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王大本-名詞解釋-副本
,第;-章:糖類(lèi)糖類(lèi)
.糖類(lèi)是多羥醛、多羥酮或其衍生物,或水解時(shí)能產(chǎn)生這些化合物的物質(zhì)
.單糖(monosaccharide)
.單糖是不能被水解成更小分子的糖類(lèi),也稱(chēng)簡(jiǎn)單糖,如葡萄糖、果糖和核糖等。
.寡糖(oligosaccharide)
?寡糖包括的類(lèi)別很多,雙糖或稱(chēng)二糖,水解時(shí)生成2分子單糖,如麥芽糖、蔗糖
等;三糖,水解時(shí)產(chǎn)生3分子單糖,如棉子糖;以及四糖,五糖和六糖等。
?多糖(polysaccharide)
?多糖是水解時(shí)產(chǎn)生20個(gè)以上單糖分子的糖類(lèi)。多糖屬于非還原糖(因?yàn)橐粋€(gè)很
大的多糖分子只有一個(gè)還原末端),不呈現(xiàn)變旋現(xiàn)象,無(wú)甜味,一般不能結(jié)晶。
同多糖(homopolysaccharide)
?水解時(shí)只產(chǎn)生一種單糖或單糖衍生物,如糖原、淀粉、殼多糖等。
雜多糖(heteropolysaccharide)
.水解時(shí)產(chǎn)生一種以上的單糖或/和單糖衍生物,如透明質(zhì)酸、半纖維素等。
.復(fù)合糖或糖復(fù)合物(glycoconjugate)
*糖類(lèi)與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等生物分子形成的共價(jià)結(jié)合物如糖蛋白、蛋白聚糖和糖脂
.等,總稱(chēng)復(fù)合糖或糖復(fù)合物(glycoconjugateI
同分異構(gòu)卻K異構(gòu)(isomerism)
是指存在兩個(gè)或多個(gè)具有相同數(shù)目和種類(lèi)的原子并因而即具有相同相對(duì)分子質(zhì)量
?的化合物的現(xiàn)象。同分異構(gòu)有相同的組成,故具有相同的分子式。
結(jié)構(gòu)異構(gòu)(structuralisomerism)
這是由于分子中原子連接的次序不同造成的,包括碳架異構(gòu)體、位置異構(gòu)體和功
能異構(gòu)體。
構(gòu)強(qiáng)(constitution)
原子連接在一起的次序叫做化合物的構(gòu)造
立標(biāo)異構(gòu)(stereoisomerism)
立體異構(gòu)體具有相同的結(jié)構(gòu)式,但原子在空間的分布不同。
■
構(gòu)型(configuration)
原子在空間的相對(duì)分布或排列稱(chēng)為分子的構(gòu)型幾何異構(gòu)也稱(chēng)順?lè)串悩?gòu)(cis-trans
isomerism)
這是由于分子中雙鍵或環(huán)的存在或其他原因限制原子間的自由旋轉(zhuǎn)引起的。
旋光異構(gòu)或光學(xué)異構(gòu)(opticalisomerism)
旋光異構(gòu)是由于分子存在手性造成的,常見(jiàn)的是分子內(nèi)存在不對(duì)稱(chēng)碳原子。
構(gòu)象(conformation)
由于單健基本自由旋轉(zhuǎn)以及鍵角有一定的柔性,一種具有相同結(jié)構(gòu)和構(gòu)型的分子
在空間里可采取多種形態(tài),分子所采取的特定形態(tài)稱(chēng)為構(gòu)象
旋光性
■
旋光物質(zhì)使平面偏振光的偏旅面發(fā)生旋轉(zhuǎn)的能力稱(chēng)旋光性、光學(xué)活性或旋光度。
不對(duì)稱(chēng)碳原子(asymmetriccarbonatom)
是指與四個(gè)不同的原子或原子基團(tuán)共價(jià)連接并因而矢去對(duì)稱(chēng)性的四面體碳,也稱(chēng)手性碳
原子、不對(duì)稱(chēng)中心或手性中心,常用C*表示。
對(duì)映體(enanthiomer)
一個(gè)不對(duì)稱(chēng)碳原子的取代基在空間里的兩種取向是物體與鏡像的關(guān)系,并且兩者不能重
疊,它們被稱(chēng)為對(duì)映體。
非對(duì)映異構(gòu)體(diasteoisomer)期E對(duì)映體(diastereomer)
任一旋光化合物都只有一個(gè)對(duì)映體,它的其他旋光異構(gòu)體在化學(xué)與物理性質(zhì)方面都與之
不同,這些不是對(duì)映體的旋光異構(gòu)體稱(chēng)為非對(duì)映異構(gòu)體或^對(duì)映體。
差向異構(gòu)體(epimer)
葡萄糖和甘露糖或葡萄糖和半乳糖,兩者之間除一個(gè)手性碳原子的一0H位置不同外,
其余結(jié)構(gòu)完全相同。這種僅一個(gè)手性碳原子的構(gòu)型不同的非對(duì)映異構(gòu)體稱(chēng)為差向異構(gòu)體
變旋(mutarotation)
許多單糖,新配制的溶液會(huì)發(fā)生旋光度的改變,這種現(xiàn)象稱(chēng)變旋。變旋是由于分子立體
結(jié)構(gòu)發(fā)生某種變化的結(jié)果。
異頭物(anomer1異頭碳原子(anomericcarbonatom)或異頭中心
單糖由直鏈結(jié)構(gòu)變成環(huán)狀結(jié)構(gòu)后,陵基碳原子成為新的手性中心,導(dǎo)致C1差向異構(gòu)化,
產(chǎn)生兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體。這種竣基碳上形成的差向異構(gòu)體稱(chēng)異頭物。在環(huán)狀結(jié)構(gòu)中,半
縮醛碳原子也稱(chēng)異頭碳原子或異頭中心
糖豚(osazone)
苯聯(lián)與醛、酮反應(yīng)時(shí),許多還原糖生成含有兩個(gè)苯蹤基的衍生物,稱(chēng)為糖豚。反應(yīng)1摩
爾糖要求3摩爾苯朧.從糖睬的形狀、熔點(diǎn)可鑒別糖的種類(lèi)
糖苗或昔(glycoside\糖昔鍵(glycosidicbond)
環(huán)狀單糖的半縮醛(或半縮酮)羥基與另一化合物發(fā)生縮合形成的縮醛(或縮酮)稱(chēng)為
糖苗或昔。糖昔分子中提供半縮醛羥基的糖部分稱(chēng)糖基,與之縮合的“非糖”部分稱(chēng)糖苗配
基或配基,這兩部分之間的連鍵稱(chēng)糖昔鍵。
脫氧糖(deoxysugar)
是指分子的一個(gè)或多個(gè)羥基被氫原子取代的單糖
氨基糖(aminosugar)
是分子中一個(gè)羥基被氨基取代的單糖,自然界中常見(jiàn)的是C2上的羥基被取代的
2-脫氧糖。
淀粉(starch)
淀粉是植物生長(zhǎng)期間以淀粉粒形式貯存于細(xì)胞中的貯存多糖。它在種子、塊莖和塊根等
器官中含量特別豐富。淀粉不具有還原性,可分為直鏈淀粉和支鏈淀粉兩種
直鏈淀粉(amylose)
