溶解度也很可能不同，需要使用特殊的溶劑或多種溶劑。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證在反相色譜中，流動(dòng)相中水相的pH和離子強(qiáng)度在開(kāi)發(fā)對(duì)條件微小變化不敏感的耐用方法中非常重要。對(duì)于離子型化合物，典型樣品的保留隨pH改變而明顯變化。在這類(lèi)反相系統(tǒng)中，控制pH對(duì)于保留和選擇性的穩(wěn)定非常重要。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證用流動(dòng)相改性劑控制pH流動(dòng)相pH對(duì)色譜分離的影響有多種方式。根據(jù)所分析的化合物，pH可能影響選擇性、峰形和保留。如果是非極性較強(qiáng)或中性的化合物，pH對(duì)分離度和保留的影響一般不明顯。如果是酸性分析物，應(yīng)選擇低pH緩沖液流動(dòng)相，以防止分析物離子化。了解分析物的pKa，才能夠有效地選擇流動(dòng)相pH。緩沖范圍應(yīng)在其緩沖液離子pK值的+/-1pH單位，使流動(dòng)相的優(yōu)化具有一定的靈活性。例如，醋酸鹽的pKa為4.8，緩沖范圍從pH3.8-5.8。甲酸鹽的酸性較大，緩沖范圍為pH2.8-4.8。對(duì)于堿性化合物而言，在高pH條件下才能得到其非離子化形態(tài)，但這對(duì)色譜柱不利。但許多堿性化合物在低pH條件下的保留就已經(jīng)足夠了。因此，雖然非離子化形態(tài)能得到更高的保留，但這對(duì)與所有的堿性化合物并不是實(shí)用和必要的。UV檢測(cè)器常用的緩沖液：磷酸及其鹽類(lèi)具有良好的低UV透光率（＜200nm），和乙腈（190nm）一起，成為許多方法開(kāi)發(fā)工作者的首選。對(duì)堿的分離，可以選擇TEA（＜200nm）-磷酸鹽。磷酸鹽在有機(jī)相比例高的溶劑中溶解度較低，針對(duì)這一缺陷，建議磷酸鹽緩沖液與有機(jī)溶劑混合時(shí)，有機(jī)相不要超過(guò)70%。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證優(yōu)化反相色譜條件在確定了色譜柱規(guī)格、合適的固定相柱填料、流動(dòng)相溶劑和改性劑后，即可開(kāi)始優(yōu)化方法。方法的優(yōu)化是根據(jù)最終目標(biāo)決定的。如果要開(kāi)發(fā)質(zhì)量控制方法，您可能會(huì)需要像等度分離這種可變因素較少的方法。如果目標(biāo)是得到最高分離度，節(jié)省分析時(shí)間并不是首要問(wèn)題，可以選擇長(zhǎng)柱使所有組分都得到最大分離度。如果分離速度很重要，則應(yīng)使用短柱和高流速。對(duì)于含許多保留不同的目標(biāo)化合物的復(fù)雜樣品，用等度分離可能不能解決問(wèn)題，應(yīng)開(kāi)發(fā)并優(yōu)化梯度方法。等度優(yōu)化的一般方法是不斷改變流動(dòng)相強(qiáng)度（%B），直到獲得適當(dāng)?shù)谋Ａ舴秶?。這種方法有時(shí)也稱(chēng)為“溶劑篩查”。對(duì)于簡(jiǎn)單的分離，k值應(yīng)在1到10之間。如果k值太低（比如，<1），早洗脫的色譜峰可能不發(fā)生保留峰或融入基質(zhì)組分，因此對(duì)其進(jìn)行定量將非常困難而且不可重復(fù)。另外，低k值峰受柱外效應(yīng)影響很大，可能會(huì)使峰展寬。如果k值太大（比如，>10），分析時(shí)間將變得過(guò)長(zhǎng)，檢測(cè)限會(huì)因峰展寬而提高。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證對(duì)于反相色譜中的等度方法開(kāi)發(fā)是從流動(dòng)相有機(jī)改性劑最高比例開(kāi)始，然后逐漸降低。在降低流動(dòng)相強(qiáng)度之前，先要確定所有組分都已從柱中洗出。如果組分保留在色譜柱中，以后可能在B相比例較低的流動(dòng)相中洗脫，成為無(wú)法解釋的“鬼峰”。通常，流動(dòng)相以+/-10%（如，90%B、80%B、70%B等）或+/-20%的幅度改變。一旦建立優(yōu)化條件，如果目標(biāo)還沒(méi)有得到完全分離，則需繼續(xù)提高選擇性(α)。如需分離兩個(gè)相鄰的色譜峰會(huì)涉及到許多實(shí)驗(yàn)參數(shù)的調(diào)節(jié)。溫度可以作為一個(gè)變量。大多數(shù)現(xiàn)代儀器都具有某種類(lèi)型的柱溫控制器，大部分反相柱可以承受高達(dá)60℃的溫度，有些甚至更高。一般來(lái)說(shuō)，升高溫度可以縮短所有峰的保留時(shí)間，但對(duì)有些峰的影響可能與對(duì)其它峰不同，從而導(dǎo)致選擇性發(fā)生變化。其它用于改變選擇性的變量如下：1.pH（對(duì)于可離子化的化合物）2.緩沖液（離子）強(qiáng)度3.緩沖液類(lèi)型（比如，磷酸鹽、醋酸鹽或甲酸鹽，取決于需要的pH范圍）4.流動(dòng)相有機(jī)改性劑（比如，從乙腈變?yōu)榧状蓟騼烧叩幕旌弦海?.流速（一般而言，較低的流速可能對(duì)分離略有改善）6.離子對(duì)試劑濃度（如果使用離子對(duì)RPC）第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證如果調(diào)節(jié)這些參數(shù)還不能改善分離，那么最好的解決辦法就是改變色譜柱或固定相。更長(zhǎng)的色譜柱具有更多塔板數(shù)，因此有助于分離，但切記，分離度只能增加長(zhǎng)度的平方根。柱長(zhǎng)加倍使分析時(shí)間和溶劑消耗加倍，而靈敏度降低，但只能使分離度提高約40%。梯度優(yōu)化對(duì)于含各種組分的樣品混合物來(lái)說(shuō)，選擇單一流動(dòng)相組分可能得不到滿意的解決方案。例如，某些樣品組分，如強(qiáng)極性分析物，可能很快從反相柱上被洗脫下來(lái)，而疏水性組分可能在疏水性的C8或C18上吸附非常強(qiáng)，洗脫不下來(lái)。對(duì)這一問(wèn)題的解決方案是隨時(shí)間改變流動(dòng)相組成（梯度洗脫）。在絕大多數(shù)例子中，初始流動(dòng)相非常弱（比如，含水量高），隨時(shí)間的推移，有機(jī)溶劑的百分比通常是以線性形式增加。如使用了寬范圍的快速梯度（比如，10分鐘內(nèi)B由5%變到95%），確定目標(biāo)化合物的最佳梯度范圍。找到目標(biāo)峰洗脫的流動(dòng)相比例，然后通過(guò)下一次梯度，調(diào)節(jié)k*范圍，讓梯度分離在合理的時(shí)間內(nèi)完成。