T-GXAS 755-2024 海洋生物體 類固醇激素的測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

GXASMarineOrganisms—DeterminationofstI 2 2 3 8 8 9 9 本文件參照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1海洋生物體類固醇激素的測(cè)定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法警示：使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)測(cè)定下限為2.0μg/kg～7.6μg/kHJ442.5近岸海域環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范第四極桿質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）檢測(cè)樣品中的類固醇激素化合物，按多反應(yīng)監(jiān)5.1當(dāng)樣品中存在基質(zhì)干擾時(shí)，可通過(guò)優(yōu)化色譜條件、稀釋樣品、減少進(jìn)樣體積以及對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處5.2當(dāng)樣品中存在同分異構(gòu)體干擾測(cè)定時(shí)，可通過(guò)改變色譜條件提高分離度或選擇不同的二級(jí)質(zhì)譜子），2）：說(shuō)明，并在有效期內(nèi)使用。使用時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫7.2高效液相色譜—三重四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧電離源（ESI具備流動(dòng)相梯度洗脫和質(zhì)譜多反7.3色譜柱：C18反相高效液相色譜柱。1.7μm×50mm×2.1mm（內(nèi)徑）或其他等效色譜柱。7.4固相萃取裝置：自動(dòng)或手動(dòng)，流7.5濃縮裝置：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置或K-D濃縮器7.10低溫離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000r/min或以上，溫度范圍-10℃~30℃。3涂）特征可增選魚類、甲殼類和藻類。樣品采集后，用現(xiàn)場(chǎng)海水沖洗干凈，應(yīng)及時(shí)冰凍保存（-10℃~-20℃)。凍干燥。把冷凍干燥后的樣品用玻璃棒輕輕搗碎，一部分用稱取冷凍干燥后的樣品2.0g（精確到±0.01g），置于50mL離心管（7.11）中，加入2mL超純水，在渦旋混合器（7.13）上渦旋1min后，準(zhǔn)確加入10mL乙酸乙酯/甲醇混合液(6.6)，渦旋1min，置于超聲波提取儀（7.10）上超聲20min，加入2.0g無(wú)水硫酸鎂（6.9）和1.0g氯化鈉（6.13），渦旋,快速混勻，置于低溫離心機(jī)（7.10以5000r/min離心5min。置于低溫離心機(jī)（7.10），以5000r/min離心5min。準(zhǔn)確移取上清液5mL經(jīng)過(guò)佛羅里土SPE小柱（7.6）9.1儀器調(diào)試9.1.1液相色譜參考條件表1液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫程序（雄激素、孕激素和流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)05555554流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)013489559.1.2質(zhì)譜參考條件9.1.2.5霧化氣氣壓：1.72×105雄激素孕激素97.1*5孕激素97.1*糖皮質(zhì)激素雌激素注：帶*的為定量離子，對(duì)于不同質(zhì)譜儀器，參數(shù)可9.1.3質(zhì)譜儀的調(diào)諧9.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立），），9.2.2在儀器最佳工作條件下，按照濃度從低到高的順序上機(jī)測(cè)定，以目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度(μg/L)為橫坐標(biāo)，以其對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值的比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，建立9.3標(biāo)準(zhǔn)參考譜圖679.4試樣測(cè)定9.5空白試驗(yàn)在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間偏差在±2.5％之內(nèi)；每種化合物的質(zhì)譜定性離子至少應(yīng)包括一個(gè)母離子和兩個(gè)子離子，且樣品中各組分定性離子的相對(duì)豐度（Ksam）與濃度接近的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度（Kstd）進(jìn)行比較，偏差不超過(guò)表4規(guī)采用內(nèi)標(biāo)法定量，根據(jù)平均相對(duì)響應(yīng)因子計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)系列第i點(diǎn)目標(biāo)化合物的相對(duì)響應(yīng)因子RRF，Ai——標(biāo)準(zhǔn)系列中第i點(diǎn)目標(biāo)化合物的峰面積（或峰高ρis——標(biāo)準(zhǔn)系列中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，μg/L；ρi——標(biāo)準(zhǔn)系列中第i點(diǎn)目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，μg/L。8EQ\*jc3\*hps24\o\al(\s\up2(-),R)EQ\*jc3\*hps24\o\al(\s\up2(-),R)EQ\*jc3\*hps24\o\al(\s\up2(-),R)EQ\*jc3\*hps24\o\al(\s\up2(-),R)ρis——試樣中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，μg/L；EQ\*jc3\*hps24\o\al(\s\up2(-),R)EQ\*jc3\*hps24\o\al(\s\up2(-),R)Ws——樣品中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，單位為微克每千克(μg/kgρx——試樣中目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L）；每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品/批）至9——所使用的標(biāo)準(zhǔn)（包括發(fā)布或出版年號(hào)——所使用的方法（如果標(biāo)準(zhǔn)中包括幾個(gè)方法12345678