遇碘顯紫藍(lán)色;直鏈淀粉是由葡萄糖單位通過(guò)a-1,4連接的線形分子;直鏈淀粉
的二級(jí)結(jié)構(gòu)是左手螺旋支鏈淀粉(amylopectin)
D-葡萄糖通過(guò),4-糖首鍵連接成一條主鏈,在此主鏈上通過(guò)a-1,6-糖昔鍵形成分
支;遇碘顯紫紅色
糊精(dextrin)
淀粉在酸或淀粉酶作用下被逐步降解,生成分子大/.'不一的中間物,統(tǒng)稱(chēng)為糊精
糖原(glycogen)
糖原又稱(chēng)動(dòng)物淀粉,它以顆粒形式存在于動(dòng)物細(xì)胞的胞液內(nèi)。體內(nèi)糖原的主要存在場(chǎng)所
是肝臟和骨骼肌。糖原是人和動(dòng)物餐間以及肌肉劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)易動(dòng)用的葡萄糖貯庫(kù)。
纖維素(cellulose)
纖維素是生物圈里豐富的有機(jī)物質(zhì)。纖維素是植物(包括某些真菌和細(xì)菌)的結(jié)構(gòu)多
糖,是它們的細(xì)胞壁的主要成分。
脂多糖(lipopolysaccharide)
脂多糖是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的特有結(jié)構(gòu)成分,構(gòu)成外膜外表面的主要物質(zhì),并賦予
這類(lèi)細(xì)胞以親水表面。
糖蛋白(glycoprotein)
是一類(lèi)復(fù)合糖或一類(lèi)合蛋白質(zhì),糖鏈作為合蛋白質(zhì)的輔基。糖蛋白中的糖鏈很少
含多于15個(gè)單糖單位的。糖肽鍵(glycopeptidelinkage)
糖蛋白中寡糖鏈的還原端殘基與多肽鏈的氨基酸殘基以多種形式共價(jià)連接,形成的連鍵
稱(chēng)為糖肽犍。糖肽犍主要有兩種類(lèi)型:N-糖肽犍和O-糖肽犍。
分子識(shí)SU(moleculorrecognition)
是指生物分子的選擇性相互作用,例如抗體與抗原間,酶與底物或抑制劑間,激素與受
體間的專(zhuān)一性結(jié)合。分子識(shí)別是通過(guò)兩個(gè)分子各自的結(jié)合部位來(lái)實(shí)現(xiàn)的
受體(receptor)
是指位于細(xì)胞膜上、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中能與來(lái)自胞外的生物活性分子(信號(hào)分子)專(zhuān)一
結(jié)合并將其帶來(lái)的信息傳遞給效應(yīng)器(如離子通道、酶等),從而引起相應(yīng)生物學(xué)效應(yīng)的
生物大分子。
配體(ligand)
被受體識(shí)別并結(jié)合的生物活性分子稱(chēng)為配體,包括激素、神經(jīng)遞質(zhì),細(xì)胞粘著分子等內(nèi)
源性配體和藥物、毒素、抗原和病原體等外源性配體。
凝集素(lectin)
凝集素可定義為一類(lèi)非抗體的蛋白質(zhì)或糖蛋白,它能與糖類(lèi)專(zhuān)一朔E共價(jià)結(jié)合,并具有
凝集細(xì)胞和沉淀聚糖和復(fù)合糖的作用。
糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)曾稱(chēng)粘多糖(mucopolysaccharide),氨
基多糖和酸性多糖
糖胺聚糖屬于雜多糖,為不分支的長(zhǎng)鏈聚合物,由含己糖醛酸(角質(zhì)素除外)和已糖胺成分
的重復(fù)二糖單位構(gòu)成。例如透明質(zhì)酸,硫酸軟骨素,硫酸角質(zhì)素等。
蛋白聚糖(proteoglycan,PG)
是一類(lèi)特殊的糖蛋白,由一條或多條糖胺聚糖和一個(gè)核心蛋白共價(jià)連接而成。蛋白聚糖
除含糖胺聚糖鏈外,尚有一些N-或(和)。-連接的寡糖鏈。與糖蛋白比較,蛋白聚糖中
按重量計(jì)算糖的比例高于蛋白質(zhì)
Molisch(Molisch'stest)
糖經(jīng)濃硫酸脫水產(chǎn)生精醛或糠醛衍生物,后者與a-蔡酚生成紫紅色縮合物,這是鑒定糖
類(lèi)的方法。
Seliwanoff試驗(yàn)(Seliwanoffstest)己酮糖經(jīng)濃鹽酸脫水生成羥甲基糠醛,后者與
間苯二酚作用,生成紅色物質(zhì),這是鑒定已酮糖的方法。
Tollen試驗(yàn)(Tollen'stest)
*糖經(jīng)濃鹽酸脫水生成糠醛,后者與間苯三酚作用生成櫻科缸色物質(zhì),這是鑒定戊
糖的方法。
Bial試驗(yàn)(Bial'stest)
?也稱(chēng)苔黑酚反應(yīng)或地衣酚反應(yīng),戊糖經(jīng)濃鹽酸脫水生成糠醛,后者與甲基間苯二
.酚(即苔黑酚,或稱(chēng)地衣酚)作用,生成綠色物質(zhì),用于戊糖的鑒定和RNA的
.測(cè)定。
肽聚糖(peptidoglycan)
又稱(chēng)黏肽、氨基糖肽或胞壁質(zhì)。它是由N-乙酰葡糖胺(NAG)與N-乙酰胞壁
*酸
*(NAM)組成的多糖鏈為骨干與四肽連接所成的雜多糖。
磷壁酸(teichoicacid)
..是從革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁中提取到的含磷豐富的化合物,有甘油磷壁酸和核糖
.醇磷壁酸兩類(lèi)。
?第二章:脂質(zhì)
.脂質(zhì)(lipid,也譯脂類(lèi)或類(lèi)脂)
?是一類(lèi)低溶于水而高溶于非極性溶劑的生物有機(jī)分子。對(duì)大多數(shù)脂質(zhì)而言,其化
學(xué)本質(zhì)是脂肪酸和醇所形成的酯類(lèi)及其衍生物。
?蠟(wax)
?主要由長(zhǎng)鏈脂肪酸和長(zhǎng)鏈醇或固醇組成。兩親化合物(amphipathic
?compound)
?這些具有極性頭(親水)和非極性尾(親脂)的分子稱(chēng)兩親化合物。極性頭有醇
基、含氮堿和磷酸基等;非極性尾主要是脂肪酸和脂肪胺(鞘氨醇)的炫鏈。
*生物膜(biomembrane)
.細(xì)胞的外周膜(質(zhì)膜),核膜和各種細(xì)胞器的膜總稱(chēng)為生物膜
*活性脂質(zhì)(activelipid)
.活性脂質(zhì)是小量的細(xì)胞成分,但具有專(zhuān)一的重要生物活性。它們包括數(shù)百種類(lèi)固
醇和菇(類(lèi)異戊二烯)
去污齊I」(detergent)
去污劑都是兩親分子,在油水混合物中,疏水部分被吸引到油(或燒類(lèi)),親水
?部分被吸引到水,在油水界面處形成單分子層
乳化作用
由于表面活性劑的作用,使本來(lái)不能互相溶解的兩種液體能夠混到一起的現(xiàn)象稱(chēng)
為乳化現(xiàn)象。
必需脂肪酸(essentialfattyacid)
人體不能合成亞油酸和亞麻酸。但這兩種脂肪酸對(duì)人體功能是必不可少的,但必
須由膳食提供,因此被稱(chēng)為必需脂肪酸
皂化作用(saponification)