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證方法開(kāi)發(fā)過(guò)程需滿足條件：理論板數(shù)：一般要求＞3000或4000分離度：一般要求＞1.8，實(shí)際研究盡量＞2.0托尾因子：一般要求0.95~1.05之間待測(cè)物保留時(shí)間：最好調(diào)至20分鐘左右（根據(jù)分離度）第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證2、供試品溶液制備：化藥一般直接用水、相應(yīng)的溶劑或流動(dòng)相溶解即可；而中藥一般過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，現(xiàn)以中藥的制備進(jìn)行說(shuō)明，包括以下過(guò)程。提取溶劑選擇提取方式提取時(shí)間第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證提取溶劑選擇一般選擇80%甲醇、50%甲醇、乙醇等（注意100%強(qiáng)溶劑的色譜峰過(guò)早洗脫現(xiàn)象）；選擇溶劑時(shí)，固定提取方式和提取時(shí)間（一般超聲30分鐘），看哪種溶劑提取含量高，證明效果好，為最佳提取溶劑。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證提取方式選擇一般回流提取1小時(shí)、超聲30分鐘、冷浸8小時(shí)等（各條件需驗(yàn)證）；如：提取溶劑為80%甲醇，在以上三條件下確定最佳提取方式；經(jīng)驗(yàn)：一般回流提取1小時(shí)與超聲30分鐘比較接近，由于超聲比較方便，故一般選擇超聲提?。ㄗ⒁獬曁崛」β?、頻率、時(shí)間的選擇）；有些較堅(jiān)硬的樣品，如三七、郁金、莪術(shù)粉等，一般選擇回流提取；有些較難提取的樣品可能需回流和超聲提取配合使用；有些化學(xué)藥品超聲后含量會(huì)降低（破壞分子結(jié)構(gòu)）；通常冷浸效果不好（現(xiàn)藥典很少單獨(dú)采用此法），有些樣品需冷浸同超聲或回流配合應(yīng)用，以達(dá)到良好的提取效果；有些樣品如母丁香等含易揮發(fā)的成分冷浸效果好，另外揮發(fā)油一般用冷浸。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證提取時(shí)間選擇在確定提取溶劑及提取方式后，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定提取時(shí)間；如實(shí)驗(yàn)設(shè)定：分別提取20分鐘、30分鐘、40分鐘甚至50分鐘…，測(cè)定含量，通過(guò)含量多少確定最佳提取時(shí)間；下圖：提取20分鐘與30分鐘樣品含量無(wú)較大差異，為了確保提取完全，選擇30分鐘（需考慮天氣、制粒等因素的差異，故選擇30分鐘）。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證提取容器選擇一般選擇用錐形瓶或容量瓶錐形瓶：樣品不完全溶解于提取溶劑方法：取一定量樣品，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入一定量提取溶劑，稱(chēng)定重量，超聲（或回流）提取一定時(shí)間，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用提取溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。容量瓶：樣品全部溶解于提取溶劑方法：取一定量樣品，精密稱(chēng)定，置量瓶中，加入提取溶劑適量，超聲（或回流）提取一定時(shí)間使樣品溶解，放冷，用提取溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。注意：若不完全溶解于提取溶劑的樣品采用容量瓶法，則檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)偏高。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證3、方法驗(yàn)證內(nèi)容專(zhuān)屬性檢測(cè)限（LOD）與定量限（LOQ）：含量測(cè)定不用做此項(xiàng)，雜質(zhì)定量需做此項(xiàng)；線性精密度：包括重復(fù)性試驗(yàn)及中間精密度試驗(yàn)，已有重現(xiàn)性不需再驗(yàn)證中間精密度；準(zhǔn)確度范圍耐用性含量測(cè)定第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性系指在其他成分（如：雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。通常，鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。方法1：在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向試樣中加人雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測(cè)定結(jié)果。方法2：在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專(zhuān)屬性可通過(guò)測(cè)定含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，與另一個(gè)已驗(yàn)證的方法或藥典方法比較結(jié)果?；?qū)υ嚇佑脧?qiáng)光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)進(jìn)行峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證專(zhuān)屬性中藥復(fù)方可做陰性對(duì)照樣品：陰性對(duì)照色譜圖中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置無(wú)色譜峰，則無(wú)干擾。中藥復(fù)方有陰性干擾是很常見(jiàn)的事，含測(cè)是只要陰性干擾不大于5％的話，是可以接受的。具體做法是：將那個(gè)“小包”也通過(guò)積分，計(jì)算其峰面積，再根據(jù)你樣品和陰性樣品的取樣量分別計(jì)算該成分的含量，陰性中該成分含量應(yīng)低于樣品含量的5％；如果大于5％說(shuō)明專(zhuān)屬性不強(qiáng)，實(shí)在沒(méi)辦法以別的成分定量的話，就只能做雙陰性了，但法規(guī)上有一些矛盾。色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說(shuō)明方法的專(zhuān)屬性，并應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置，色譜法的分離度應(yīng)符合要求。代表性圖譜包括：陰性對(duì)照色譜圖、對(duì)照品色譜圖、供試品DAD圖、對(duì)照品DAD圖、質(zhì)譜圖及各條件下的破壞性實(shí)驗(yàn)圖譜等。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證檢測(cè)限（LOD或DL

