DB12T 465-2012 預(yù)防性健康檢查 糞便中沙門氏菌、志賀氏菌的檢測(cè)方法　　

DB12DB12/T465—2012預(yù)防性健康檢查糞便中沙門氏菌、志賀氏菌的檢測(cè)方法DetectionmethodsofSalmonellaandShigellawhoneedtopasspreventivehealthcheck天津市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布III本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請(qǐng)注意，聲明符合本文件時(shí)，可能涉及到6.1.2條采便管與微生物采樣增菌培本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性、有效性1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了預(yù)防性健康檢查糞便中沙門氏菌、志賀氏菌的檢測(cè)方法的術(shù)語(yǔ)無(wú)任何臨床表現(xiàn)，從糞便中分離到沙門氏菌（傷寒和副傷寒菌）或志賀氏3.1冰箱：4℃~8℃。）：24.5克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）見附錄A中糞便A.5。）：3!36℃±1℃36℃±1℃!36℃±1℃!18h～24h↓4），底層/斜面氣體硫化氫動(dòng)力吲哚尿酶賴氨酸硫化氫-++--+++-/++----+++--++A/A+++--++++++-++A/A+++---++++-+-+A/A+-+/-+-+/--/+5自選擇性分離平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）或三糖鐵（TSI）瓊脂及動(dòng)力-吲哚-尿素培養(yǎng)基（MIU）及賴氨酸鐵瓊脂（LIA）。每份標(biāo)本應(yīng)多挑幾個(gè)菌落，底層/斜面氣體硫化氫動(dòng)力吲哚尿酶賴氨酸硫化氫-?---/+---寒和丙型副傷寒菌）具有Vi抗原應(yīng)與Vi診斷血清進(jìn)行血清凝集試驗(yàn)。2a--4b-7cVi9d-Via)挑取KIA(TSI)疑似志賀氏菌的培養(yǎng)物，先用志賀氏菌四種多價(jià)血清做玻片凝集試驗(yàn)。如呈現(xiàn)6e)若四種多價(jià)血清凝集，而不與相應(yīng)的分型血清凝集，且菌落粗糙，可用宋內(nèi)Ⅱ相（粗造型）血6Ⅰ+--Ⅰ++-Ⅰ--+Ⅱ+--Ⅱ--+Ⅱ+-+Ⅲ-++Ⅲ++-Ⅲ-+-Ⅳ+--Ⅳ++-Ⅳ--+Ⅴ+--Ⅴ--+6Ⅵ(+)--/--+/+--注表示凝集表示不凝集表示個(gè)別菌株系陰性反應(yīng)。6+--++-+-+-++-+---+---注表示凝集表示不凝集。7菌(傷寒及副傷寒菌)的鑒定見表8。動(dòng)力葡萄糖乳糖蔗糖硫化氫靛基質(zhì)尿素紅衛(wèi)茅醇木膠糖++--+/---+--+++-+⊕---/+--+--+--++⊕--+--+-+/-+++++⊕--+--+-+++++根據(jù)6.4.1的初步判斷結(jié)果，從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙海褂蒙b定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行沙門氏菌(傷寒及副傷寒菌)鑒定。----++--+-++d 8可根據(jù)6.4.2的初步判斷結(jié)果，從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)綜合上述生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果判定菌型，并報(bào)告糞便標(biāo)本中檢出或未檢出沙門氏菌(傷寒及副傷寒菌)或志賀氏菌。9培養(yǎng)基和試劑蛋白胨乳糖4.0g亞硒酸氫鈉4.0g蛋白胨牛肉浸出粉三號(hào)膽鹽3.5g硫代硫酸鈉pH7.0±0.1牛肉膏水楊素2.0g氯化鈉5.0gpH7.5±0.1將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液;將瓊脂加入于600mL蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi),調(diào)節(jié)pH。再加入指示劑,并與瓊脂液合并,待冷至50℃~55℃傾注平皿。L-賴氨酸蔗糖7.5g去氧膽酸鈉2.5g檸檬酸鐵銨0.8g硫代硫酸鈉6.8g氯化鈉注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加A.5克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）g3.0g3.0ggg5.0g0.5g硫代硫酸鈉0.5ggg將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆?。硫代硫酸鈉0.2gpH6.8±0.2氯化鈉5.0g氯化鈉作為對(duì)照培養(yǎng)基,分裝試管備用。注：氰化鉀是劇毒藥,使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán),氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)菌生長(zhǎng)，因而造成假陽(yáng)性反應(yīng)，試驗(yàn)時(shí)蛋白胨酵母浸膏3.0gpH6.7±0.10.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液注：蔗糖不純,加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。牛肉膏0.3g氯化鈉0.5gg2.0g0.6g0.4g2.0g3.0g0.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液常見沙門氏菌抗原見表B.1A群S.paratyphiAaS.kisanganiaaS.abortusequi4,12-S.paratyphiBbbS.abonybbl,wS.bury4,12,[27]cS.stanleydS.saintpaulS.readingS.chesterS.derbyS.agona4,12-S.california4,12S.kingstonS.budapest-S.typhimuriumiS.Lagosil,v基爾瓦沙門氏菌ⅡS.kilwaⅡ4,12l,wS.heidelbergrS.indianazS.stanleyvilleS.ituri群S.osloaS.edinburgb布隆方丹沙門氏菌ⅡbS.paratyphiCcS.choleraesuiscS.typhisuiscS.lomitaS.braenderupS.rissen-S.montevideo-S.oranieburgm,tS.oritameriniS.thompsonkS.concordl,vS.irumul,vS.mkambal,vS.bonnl,vS.potsdaml,vS.gdanskl,vrS.infantisrS.papuanaryS.hartfordyS.mikawasimayS.mbandakaS.tennesseeS.braenderupS.jerusaleml,w群S.narashinoaS.nagoyabS.gatunibS.muenchendS.manhattandS.newportS.kottbusS.tshiongweS.lindenburgiS.takoradiiS.bonariensisiS.litchfieldl,vS.bovismorbificansr,[i]S.chailey群S.bardo8S.emek-S.kentuckyiD群S.sendaiaS.typhid-S.tarshynedS.eastbourneS.israel腸炎沙門氏菌S.enteritidisS.blegdam-SalmonellaⅡS.dublin-iS.panamal,vS.goettingenl,vS.javianaS.gallinarum-pullorum--群S.okefokocS.vejleS.muensterS.newlandsS.meleagridisl,wS.westhampton-S.amoundernessikl,wS.nchangal,vS.sinstorfl,vS.londonl,vS.givel,vS.ruzizil,vS.ugandaS.ughellirrS.clerkenwellzl,wS.lexington群S.saoS.calabarl,wS.senftenberg-S.stratfordiS.ta