三酰H油能在酸、堿或脂酶的作用下水解為脂肪酸和H油。如果在堿溶液中水
解,產(chǎn)物之一是脂肪酸的鹽類(lèi)(如鈉、鉀鹽),俗稱(chēng)皂;油脂的堿水解作用稱(chēng)皂
化作用
皂化值(價(jià))(saponificationvalueornumber)皂化1g油脂所需的KOHmg數(shù)稱(chēng)
為皂化值(價(jià)\皂化值是三酰甘油中脂肪酸平均鏈長(zhǎng)即三酰甘油(TG)平均相對(duì)分
子質(zhì)量的量度
氫化(hydrogenation)
在催化劑如Ni的存在下油脂中的雙鍵與氫發(fā)生加成稱(chēng)氫化
鹵化(halogenation\
不頸口油脂與鹵素中的浸或碘發(fā)生加成而成飽和的鹵化脂,此過(guò)程稱(chēng)鹵化
碘值(價(jià))(iodinevalue)
鹵化反應(yīng)中吸收鹵素的量反映不飽和鍵的多少。通常用碘值(價(jià))來(lái)表示油脂的不飽和
程度。碘值指100g油脂鹵化時(shí)所能吸收碘的克數(shù)。
乙?;?acetylation\乙酰[化]值(價(jià))(acetylationnumber)
含羥脂肪酸(如莫麻油酸)的油脂可與乙酸酊或其他?;瘎┳饔眯纬梢阴;椭蚱渌?/p>
?;椭?。
油脂的羥基化程度一般用乙酰[化]值(價(jià))表示。乙酰值指中和從1g乙?;a(chǎn)物中釋放
的乙酸所需的KOHmg數(shù)
酸敗(rancidity)
天然油脂長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中會(huì)產(chǎn)生難聞的氣味,這種現(xiàn)象稱(chēng)為酸敗。酸敗的原因
主要是油脂的不飽和成分發(fā)生自動(dòng)氧化,產(chǎn)生過(guò)氧化物并進(jìn)而降解成揮發(fā)性醛、酮、
酸的復(fù)雜混合物脂質(zhì)過(guò)氧化作用(peroxidation)
脂質(zhì)的自動(dòng)氧化也稱(chēng)脂質(zhì)過(guò)氧化作用。脂質(zhì)過(guò)氧化一般定義為多不飽和脂肪酸或脂
質(zhì)的氧化變質(zhì)??寡趸瘎?antioxidant)
凡具有還原性而能抑制靶分子自動(dòng)氧化即抑制自由基鏈反應(yīng)的物質(zhì)稱(chēng)為抗氧化劑。
自由基清除劑(freeradicalscavenger)
能與自由基反應(yīng)使之還原成^自由基的抗氧化劑稱(chēng)為自由基清除劑。
磷脂(phospholipid)
磷脂包括甘油磷脂和鞘磷脂兩類(lèi);它們主耍參與細(xì)胞膜系統(tǒng)的組成,少量存在于細(xì)胞的
其他部位。甘油磷脂是第一大類(lèi)膜脂,包括鞘磷脂和鞘糖脂的鞘脂類(lèi)是第二大類(lèi)膜脂
鞘磷脂(sphingomyelin)即鞘氨醇磷脂(phosphosphingolipid)
在高等動(dòng)物的腦髓鞘和紅細(xì)胞膜中特別豐富。鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷酰膽堿(少
數(shù)是磷酰乙醇胺)組成。鞘磷脂是神經(jīng)酰胺的1-位羥基(伯醇基)被磷酰膽堿或磷酰乙
醇胺酯化形成的化合物,例如膽堿鞘磷脂
鞘糖脂(glycosphingolipid)
是以神經(jīng)酰肢為母體的化合物,可與鞘磷脂一起歸入鞘脂類(lèi)。鞘糖脂是神經(jīng)酰胺的1-位
羥基被糖基化形成的糖苗化合物。
中性鞘糖脂、腦首脂(cerebroside)
中性鞘糖脂的糖基不含唾液酸成分。常見(jiàn)的糖基有半學(xué)麻、葡萄糖等單糖。第一個(gè)被發(fā)
現(xiàn)的鞘糖脂是半乳糖基神經(jīng)酰,因?yàn)橄仁菑娜四X中獲得,所以又稱(chēng)腦苗脂
硫苗脂(sulfatide\硫酸鞘糖脂
硫酸鞘糖月岳旨糖基部分被硫酸化的鞘糖脂,也稱(chēng)硫昔脂。簡(jiǎn)單的硫首脂是硫酸腦苗脂
神經(jīng)節(jié)苗脂(ganglioside\唾液酸鞘糖脂
糖基部分含有唾液酸的鞘糖脂,常稱(chēng)神經(jīng)節(jié)首脂。神經(jīng)節(jié)苗脂的糖基都是寡糖
?鏈,含一個(gè)或多個(gè)唾液酸。
脂蛋白(lipoprotein\血漿脂蛋白(plasmalipoprotein\載脂蛋白
?(apolipoprotein,apo)
.是由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)以非共價(jià)鍵(疏水相互作用、范德華力和靜電引力)結(jié)合而成
■的復(fù)合物。脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱(chēng)脫輔基脂蛋白或載脂蛋白。脂雷白廣泛存在
于血漿中,因此也稱(chēng)血漿脂蛋白
?類(lèi)固醇(sterol)
?類(lèi)固醇是環(huán)戊烷多氫菲的衍生物,是由4個(gè)環(huán)組成的一元醇。
?脂(質(zhì))雙層(lipidbilayer)
?由兩親性的脂質(zhì)分子排列成雙層膜,是形成生物膜的基本結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)分子非極性
的煌鏈尾部向內(nèi),極性頭部向外。周邊蛋白質(zhì)(peripheralproteins)
?也稱(chēng)外周蛋白質(zhì)或外在蛋白質(zhì)。以弱鍵(靜電作用和離子鍵作用等)疏松地與膜
*脂雙層內(nèi)表面結(jié)合的蛋白質(zhì),易溶于水,易于分離,如改變介質(zhì)的離子強(qiáng)度或改
變pH等就可以將周邊蛋白質(zhì)從膜上分離下來(lái)。
.整合蛋白質(zhì)(integralproteins)
?也稱(chēng)內(nèi)在蛋白質(zhì)。通過(guò)疏水作用和非鍵合分子力(范德瓦耳斯力)同膜脂雙層緊
密結(jié)合的蛋白質(zhì),不溶于水,也不容易從膜上溶解下來(lái),只有經(jīng)過(guò)劇烈的化學(xué)處
理,如用表面活性劑和有機(jī)溶劑處理,才能從膜上分離出來(lái)。
,易化擴(kuò)散(facilitateddiffusion)
*也稱(chēng)促進(jìn)擴(kuò)散,物質(zhì)從高濃度到低濃度由載體蛋白(即轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)介導(dǎo)的跨膜擴(kuò)
散,是自然發(fā)生的,不需要加入能量,是一種被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。
主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)(activetransport);協(xié)助擴(kuò)散
.物質(zhì)從低濃度到高濃度(逆濃度梯度)由載體蛋白介導(dǎo)的一種需能的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。