）：含量測(cè)定可不驗(yàn)證檢測(cè)限系指試樣中的被測(cè)物能夠被檢測(cè)出的最低量。藥品的雜質(zhì)測(cè)定，應(yīng)通過(guò)測(cè)試確定方法的檢測(cè)限。方法1：非儀器分析目視法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。方法2:信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較（現(xiàn)儀器一般不需做空白樣品，可直接計(jì)算出信噪比），計(jì)算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證定量限（LOQ或QL）：含量測(cè)定可不驗(yàn)證定量限系指試樣中的被測(cè)物能夠被定定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限。信噪比法：一般以信噪比為10:1時(shí)相應(yīng)濃度或注人儀器的量確定定量限。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和定量限結(jié)果。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證線性線性系指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與試樣中被測(cè)物的濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量測(cè)定和含量測(cè)定均需驗(yàn)證線性。驗(yàn)證方法應(yīng)在規(guī)定的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱(chēng)樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度的供試樣品，每個(gè)濃度各一份，每份供試樣品檢測(cè)3次，以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證線性通常做法（1）如上：取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（不少于5個(gè)濃度），分別進(jìn)樣相同體積，然后計(jì)算進(jìn)樣量與峰面積之間的線性關(guān)系；（2）取同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣不同體積（不少于5個(gè)體積），然后計(jì)算進(jìn)樣量與峰面積之間的線性關(guān)系。個(gè)人認(rèn)為：第（2）種更科學(xué)，包括樣品量的變化，進(jìn)樣體積的變化，但從藥審角度來(lái)看，更青睞于第一法，因?yàn)榈谝环ㄊ菃我蜃涌疾?。一般情況：直線40%設(shè)為常量，最高量為常量的2.5倍，最低量為常的1/4倍，點(diǎn)數(shù)一般5~7個(gè)。如：分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml置10ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，混勻…其中4ml配制的濃度為常量濃度第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證線性通常做法若為新藥，常量濃度如何確定？可通過(guò)3根不同填料色譜柱，確定尖峰（非平頭）最大濃度，同時(shí)需綜合考慮樣品制備過(guò)程。常量為最大濃度的40%最小量為確定常量的1/4進(jìn)樣量常量：20μl故一般體積進(jìn)樣：則為5μl、10μl、20μl、30μl、40μl、50μl常量：10μl故一般體積進(jìn)樣：則為2.5μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證線性線性范圍要足夠?qū)挘繙y(cè)測(cè)至少80%~120%，但藥材有時(shí)特別低，所以藥材要保證最低點(diǎn)在線性范圍內(nèi)。不同分析方法的線性驗(yàn)證和準(zhǔn)確度驗(yàn)證需涵蓋的最低濃度范圍