流動(dòng)鑲嵌模型(fuidmosaicmodel)
?一種生物膜模型。在脂質(zhì)雙層內(nèi)外鑲嵌著蛋白質(zhì)分子,有的蛋白質(zhì)只附著在脂質(zhì)
雙層的內(nèi)表面,有的深埋在脂質(zhì)雙層中或貫穿脂質(zhì)雙層,糖蛋白和糖脂的糖基支
鏈一般伸出脂質(zhì)雙層的外表面.膜具有不對(duì)稱(chēng)性和一定的流動(dòng)性,膜的不對(duì)稱(chēng)性
主要是指膜蛋白、膜脂和膜糖在質(zhì)膜上的分布是不對(duì)稱(chēng)的;膜的流動(dòng)性主要是指
?第三章:陲的和膜脂均可側(cè)向運(yùn)動(dòng)。
兼程離子(zwitterion)
氨基酸在中性pH時(shí),竣基以-C00-,氨基以-NH3+形式存在。這樣的氨基酸
分子含有一個(gè)正電荷^一個(gè)負(fù)電荷,稱(chēng)為兼性離子
等電點(diǎn)(isoelectricpoint,縮寫(xiě)為pl)
氨基酸的帶電狀況與溶液的plI有關(guān),氨基酸的等電點(diǎn)(pl)是指當(dāng)溶液的pH
使氨基酸帶的正負(fù)電荷一樣(凈電荷為零)的時(shí)候,這時(shí)候氨基酸在電場(chǎng)中既不
向正極也不向負(fù)極移動(dòng),即處于等電兼性離子狀態(tài)時(shí)的溶液的pH。
sanger反應(yīng)
2,4-二硝基氟苯(FNDB)在堿性條件下,能夠與肽鏈N-端的游離氨基作月,生
成二硝基苯衍生物。在酸性條件下水解,得到黃色DNP-氨基酸。該產(chǎn)物能夠用
乙酸抽提分離。不同的DNP-氨基酸可以用色譜法進(jìn)行鑒定
Edman反應(yīng)
a-氨基另個(gè)重要的運(yùn)基化反應(yīng)是與苯異硫富酸酯(縮寫(xiě)為PITC)在弱堿性條件下形
成相應(yīng)的苯氨基硫甲酰(縮寫(xiě)為PTC)衍生物。后者在硝基甲烷中與酸(如氟乙酸)
作用發(fā)生環(huán)化,生成相應(yīng)的苯乙內(nèi)酰硫版(縮寫(xiě)為PTH)衍生物。這些衍生物是無(wú)色
的,可用層析法加以分離鑒定。PITC被稱(chēng)為Edman試劑
前三酮反應(yīng)(ninhydrinreaction)
所有氨基酸及具有游離a-氨基的肽與苗三酮反應(yīng)都產(chǎn)生藍(lán)紫色物質(zhì),其中氨基酸引發(fā)
脫氨和脫竣,脯氨酸和羥脯氨酸與前三酮反應(yīng)產(chǎn)生黃色物質(zhì)。用紙層析或柱層析把各
種氨基酸分開(kāi)后,利用荀三酮顯色可以定性鑒定并用分光光度法在570nm定量測(cè)定
各種氨基酸。
肽鍵(peptidebond)
一個(gè)氨基酸的氨基與另一個(gè)氨基酸的竣基可以縮合成肽,形成的鍵稱(chēng)肽鍵
層析即色層分析也稱(chēng)色譜(chromatography)
是一種分離和分析方法,色譜過(guò)程的本質(zhì)是待分離物質(zhì)分子在固定相和流動(dòng)相之間分
配平衡的過(guò)程,在兩相之間的分酉環(huán)同,這使混合物中的不同組分在固定相上相互分
離.
名氏層析(filter-paperchromatography)
是分配層析的一種。這里,濾紙纖維素上吸附的水是固定相,展層用的溶劑是流動(dòng)
相。層析時(shí),混合氨基酸在這兩相中不斷分配,使它們分布在濾紙的不同位置上
離子交換柱層析(ion-exchangecolumnchromatography)
是一種用離子交換樹(shù)脂作支持劑的層析法。層析柱中填充的是離子交換樹(shù)脂,它具有
酸性或堿性基團(tuán)。
分離氨基酸混合物經(jīng)常使用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。酸性氨基酸與堿性氨基酸相比,
側(cè)鏈為極性不帶電荷的氨基酸與芳香族氨基酸相比,疏水性弱的氨基酸與疏水性強(qiáng)的
氨基酸相比,在經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子交換柱以后都是前者先于后者被洗脫。
氣液層析或氣液色譜(gas-liguidchromatography)
當(dāng)層析系統(tǒng)的流動(dòng)相為氣體如氫、氨、氮,固定相為涂漬在固體顆粒表面的液體時(shí),
此層析技術(shù)稱(chēng)為氣液層析或氣液色譜,簡(jiǎn)稱(chēng)為氣相層析或氣相色譜。
高效液相層析(highperformanceliquidchromatography,簡(jiǎn)稱(chēng)HPLC)曾稱(chēng)高
壓液相層析(highpres-sureliquidchromatography)
高效液相層析(HPLC)又稱(chēng)高壓液相層析:指以液體為流動(dòng)相,使用顆粒極細(xì)的介
質(zhì),在高壓下分離蛋白質(zhì)或其他分子混合物的層析技術(shù)。多種類(lèi)型的柱層析都可以用
HPLC代替,如(分配層析、離子交換層析、吸附層析、凝膠過(guò)濾層析)等
第四章:蛋白質(zhì)的共價(jià)結(jié)構(gòu)
單純蛋白質(zhì)(simpleprotein)
許多蛋白質(zhì)僅由氨基酸組成,不含其他化學(xué)成分,例如核糖核酸酶、肌動(dòng)蛋白
等.這些蛋白質(zhì)稱(chēng)為單純蛋白質(zhì)合蛋白質(zhì)(conjugatedprotein)
許多其他蛋白質(zhì)含有除氨基酸外的各種化學(xué)成分作為其結(jié)構(gòu)的部分。這樣的雷白質(zhì)
稱(chēng)為合蛋白質(zhì),這些非蛋白質(zhì)部分稱(chēng)為輔基或配體。
單體蛋白質(zhì)(monomericprotein)
有些蛋白質(zhì)僅由條多肽鏈構(gòu)成,如溶菌酶和肌紅蛋白,這些蛋白稱(chēng)為單體蛋白質(zhì)寡
聚(oligomeric)或多聚(multimeric)蛋白氏亞基或亞單位(subunit)有些蛋
白質(zhì)是由兩條或多條多肽鏈構(gòu)成,如血紅蛋白(兩條a鏈和兩條0鏈)和己糖激酶
(4條a鏈)'這些蛋白稱(chēng)為寡聚(oligomeric)或多聚(multimeric)蛋白質(zhì);其
中每條多肽鏈稱(chēng)為亞基或亞單位(subunit),亞基之間通過(guò)非共價(jià)鍵相互締合
二肽(dipeptide\寡肽(oligopeptide\多肽(polypeptide)
簡(jiǎn)單的肽由兩個(gè)氨基酸組成,稱(chēng)為二肽,其中含一個(gè)肽鍵。含3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)等氨
基酸殘基的肽分別稱(chēng)為三肽、四肽、五肽等。通常把含幾個(gè)至十幾個(gè)氨基酸殘基的肽
鏈統(tǒng)稱(chēng)為寡肽,更長(zhǎng)的肽鏈稱(chēng)為多肽.
氨基酸殘基(aminoacidresidue)
肽鏈中的氨基酸由于參加肽鍵的形成已經(jīng)不是原來(lái)完整的分子,因此稱(chēng)為氨基酸殘基
肽基(peptidegroup)或肽單位(peptideunit)
肽鍵是一種酰胺鍵,通常用狼基碳和酰胺氮之間的單鍵表示。肽鏈中的酰胺基
(-CO-NH-)稱(chēng)為肽基或肽單位。
酰胺平面(amideplane)也稱(chēng)肽基平面或肽平面(peptideplane)
組成肽基的個(gè)原了和個(gè)相鄰的原了傾向于共平面,形成所謂多肽主鏈的酰
42Cao
股平面也稱(chēng)肽基平面或肽平面
雙縮腺反應(yīng)(biuretreaction)
雙縮腺反應(yīng)(biuretreaction)是肽和蛋白質(zhì)所持有的,而為氨基酸所沒(méi)有的一個(gè)顏
色反應(yīng)。一般含有兩個(gè)或兩個(gè)以上的肽鍵化合物與堿性溶液都能發(fā)生雙縮版
CuSO4e
反應(yīng)而生成紫紅色或藍(lán)紫色的復(fù)合物,利用這個(gè)反應(yīng)借助分光光度計(jì)可以測(cè)定蛋白質(zhì)
的含量。
還原型谷胱甘肽(reducedglutathione)
由一分子谷氨酸,一分子半胱氨酸,一分子甘氨酸組成的生物活性肽。因?yàn)樗杏?/p>
離的SH基,所以常用GSH來(lái)表示。還原型谷胱甘肽在紅細(xì)胞中作為疏基緩沖劑存
在,維持血紅蛋白和紅細(xì)胞其他蛋白質(zhì)的半胱氨酸殘基處于還原態(tài)。
Edman化學(xué)降解法
N末端氨基酸殘基被異硫氟酸苯酯修飾,然后從多肽鏈上切下修飾的殘基,再經(jīng)層析
鑒定,余下的多肽鏈(少了一個(gè)殘基)被回收再進(jìn)行下一輪降解循環(huán)。是測(cè)定蛋白質(zhì)
一級(jí)結(jié)構(gòu)的方法,主要是從蛋白質(zhì)或多肽氨基末湍進(jìn)行分析.由埃德曼
(P.Edman)創(chuàng)立
重疊肽(overlapingpeptide)
不同的斷裂方法是指斷裂的專(zhuān)一性不同,即切口是彼此錯(cuò)位的,因此兩套肽段正好相
互跨過(guò)切口而重疊,這種跨過(guò)切口而重疊的肽段稱(chēng)重疊肽。
對(duì)角線電泳(diagonalelectrophoresis)是確定二硫橋位置的一種方法
把水解后的混合肽段點(diǎn)到濾紙的中央,在pH6.5的條件下,進(jìn)行第向電泳,肽段
將按其大小及電荷的不同分離開(kāi)來(lái)。然后把濾紙暴露在過(guò)甲酸蒸氣中,使S-S斷裂。
這時(shí)每個(gè)含二硫鍵的肽段被氧化成一對(duì)含磺基丙氨酸的肽。
濾紙旋轉(zhuǎn)90。角在與第一向完全相同的條件下進(jìn)行第二向電泳。
在這里,大多數(shù)肽段的遷移率未變,并將位于濾紙的一條對(duì)角線上,而含磺基丙氨酸
的成對(duì)肽段比原來(lái)含二硫鍵的肽小而負(fù)電荷增加,結(jié)果它們都偏離了對(duì)角線。肽斑可
用的三酮顯色確定。將每對(duì)含磺基丙氨酸的肽段(未用苗三酮顯色的)分別取下,進(jìn)
行氨基酸序列分析,然后與多肽鏈的氨基酸序列比較,即可推斷出二硫鍵在肽鏈間或
(和)肽鏈內(nèi)的位置。同源蛋白質(zhì)(homologousproteins)
?在不同生物體中行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)稱(chēng)同源蛋白質(zhì),例如各種脊椎動(dòng)物
中的氧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白血紅蛋白。序列同源[性](sequencehomology)
*同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列具有明顯的相似性,這種相似性稱(chēng)序列同源[性]
不燹殘基(invariantresidue\可變殘基(variableresidue)
*同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列中有許多位置的塞基酸殘基對(duì)所有已研究過(guò)的物種來(lái)說(shuō)
*都是相同的,因止啾為不變殘基。但是其他位置的氨基酸殘基對(duì)不同物種有相當(dāng)
大的變化,因而稱(chēng)可變殘基。
.第五章:蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)
?氫鍵(hydrogenbond)
?在穩(wěn)定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)中起著極其重要的作用。它們是穩(wěn)定蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要
作用力。氫鍵具有兩個(gè)重要特征,一個(gè)是方向性,另一個(gè)是飽和性
?疏水作用(hydrophobicinteraction)
?水介質(zhì)中球狀雷白質(zhì)的折疊總是傾向于把疏水殘基埋藏在分子的內(nèi)部。這一現(xiàn)象
被稱(chēng)為疏水作用或疏水效應(yīng),也曾不正確地稱(chēng)為疏水鍵。它在穩(wěn)定蛋白質(zhì)的三維
結(jié)構(gòu)方面占有突出的地位。疏水作用是焙驅(qū)動(dòng)的自發(fā)過(guò)程
■
二裂角(dihedralangle)
兩相鄰酰胺平面之間,能以共同的Ca為定點(diǎn)而旋轉(zhuǎn),繞Ca-N鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱(chēng)
(p(fai)角,繞C-Ca鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱(chēng)ip(psi)角。①和中稱(chēng)作二面角,亦稱(chēng)
?構(gòu)象角。
拉史圖技長(zhǎng)憫3r盥Si鐐%Andranniap):G.N.Ramachandran
等人采用原子的“硬球模型”,根據(jù)范德華半徑和
鍵角通過(guò)計(jì)算確定了6和3的允許值。用6
作橫坐標(biāo),中作縱坐標(biāo)作出的6?5圖稱(chēng)為拉
氏圖。/
蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)(primarystructure)
蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)是指氨基酸如何連接成肽鏈及氨基酸在肽鏈中的序列。在一級(jí)結(jié)
構(gòu)中一致公認(rèn)肽鍵是主要連接鍵,而多肽鏈無(wú)疑是一級(jí)結(jié)構(gòu)的主體。
蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)(proteinsecondarystructure)
蛋白質(zhì)主鏈的折疊產(chǎn)生由氫鍵維系的有規(guī)則的構(gòu)象,稱(chēng)為二級(jí)結(jié)構(gòu)。類(lèi)型主要
有:a-螺旋、b-折疊片、b-轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷由
a?螺旋(a-helix)
是蛋白質(zhì)中常見(jiàn)、典型、含量豐富的二級(jí)結(jié)構(gòu)元件。多肽鏈的主鏈原子汨
一中心軸盤(pán)繞,借助鏈內(nèi)氫鍵維持的穩(wěn)定構(gòu)象,為右手螺旋結(jié)構(gòu)。
0折疊片(B-pleatedsheet)或p結(jié)構(gòu)或0構(gòu)象
兩條或多條伸展的多肽鏈(或一條多肽鏈的若干肽段)側(cè)向集聚,通過(guò)相鄰肽鏈
主鏈上的NH與C-0之間有規(guī)則的氫鍵,形成鋸齒狀片層結(jié)構(gòu),即3折疊片。
B轉(zhuǎn)角(P-turn)或0彎曲(p-bend)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)(hairpinstructure)
多存在于球狀蛋白中。其特點(diǎn)是肽鏈回折180°,使得氨基酸殘基的C=O與第四個(gè)殘
基的N-H形成氫鍵。第二個(gè)氨基酸通常是pro.0-轉(zhuǎn)角都在蛋白質(zhì)分子的表面,脯氨
酸和甘氨酸較為常見(jiàn)。
B凸起(B-bugle)
■
是一種小片的非重復(fù)性結(jié)構(gòu),能單獨(dú)存在,但大多數(shù)經(jīng)常作為反平行B折疊片中的一