第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證線性數(shù)據(jù)要求應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：r值在0.9995以上，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的2％以內(nèi)。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證精密度精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。精密度與準(zhǔn)確度不同，下圖形象地描繪了精密度和準(zhǔn)確度之間的差別。精密度體現(xiàn)了多次重復(fù)測(cè)定同一被分析物時(shí)各測(cè)定值之間的接近程度，但它不能表達(dá)與已建立的真實(shí)值或參考值之間的符合程度，后者由準(zhǔn)確度來(lái)測(cè)定。通過(guò)一系列的測(cè)定值，可以得到良好的精密度，但是由于所用分析方法存在的偏差，所得的平均值不一定與真實(shí)值或參考值相符，在這種狀況下，需要修改方法以消除偏差。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證精密度精密度與準(zhǔn)確度關(guān)系圖第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證精密度驗(yàn)證方法精密度可從重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性三個(gè)層次考察。重復(fù)性：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。重復(fù)性需考察以下兩方面：儀器精密度和方法精密度儀器精密度：考察儀器（包括進(jìn)樣器）、色譜柱、流動(dòng)相、樣品與色譜條件之間是否符合要求?？疾旆椒ǎ喝⊥粯?biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，測(cè)得峰面積或峰高，計(jì)算RSD%值?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：RSD%≤2.0n≥6第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證精密度方法精密度：在考察儀器精密度的基礎(chǔ)上，考察所擬定的方法是否符合精密度要求，包括稱(chēng)量，制備及測(cè)定過(guò)程?？疾旆椒ǎ喝⊥粯悠?，在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如：設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液或?qū)⑾喈?dāng)于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。可接受標(biāo)準(zhǔn)：RSD%≤2.0n≥6第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證精密度中間精密度：在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員、用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度。驗(yàn)證方法：為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。取同一批樣品，采用同一根色譜柱，于不同日期、由不同分析人員、在不同設(shè)備上考察含量結(jié)果?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：RSD%≤2.0n≥4第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證精密度重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室之間由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度。驗(yàn)證方法：法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法或在不同實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行方法轉(zhuǎn)移時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如建立藥典分析方法時(shí)，通過(guò)協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過(guò)程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中，應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：RSD%≤2.0n≥4第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。一般用回收率表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。準(zhǔn)確度是定量測(cè)定的必要條件，因此含量測(cè)定、雜質(zhì)定量測(cè)定均需驗(yàn)證準(zhǔn)確度。驗(yàn)證方法準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。例如：測(cè)定含量的準(zhǔn)確度，按標(biāo)示量的80%，100%和120%配制三個(gè)濃度的溶液，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)測(cè)定結(jié)果與配制濃度計(jì)算出平均回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。原料藥含量測(cè)定準(zhǔn)確度驗(yàn)證方法：方法1：用已知純度的對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定方法2：用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證準(zhǔn)確度制劑含量測(cè)定準(zhǔn)確度驗(yàn)證方法：方法1:用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定方法2:如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加人已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定。（加樣回收試驗(yàn)，一般用于中藥）方法3:用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較特別說(shuō)明一下中藥的加樣回收試驗(yàn)：用已知純度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與供試品中含有量之差，除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。在加樣回收試驗(yàn)中須注意對(duì)照品的加入量與供試品中被測(cè)成分含有量之各必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對(duì)照品的量要適當(dāng)，過(guò)小則引起較大的相對(duì)誤差，過(guò)大則干擾成分相對(duì)減少，真實(shí)性差。