種不規(guī)則情況而存在。B凸起可認(rèn)為是B折疊股中額外插入的一個(gè)殘基,它使得在兩
個(gè)正常氫鍵之間、在凸起折疊股上是兩個(gè)殘基,而另一側(cè)的正常股上是一個(gè)殘基。
無(wú)規(guī)卷曲(randoncoil)或稱(chēng)卷曲(coil)
它泛指那些不能被歸入明確的二級(jí)結(jié)構(gòu)如折疊片或螺旋的多肽區(qū)段。
。環(huán)(Qloop)
這是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的普通存在于球狀蛋白質(zhì)中的一種新的二級(jí)結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)的形狀
像希臘字母"Q",故稱(chēng)。環(huán)。纖維狀蛋白質(zhì)(fibrousprotein)
廣泛地分布于脊椎和無(wú)脊椎動(dòng)物體內(nèi),它是動(dòng)物體的基本支架和外保護(hù)成分。這類(lèi)蛋
白質(zhì)外形呈纖維狀或細(xì)棒狀。分子是有規(guī)則的線性結(jié)構(gòu),這與其多肽鏈的有規(guī)則二級(jí)
結(jié)構(gòu)有關(guān)。
角蛋白(keratin)
來(lái)源于外胚層細(xì)胞,包括皮膚以及皮膚的衍生物。角蛋白是外胚層細(xì)胞的結(jié)構(gòu)能白
質(zhì)。角蛋白可分為a-角蛋白和0-角蛋白兩類(lèi)。
超二級(jí)結(jié)構(gòu)(super-secondarystructure\標(biāo)準(zhǔn)折疊單位(standardfolding
unit)或折疊花式(foldingmotif)
由若干相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)元件(主要是a螺旋和0折疊片)組合在一起,彼此相互作
用,形成種類(lèi)不多的、有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合或二級(jí)結(jié)構(gòu)串,在多種蛋白質(zhì)中充當(dāng)三
級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)件,稱(chēng)為超二級(jí)結(jié)構(gòu)、標(biāo)準(zhǔn)折疊單位或折疊花式?,F(xiàn)在已知的超二級(jí)結(jié)構(gòu)
有3種基本的組合形式:aa.paf和限
結(jié)構(gòu)域(structuraldomain,domain)或域
多肽鏈在二級(jí)結(jié)構(gòu)或超二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成三級(jí)結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū),它是相對(duì)獨(dú)立的緊
密球狀實(shí)體,稱(chēng)為結(jié)構(gòu)域或域。結(jié)構(gòu)域是球狀蛋白質(zhì)的獨(dú)立折疊單位。
功能域(functionaldomain)
結(jié)構(gòu)域有時(shí)也指功能域。一般說(shuō),功能域是蛋白質(zhì)分子中能獨(dú)立存在的功能單位。功能域
可以是一個(gè)結(jié)構(gòu)域,也可以是由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域或兩個(gè)以上結(jié)構(gòu)域組成
蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)(proteintertiarystructure)
一個(gè)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)是指由二級(jí)結(jié)構(gòu)元件(a螺旋,0構(gòu)象、0轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲等)
構(gòu)建成的總?cè)S結(jié)構(gòu),包括一級(jí)結(jié)構(gòu)中相距遠(yuǎn)的肽段之間的幾何相互關(guān)系和側(cè)鏈在三
維空間中彼此間的相互關(guān)系。
蛋白質(zhì)變性(denaturation)
蛋白質(zhì)在某些物理和化學(xué)因素作用下,其特定的空間構(gòu)象被破壞,也即有序的空間結(jié)
構(gòu)變成無(wú)序的空間結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。蛋白質(zhì)變性的
實(shí)質(zhì)是蛋白質(zhì)分子中的次級(jí)鍵被破壞,引起天然構(gòu)象解體。變性不涉及共價(jià)鍵(肽鍵
和二硫鍵等)的破裂,一級(jí)結(jié)構(gòu)仍保持完好。
蛋白質(zhì)的復(fù)性(renaturation)
當(dāng)變性因素除去后,變性蛋白質(zhì)又可重新回復(fù)到天然構(gòu)象,這一現(xiàn)象稱(chēng)為蛋白質(zhì)的復(fù)
性
二硫鍵異構(gòu)酶(proteindisulfideisomerse,PDI)新生蛋白質(zhì)中正確配對(duì)的二硫鍵
形成受蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶的催化。PDI廣泛的底物專(zhuān)一性使它能夠加速多種含二硫
鍵蛋白質(zhì)的折疊。
分子伴侶(molecularchaperone)
?.分子伴侶的蛋白質(zhì)家族涉及蛋白質(zhì)折疊。它們通過(guò)抑制新生肽鏈不恰當(dāng)?shù)木奂?/p>
排除與其他蛋白質(zhì)不合理的結(jié)合,協(xié)助多肽鏈的正確折疊。
?蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)(Quaternarystructure)
自然界中很多蛋白質(zhì)是以獨(dú)立折疊的球狀蛋白質(zhì)的聚集體形式存在的。這些球狀蛋白質(zhì)通
過(guò)非共價(jià)鍵彼此締合在一起。締合形成聚集體的方式構(gòu)成蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。四級(jí)結(jié)構(gòu)的
蛋白質(zhì)中每個(gè)球狀雷白質(zhì)稱(chēng)為亞基,亞基一般是一條多肽鏈。
?別構(gòu)蛋白
?是指蛋白質(zhì)分子含有不止一個(gè)配體結(jié)合部位,除活性部位外還有別的配體(如效
應(yīng)物或調(diào)節(jié)物)的結(jié)合部位,稱(chēng)別構(gòu)部位或調(diào)節(jié)部位。別構(gòu)蛋白質(zhì)分子至少含有
兩個(gè)活性部位,或者還有別構(gòu)部位。這兩種部位可以在同一個(gè)亞基上,也可以在
不同的亞基上。
■
別構(gòu)效應(yīng)(allostericeffect)
多亞基蛋白質(zhì)一般具有多個(gè)結(jié)合部位,結(jié)合在蛋白質(zhì)分子的特定部位上的配體對(duì)
該分子的其他部位所產(chǎn)生的影響(如改變親和力或催化能力)稱(chēng)為別構(gòu)效應(yīng)。具
?有別構(gòu)效應(yīng)的蛋白質(zhì)稱(chēng)為別構(gòu)蛋白質(zhì),如別構(gòu)酶。
同怩效應(yīng)(homotropiceffect\異促效應(yīng)(heterotropiceffect)別構(gòu)效應(yīng)可分為
*同促效應(yīng)和異促效應(yīng)。
同促效應(yīng):一種配體的的結(jié)合對(duì)于其它部位結(jié)合同種配體的能力的影響,包括
(正)協(xié)同效應(yīng)和負(fù)協(xié)同效應(yīng)異促效應(yīng):___________________________________
向施必照師腕認(rèn)加揖混癰淌;若鄧黃而豳7士國(guó)緯合之后,促進(jìn)另?柏間的效應(yīng)物分廣力防的另部位的結(jié)
介則為同促正協(xié)同效應(yīng),反之則為同促負(fù)協(xié)同效應(yīng).其中同促正協(xié)同較為常見(jiàn).(火險(xiǎn)優(yōu)動(dòng)力學(xué)曲線為S>fi)
若一分子效應(yīng)物和脩結(jié)合之后.影響到另一不同的效應(yīng)物分弗iiW的8?觥位結(jié)合則稱(chēng)為介促效應(yīng).
第K章:蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系
肌紅蛋白(myoglobin,Mb)
是哺乳動(dòng)物細(xì)胞主要是肌細(xì)胞貯存和分配第的蛋白質(zhì)。肌紅蛋白是由一條多肽鏈
?和一個(gè)輔基血紅素構(gòu)成,除去血紅素的脫輔基肌紅蛋白稱(chēng)珠蛋白
血紅蛋白(hemoglobin,Hb)
主要功能是在血液中結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)氧氣。脊椎動(dòng)物的血紅蛋白由4個(gè)多肽亞基組
成,兩個(gè)是一種亞基,兩個(gè)是另一種亞基。每個(gè)亞基都有一個(gè)血紅素基和一個(gè)氧
*結(jié)合部位。
*
Bohr效應(yīng)
氧與血紅蛋白結(jié)合深受pH和C02濃度的影響。去氧血紅蛋白對(duì)H+的親和力比
氧合血紅蛋白大。因此,增加H+濃度(降低pH)將提高02從血紅蛋白中的
釋放。
H+可看成是11紅蛋白氧合的拮抗物。當(dāng)H+濃度增加(pH下降)時(shí),Hb的氧
分?jǐn)?shù)飽?口曲線向右移動(dòng)。這種pH對(duì)血紅蛋白對(duì)氧的親和力的影響被稱(chēng)為Bohr
分子?。╩oleculardisease)
蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病,被稱(chēng)之為分子病,其病因?yàn)榛蛲蛔兯?/p>
免疫球蛋白(immunoglobulin)
是指某些參與免疫反應(yīng)的血清r-球蛋白,也稱(chēng)抗體蛋白,通常以Ig符號(hào)代表。
多克隆抗體(polyclonalantibody)是由多個(gè)不同的B淋巴細(xì)胞在應(yīng)答一個(gè)抗原,例
如向一個(gè)動(dòng)物注入一種蛋白質(zhì)時(shí)產(chǎn)生的,B淋巴物胞群中每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生結(jié)合抗原中特
異的不同抗原決定簇的抗體。因此,多克隆抗體(簡(jiǎn)稱(chēng)多抗)制劑是識(shí)別一個(gè)蛋白質(zhì)
(抗原)的不同部分
(表位)的多種抗體的混合物
單克隆抗體(monoclonalantibody)
是由生長(zhǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)物中的同一B細(xì)胞的群體(一個(gè)克隆)合成并分泌的。這些抗體
是均一的,所有的抗體識(shí)別同一的表位。
ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay),即醵聯(lián)免疫吸附測(cè)定
即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,它能快速篩查和定量一個(gè)抗原在樣品中的存在;是以待測(cè)抗原
(或抗體)和酶標(biāo)抗體(或抗原)的特異結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ),然后通過(guò)酶活力測(cè)定來(lái)確
定抗原(或抗體)含量
免疫印跡測(cè)定(immunoblotassay)或稱(chēng)Western印跡(Westernblot)
免疫印跡測(cè)定或稱(chēng)Western印跡。對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行凝膠電泳分離,然后凝膠板與硝
酸纖維膜貼在一起,進(jìn)行電泳轉(zhuǎn)移,將凝膠上的蛋白條帶轉(zhuǎn)印到纖維膜上。將纖維封
閉,然后相繼用第一抗體、酶標(biāo)第二抗體以及底物進(jìn)行處理。只有含待測(cè)蛋白質(zhì)的條
帶顯示顏色。免疫印跡能檢測(cè)樣品中的微量成分和近似相對(duì)分子質(zhì)量
第七章:蛋白質(zhì)的分離純化和表征等離子點(diǎn)(isoionic
point)
沒(méi)有其他鹽類(lèi)干擾時(shí),蛋白質(zhì)質(zhì)子供體基團(tuán)解離出來(lái)的質(zhì)子數(shù)與質(zhì)子受體基團(tuán)結(jié)合的
質(zhì)子數(shù)相等時(shí)的pH稱(chēng)為等離子點(diǎn)
凝膠過(guò)濾(gelfiltration)
凝膠過(guò)濾(層析)是一種可按照蛋白質(zhì)分子量大小進(jìn)行分離的技術(shù),同時(shí)可以測(cè)定蛋
白質(zhì)分子量。蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠柱的速度即洗脫體積與其分子量有關(guān)
SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)
是一種測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的電泳技術(shù),在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中加入陰離子去
污劑十二烷基硫酸鈉(SDS)和少量疏基乙醇,則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決
于它的相對(duì)分子質(zhì)量,而與原來(lái)所帶的電荷和分子形狀無(wú)關(guān)。SDS-
PAGE只能測(cè)定亞基的相對(duì)分子質(zhì)量
透析(dialysis)
是利用蛋白質(zhì)分子不能通過(guò)半透膜的性質(zhì),使蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)如無(wú)機(jī)鹽、單
糖等分開(kāi)。
超過(guò)濾或超濾(ultrafiltration)
超過(guò)濾或超濾是利用壓力或離心力,強(qiáng)行使水和其他小分子溶質(zhì)通過(guò)半透膜,而蛋白
質(zhì)被截留在膜上,以達(dá)到濃縮和脫鹽的目的
鹽溶(saltingin)
低濃度時(shí),中性鹽可以增加蛋白質(zhì)的溶解度,這種現(xiàn)象稱(chēng)為鹽溶
鹽析(saltingout)
當(dāng)離子強(qiáng)度增加到足夠高時(shí),例如飽和或半飽和的程度,很多蛋白質(zhì)可以從水溶液中
沉淀出來(lái),這種現(xiàn)象稱(chēng)為鹽析
電泳(electrophoresis)或離子泳(ionphoresis)
在外電場(chǎng)的作用下,帶電顆粒,例如不處于等電狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子,將向著與其電性