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證準(zhǔn)確度加樣回收計(jì)算公式第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證準(zhǔn)確度數(shù)據(jù)要求：在規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度（100%）的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度（80%、100%、120%），每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1∶1左右。應(yīng)報(bào)告供試品的取樣量、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測(cè)定結(jié)果和回收率（%）計(jì)算值，以及回收率（%）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。可接受標(biāo)準(zhǔn)：回收率（%）平均值在98.0%~102.0%之間RSD%≤2.0n≥9（或n≥6）濃度與回收率關(guān)系-美國(guó)官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)（AOAC）.gif第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證范圍范圍系指能夠達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：至少標(biāo)示量（100%溶液）的80%~120%不需另做測(cè)試，寫(xiě)出結(jié)論。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證耐用性耐用性系指測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開(kāi)始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說(shuō)明小的變動(dòng)能否符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法有效。如果通過(guò)耐用性研究發(fā)現(xiàn)分析方法對(duì)某個(gè)或某些測(cè)試條件敏感或要求苛刻，則建議在方法中予以寫(xiě)明。方法耐用性影響因素：典型影響耐用性的變動(dòng)因素：1、被測(cè)溶液的穩(wěn)定性；2、樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等（前面已講過(guò)）；液相色譜法（HPLC)中的典型影響耐用性的變動(dòng)因素：1、流動(dòng)相的組成；2、流動(dòng)相的pH值；3、不同品牌或不同批號(hào)的同類(lèi)型色譜柱；4、柱溫；5、流速；6、其他第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證耐用性HPLC含量方法耐用性考慮因素及變化范圍示例：流動(dòng)相的組成：有機(jī)相的±5%，例如方法規(guī)定流動(dòng)相緩沖溶液與甲醇的比例為45∶55,那么允許使用40∶60至50∶50范圍的比例；流動(dòng)相的pH值：±0.5,如果巳知pH值為關(guān)鍵影響因素，變化范圍會(huì)更?。ā?.2）；色譜柱：3種不同填料的色譜柱柱溫：±5℃檢測(cè)波長(zhǎng)：±5nm流速：±20%一般對(duì)照及樣品各一個(gè)，每個(gè)進(jìn)2針；可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證耐用性溶液穩(wěn)定性研究：溶液的穩(wěn)定性研究用來(lái)證明根據(jù)相應(yīng)方法制備的樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在規(guī)定的儲(chǔ)存條件下在一定時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。如果方法中沒(méi)有規(guī)定有效期，樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液需進(jìn)行穩(wěn)定性研究。樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液依據(jù)方法進(jìn)行配制和分析。在室溫或其他條件下（如冰箱2?8℃)儲(chǔ)存適當(dāng)?shù)臅r(shí)間。每個(gè)間隔點(diǎn)，用新鮮配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液做對(duì)照，測(cè)定儲(chǔ)存的樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液。測(cè)定結(jié)果與初始結(jié)果進(jìn)行比較，符合接受標(biāo)準(zhǔn)便可確認(rèn)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液在規(guī)定的儲(chǔ)存條件下在規(guī)定儲(chǔ)存時(shí)間是穩(wěn)定的。方法：標(biāo)準(zhǔn)品溶液穩(wěn)定性考察：如上過(guò)程即可第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證耐用性樣品溶液穩(wěn)定性考察：取供試品溶液，分別在0h、2h、4h、6h、8h、12h、16h、18h、24h進(jìn)樣測(cè)定峰面積或峰高，計(jì)算RSD%值，要求RSD%≤2.0；注意事項(xiàng)：樣品溶液穩(wěn)定性考察時(shí)間要足夠長(zhǎng)，如測(cè)定三七總皂苷進(jìn)樣一針約需1.5小時(shí)，若溶液穩(wěn)定性考察8小時(shí)，則配制的樣品第7針數(shù)據(jù)即為無(wú)效數(shù)據(jù)。有些樣品，如在4小時(shí)內(nèi)峰面積發(fā)生較大變化，則樣品需在避光或低溫下測(cè)定（需考察）；若在避光或低溫下8小時(shí)至少4小時(shí)穩(wěn)定，則需在擬定的標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下注明條件；若在避光或低溫下4小時(shí)內(nèi)仍不穩(wěn)定，則需在擬定的標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下注明配制后立即測(cè)定或臨用新制。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證含量測(cè)定及限度的制定含量測(cè)定要求：（l）應(yīng)首選處方中的君藥（主藥）、貴重藥、毒性藥制訂含量測(cè)定項(xiàng)目。如有困難時(shí)則可選處方中其他藥味的已知成份或具備能反映內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)成分建立含量測(cè)定。如因成品測(cè)定干擾較大并確證干擾無(wú)法排除而難以測(cè)定的，可測(cè)定與其化學(xué)結(jié)構(gòu)母核相似，分子量相近，總類(lèi)成份的含量或暫將浸出物測(cè)定作為質(zhì)量控制項(xiàng)目，但必須具有針對(duì)性和控制質(zhì)量的意義。

（2）含量測(cè)定方法可參考有關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或有關(guān)文獻(xiàn)，也可自行研究后建立，但均應(yīng)作方法學(xué)考察試驗(yàn)。

（3）含量限（幅）度指標(biāo)，應(yīng)根據(jù)實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)（臨床用樣品至少有三批、6個(gè)數(shù)據(jù)，申報(bào)生產(chǎn)用樣品至少有10批、20個(gè)數(shù)據(jù)）制訂。含量限度一般規(guī)定低限，或按照其標(biāo)示量制訂含量測(cè)定用的百分限（幅）度。毒性成分的含量必須規(guī)定幅度。

（4）含量限度低于萬(wàn)分之一者，應(yīng)增加另一個(gè)含量測(cè)定指標(biāo)或浸出物測(cè)定。

（5）在建立化學(xué)成分的含量測(cè)定有困難時(shí)，可考慮建立生物測(cè)定等其它方法。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證含量測(cè)定及限度的制定限度的制定：各批次樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)比較接近，則取其平均值下調(diào)15%；各批次樣品檢測(cè)數(shù)據(jù)相差較大，則取80%的數(shù)據(jù)為低限；80%的數(shù)據(jù)為20個(gè)數(shù)據(jù)中，最后4個(gè)較低數(shù)據(jù)不要，倒數(shù)第5個(gè)數(shù)據(jù)為限度（該方法一般用于藥村或穩(wěn)定性不好的制劑。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證含量測(cè)定及限度的制定另外說(shuō)明：做標(biāo)準(zhǔn)時(shí)藥材檢測(cè)及樣品含量限度的復(fù)核：投料藥材均需留樣檢測(cè)，10批樣品需有10批藥材數(shù)據(jù)，藥材檢測(cè)后計(jì)算轉(zhuǎn)移率。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證原則：原藥材直接粉碎投料的制劑：轉(zhuǎn)移率應(yīng)大于80%；（制劑10%、檢驗(yàn)10%損失）原藥材經(jīng)一步提取的制劑：轉(zhuǎn)移率應(yīng)大于60%~70%；原藥材經(jīng)多步提取的制劑：轉(zhuǎn)移率應(yīng)大于50%~60%；如復(fù)方丹參片中丹參酮ⅡA的轉(zhuǎn)移率為22%也允許。方法確認(rèn)適用范圍適用于：物料和產(chǎn)品中不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法以及藥典方法和其他已驗(yàn)證的法定標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)方法確認(rèn)來(lái)證明方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性。不適用于：實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試操作步驟不需要進(jìn)行方法確認(rèn)，例如（包括但不限于）干燥失重、熾灼殘?jiān)?、各種濕法化學(xué)步驟如酸值和簡(jiǎn)單的儀器方法如pH計(jì)，除非有特殊要求。確認(rèn)方式通常采用以下兩種方式：方式一：由兩名檢驗(yàn)人員分別獨(dú)立對(duì)同一批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)（如可能，使用不同的儀器），比較兩人的檢測(cè)結(jié)果來(lái)證明方法在本實(shí)驗(yàn)室（人員、分析儀器、試劑等）的適用性。方式二：根據(jù)驗(yàn)證目的和評(píng)估結(jié)果選擇相關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行確認(rèn)，如下表：第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法確認(rèn)檢驗(yàn)項(xiàng)目確認(rèn)內(nèi)容示例（僅供參考）第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法確認(rèn)方法轉(zhuǎn)移是在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行，通過(guò)比較轉(zhuǎn)出方和接受方兩實(shí)驗(yàn)室的分析結(jié)果，以確認(rèn)分析方法在接受方實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性。方法轉(zhuǎn)移方案為保證方法轉(zhuǎn)移的順利實(shí)施，在雙方充分溝通的基礎(chǔ)上，確定方法轉(zhuǎn)移方案。方法轉(zhuǎn)移方案應(yīng)對(duì)以下內(nèi)容作出明確規(guī)定，并經(jīng)雙方審核、批準(zhǔn)。方法轉(zhuǎn)移的目的；待轉(zhuǎn)移的檢驗(yàn)方法；物料：試驗(yàn)樣品（包括：批號(hào)、劑量、產(chǎn)品號(hào)、儲(chǔ)存條件）和標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)、儲(chǔ)存條件、含量及有效期等）；試驗(yàn)樣品應(yīng)為同批有代表性的樣品，標(biāo)準(zhǔn)品最好為同來(lái)源同批次。樣品和標(biāo)準(zhǔn)品在運(yùn)輸過(guò)程中要符合其規(guī)定的儲(chǔ)存條件；接受標(biāo)準(zhǔn)；異常數(shù)據(jù)的調(diào)查；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)估；雙方的職責(zé)。第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法轉(zhuǎn)移方法轉(zhuǎn)移的批次數(shù)（僅供參考）：輔料、中間產(chǎn)物、包材、原料和成品（鑒別實(shí)驗(yàn)和其它簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)）：1批原料和成品（除鑒別實(shí)驗(yàn)和其它簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)）：2批（條件允許3批）方案的實(shí)施：雙方均應(yīng)在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成樣品的檢驗(yàn)，以減少因檢驗(yàn)雙方實(shí)驗(yàn)間隔時(shí)間過(guò)長(zhǎng)帶來(lái)的差異。方法轉(zhuǎn)移報(bào)告：工作完成后，應(yīng)按規(guī)定的模板出具報(bào)告，并經(jīng)雙方審核和批準(zhǔn)。報(bào)告中必須明確的寫(xiě)出結(jié)果和結(jié)論，包括評(píng)價(jià)和建議。方法驗(yàn)證、方法確認(rèn)和方法轉(zhuǎn)移的文件管理內(nèi)容：略第一部分：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證方法轉(zhuǎn)移1、新的或是未做的藥品標(biāo)準(zhǔn)第一次操作時(shí)的注意事項(xiàng)：先查一下方法學(xué)研究材料或文獻(xiàn)資料等，了解一下操作的具體細(xì)節(jié)。經(jīng)驗(yàn)：液相色譜法等度操作，先長(zhǎng)柱后根據(jù)情況采用短柱、高效柱或?qū)ιV條件做以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整以達(dá)到系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)條件；梯度操作，方法未指明則用長(zhǎng)柱且需采用不同填料的長(zhǎng)柱進(jìn)行測(cè)試（即使第一根柱符合條件）。有關(guān)物質(zhì)或限度檢查需注意檢測(cè)器采樣頻率的合理設(shè)置，過(guò)大會(huì)造成峰丟失現(xiàn)象或準(zhǔn)確性的問(wèn)題，過(guò)小會(huì)造成基線噪聲的增大。容量法要搞清楚原理，關(guān)鍵操作點(diǎn)，如與時(shí)間相關(guān)則需注意操作順序及反應(yīng)時(shí)間，特別是在生化藥方面尤其重要；要養(yǎng)成先加樣、先反應(yīng)、先檢測(cè)的習(xí)慣。2、注意方法的正確性：不管是藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)還是藥典標(biāo)準(zhǔn)都是人制定的，在方法設(shè)計(jì)時(shí)都可能有考慮不到或疏忽的地方，所以我們按標(biāo)準(zhǔn)操作時(shí)也要仔細(xì)研究標(biāo)準(zhǔn)的正確性，及早發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)做以修訂、提高。如：血塞通及三七總皂苷原標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的問(wèn)題。如：藥典中刺五加藥材標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)樣量的問(wèn)題：100%強(qiáng)溶劑造成色譜峰過(guò)早洗脫，導(dǎo)致峰變形；解決辦法：減少進(jìn)樣量或降低溶劑強(qiáng)度。舒血寧注射液銀杏內(nèi)酯含量檢測(cè)問(wèn)題：溶劑與流動(dòng)相極性差異太大。第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)3、容量器具的校準(zhǔn)、使用問(wèn)題：常用的量瓶、胖肚移液管、刻度吸管、滴定管等均需校準(zhǔn)，因?yàn)楝F(xiàn)市場(chǎng)假貨太多，質(zhì)量參差不齊，有的誤差極大，即使是真貨也要做校正，以減少誤差的來(lái)源。另外標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定精密量取最好用胖肚移液管，盡量不要用刻度吸管，因?yàn)樵什畈灰粯?，胖肚移液管的允差?huì)更小。注意量瓶及移液管的正確使用。容量瓶的正確使用方法和步驟.doc移液管的正確使用方法和步驟.doc4、液相樣品針筒式濾器使用：采用不同材質(zhì)的針筒濾器需驗(yàn)證是否有較大的吸附性，如最常用的尼龍膜N66可耐受大多數(shù)有機(jī)溶劑和堿性溶液，但是對(duì)Pr具有較大的吸附性，若要濾Pr類(lèi)樣品可用混合纖維素膜(MCE)；醋酸纖維素和再生纖維素濾膜對(duì)多環(huán)芳烴具有較低的吸附性；一般來(lái)說(shuō)濾膜對(duì)多環(huán)芳烴的回收率能達(dá)到80%左右就不錯(cuò)了，所以在有條件的情況下我們應(yīng)當(dāng)針對(duì)不同樣品做一下回收率，以驗(yàn)證濾膜是否適合該樣品；平時(shí)使用時(shí)需棄去初濾液取續(xù)濾液進(jìn)樣分析；若吸附性較大需采用其它方法處理（如離心等）。第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)5、對(duì)照品濃度與樣品濃度應(yīng)相匹配：含量測(cè)定采用單點(diǎn)外標(biāo)法時(shí)，對(duì)照品的濃度與供試品溶液的濃度要接近，這樣才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，因?yàn)橹本€方程可能不過(guò)原點(diǎn)，有一定的截距，另外樣品濃度可能會(huì)超出或低于線性范圍，這樣就會(huì)造成較大的誤差。含量測(cè)定采用外標(biāo)兩點(diǎn)法或外標(biāo)多點(diǎn)校正曲線法時(shí)，供試品溶液濃度要落入曲線內(nèi)，另外，若使用ELSD、CAD等這些非線性響應(yīng)的檢測(cè)器，數(shù)據(jù)需進(jìn)行擬合，一定要使擬合后的供試品落入到對(duì)照品的兩點(diǎn)內(nèi)。6、水與甲醇、乙腈、DMA、DMF等有機(jī)溶劑混合問(wèn)題：在配制混合流動(dòng)相或是供試品溶液制備定容過(guò)程中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)水與MeOH、ACN、DMA、DMF等有機(jī)溶劑混合會(huì)發(fā)生明顯的放熱或吸熱過(guò)程，從而導(dǎo)致體積會(huì)發(fā)生變化，原因是由于水分子氫鍵破壞或重新形成而導(dǎo)致產(chǎn)生熵變的過(guò)程。水與MeOH、DMA、DMF混合會(huì)放出大量的熱，而與ACN會(huì)吸收熱量。所以我們配制流動(dòng)相或樣品時(shí)要多加注意，流動(dòng)相分別量取一定體積配制，配后要放冷至室溫使用；供試品溶液先加入適量有機(jī)溶劑，待冷至室溫時(shí)再定容。如：舒血寧總黃酮醇苷含量測(cè)定。第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)7、血注或三七總皂苷含量測(cè)定：目標(biāo)成分洗脫出后不宜立即用100%乙腈清洗強(qiáng)保留組份，要用梯度的方法升到90%清洗，以避免強(qiáng)保留成分在高濃度乙腈中析出，造成堵塞儀器管路或破壞色譜柱。8、基線漂移的理解：HPLC：色譜柱未平衡好、柱溫未穩(wěn)定、流動(dòng)相變化等，梯度洗脫正常；GC：程序升溫，柱流失增加引起。9、頂空法測(cè)定乙醇?xì)埩魡?wèn)題：注意管路系統(tǒng)的吸附性，造成重復(fù)性差，需經(jīng)常熱清洗。10、分光光度法測(cè)定血塞通總皂苷的注意事項(xiàng)：由于皂苷顯色反應(yīng)產(chǎn)生的顏色受溶液濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間等因素的影響，所以須注意反應(yīng)條件的控制。精密加入5%的香草醛-冰乙酸溶液及高氯酸溶液要迅速；保溫結(jié)束后，要快速加入5ml冰乙酸（也可加一個(gè)測(cè)一個(gè)）；測(cè)量吸收度要快，盡量在10分鐘內(nèi)結(jié)束。該反應(yīng)液會(huì)隨時(shí)間出現(xiàn)吸收值下降的現(xiàn)象：20min下降0.25第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)11、天平稱(chēng)量問(wèn)題：簡(jiǎn)單的操作流程及注意事項(xiàng)一、稱(chēng)量前的電子天平操作

1、用前關(guān)門(mén)、關(guān)閉空調(diào)；

2、調(diào)整天平的水平；

3、天平的放置不要放在下列位置：陽(yáng)光直曬、潮濕、不平穩(wěn)的地方

二、稱(chēng)量時(shí)電子天平的操作

1、稱(chēng)量容器的選擇：（1）避免使用過(guò)大的容器稱(chēng)重，以免浮力導(dǎo)致誤差；

（2）避免使用塑料及磁性物質(zhì)作容器，以免靜電引力及電磁感應(yīng)導(dǎo)致誤差；

（3）如藥品吸水易潮(如：NaOH)，不可用稱(chēng)藥紙稱(chēng)重可用小燒杯承裝；

2、稱(chēng)重時(shí)的注意事項(xiàng)

（1）采用與稱(chēng)量精確度相適應(yīng)的天平。（2）稱(chēng)重時(shí)需將待測(cè)物及其承裝容器與電子天平維持在相同的溫度，不要稱(chēng)量直接從烘箱或冷藏箱內(nèi)拿出的樣品

；特別是稱(chēng)量對(duì)照品：如第二天稱(chēng)量，今天就把量瓶放到天平室，使量瓶的溫度與濕度條件與天平室保持一致。

第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)（3）稱(chēng)重時(shí)裝有待測(cè)物的承裝容器，不要用手直接拿，以免手上的汗，油及

其它微小之雜物，影響稱(chēng)重值；可采用戴手套，或用夾子及紙條代替。

（4）稱(chēng)重時(shí)要將裝有待測(cè)物的承裝容器放置在稱(chēng)盤(pán)中間，避免造成誤差。

（5）精稱(chēng)時(shí)最好先用一般電子天平粗稱(chēng)，再移至精密天平精稱(chēng)，以避免超重對(duì)天平的影響。（6）精稱(chēng)時(shí)，需將精密天平的門(mén)關(guān)閉，避免風(fēng)的影響。（7）精稱(chēng)時(shí)，不可靠、按在放精密天平的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，避免振動(dòng)天平造成誤差。（8）稱(chēng)量對(duì)照品或較少量樣品時(shí)，最好稱(chēng)前校正一下天平（內(nèi)校）；不要將對(duì)照品稱(chēng)量到稱(chēng)量紙上再往量瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)移，應(yīng)當(dāng)直接稱(chēng)至量瓶?jī)?nèi)。（9）注意所稱(chēng)樣品是否易受靜電影響，有靜電則消除。當(dāng)空氣濕度低于30%至40%時(shí)，避免使用由塑料材質(zhì)的稱(chēng)量容器。這樣的環(huán)境會(huì)增加靜電電荷引起的風(fēng)險(xiǎn)。三、稱(chēng)重完畢的電子天平的維護(hù)

1

需用干的布將稱(chēng)重盤(pán)擦干凈（關(guān)閉時(shí)）。

2

用軟毛刷將天平及天平周?chē)⒏蓛簟?/p>

3

定期校正天平。

第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)天平最小稱(chēng)樣量問(wèn)題：我國(guó)藥典規(guī)定：“精密稱(chēng)定”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一；用十萬(wàn)分之一（可讀0.01mg）的天平稱(chēng)取10mg樣品，可不可以保證藥典規(guī)定的千分之一？如何保證？需了解天平最小稱(chēng)樣量的概念！如何確定天平的最小稱(chēng)樣量呢？公式：第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)最小稱(chēng)樣量（mg）擴(kuò)展因子（K）：100次稱(chēng)量結(jié)果中選定允許誤差范圍內(nèi)的稱(chēng)量次數(shù)168.27%295.54%399.73%相對(duì)誤差:0.1%重復(fù)性誤差（SD）：最小稱(chēng)量值的標(biāo)準(zhǔn)砝碼放在天平上，稱(chēng)量十次，計(jì)算十次讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)偏差（mg）天平最小稱(chēng)樣量問(wèn)題：第二部分：檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)天平最小稱(chēng)樣量問(wèn)題：USPweightsandbalances.pdf電子天平準(zhǔn)確