相反的電極移動(dòng),這種現(xiàn)象稱(chēng)為電泳或離子泳。
雙向電泳(two-dimensionalelectrophoresis)氨基酸混合物特別是寡核甘酸混合
物一次電泳往往不能完全分開(kāi)。這種情況可以將第一次電泳分開(kāi)的斑點(diǎn)通過(guò)支持介質(zhì)
間的接觸印跡轉(zhuǎn)移到第二個(gè)支持介質(zhì)上,旋轉(zhuǎn)90。,進(jìn)行第二次電泳。這種方法被稱(chēng)
為雙向電泳。
.聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamindegelelectrophoresis,簡(jiǎn)稱(chēng)PAGE)
?以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù),常用于分離蛋白質(zhì)和寡核
昔酸。
?等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)電聚焦(electricfocusing,EF)
?是一種高分辨率的蛋白質(zhì)分離技術(shù),它也可用于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測(cè)定。從廣義上
說(shuō),等電聚焦是一種自由界面電泳。利用這種技術(shù)分離蛋白質(zhì)混合物是在具有pH梯
度的介質(zhì)(如濃蔗糖溶液)中進(jìn)行的。兩性電解質(zhì)(ampholyte,商品名稱(chēng)為
,ampholine)
?pH梯度制作TS利用兩性電解質(zhì),它是脂肪族多胺和多竣類(lèi)的同系物,它們具
有相近但不相同的pKa和pl直在外電場(chǎng)作用下,自然形成pH梯度。
層圻聚焦或聚焦層析(chromatofocusing)
是根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異分離蛋白質(zhì)混合物的柱層析方法。它不需要聚焦電泳
裝置也不需要柱層析中常用的梯度混合器,但具有等電聚焦電泳的高分辨率和柱
?層析的操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。
吸附層析
是利用待純化的分子和雜質(zhì)分子與吸附劑之間的吸附能力和解吸性質(zhì)不同而達(dá)到
,分離目的的。典型的吸附劑有硅石、氧化鋁和活性炭等。疏水作用層析
(hydrophobicinteractionchromatography)
蛋白質(zhì)存在于分子表面的疏水氨基酸殘基的數(shù)量是不同的。疏水作用層析
(hydrophobicinteractionchromatography)就是根據(jù)蛋白質(zhì)表面的疏水性
差別發(fā)展起來(lái)的一種純化技術(shù)。親和層析(affinitychromatography)
親和層析是利用蛋白質(zhì)分子對(duì)其配體分子特有的識(shí)別能力,也即生物學(xué)親和力,
建立起來(lái)的一種有效的純化方法。它經(jīng)常只需要經(jīng)過(guò)一步的處理即可將某種所需
第八章:蠲源從復(fù)雜的混合物中分離出來(lái),并且純度相當(dāng)高。
酶的轉(zhuǎn)換數(shù)(turnovernumber,TN,等于催化常數(shù)kcat)
表示酶的催化效率,是指在一定條件下每秒鐘每個(gè)酶分普換底物的分子數(shù),或
*每秒鐘每微摩爾酶分子轉(zhuǎn)換底物的微摩爾數(shù)
高度專(zhuān)一性(specificity)
.是指酶對(duì)催化的反應(yīng)和反應(yīng)物有嚴(yán)格的選擇性。酶往往只能催化一種或一類(lèi)反
應(yīng),作用于一種或一類(lèi)物質(zhì)。
輔因子(cofactor)
在酶催化時(shí),一定要有脫輔酶和輔因子同時(shí)存在才起作用,二者各自單獨(dú)存在
時(shí),均無(wú)催化作用。酶的輔因子,包括金屬離子及有機(jī)化合物,根據(jù)它們與脫輔
酶結(jié)合的松緊程度不同,可分為兩類(lèi),即輔酶和輔基。
輔酶(coenzyme)和輔基(prostheticgroup)
通常輔酶是指與脫輔酶結(jié)合比較松弛的小分子有機(jī)物質(zhì),通過(guò)透析方法可以除
去,如輔酶I和輔酶U等
輔基是以共價(jià)鍵和脫輔酶結(jié)合,不能通過(guò)透析除去,需要經(jīng)過(guò)一定的化學(xué)處理才
能與蛋白分開(kāi),如細(xì)胞色素氧化酶中的鐵葉琳,丙酮酸氧化酶中的黃素腺瞟吟二
核苗酸(FAD),都屬于輔基
.單體酶(monomericenzyme)
一般是由一條肽鏈組成,例如,牛胰核糖核酸酶、溶菌酶、皎肽酶A等
寡聚酶(oligomericenzyme)
是由兩個(gè)或兩個(gè)以上亞基組成的酶,這些亞基可以是相同的,也可以是不相同的。
多酶復(fù)合體(multienzymecomplex)
是由幾種酶靠非共價(jià)鍵彼此嵌合而成。所有反應(yīng)依次連接,有利于一系列反應(yīng)的連續(xù)
進(jìn)行
絕對(duì)專(zhuān)一性(absolutespecificity)
有些酶對(duì)底物的要求非常嚴(yán)格,只作用于一種底物,而不作用于任何其他物質(zhì),這
種專(zhuān)一性稱(chēng)為"絕對(duì)專(zhuān)一性”,例如腑酶只能水解尿素,而對(duì)尿素的各種衍生物不起作
用相對(duì)專(zhuān)一性
有些酶對(duì)底物的要求比絕對(duì)專(zhuān)一性要低一些,可作用一類(lèi)結(jié)構(gòu)相近的底物,這種專(zhuān)
一性稱(chēng)為"相對(duì)專(zhuān)一性"。鎖與鑰匙(lockandkey)學(xué)說(shuō)
即酶與底物為鎖與鑰匙的關(guān)系,以此說(shuō)明酶與底物結(jié)構(gòu)上的互補(bǔ)性
誘導(dǎo)契合假說(shuō)(induced-fithypothesis)
當(dāng)酶分子與底物分子接近時(shí),酶蛋白受底物分子誘導(dǎo),其構(gòu)象發(fā)生有利于底物結(jié)合的
變化,酶與底物在此基礎(chǔ)上互補(bǔ)契合進(jìn)行反應(yīng)
酶活力(enzymeactivity)也稱(chēng)為酶活性
酶活力是指酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力,酶活力的大小可以用在一定條件下所催化的
某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率(reactionvelocity或reactionrate)來(lái)表示,兩者呈線性
關(guān)系。
酶的活力單位(U,activityunit)
酶活力的大小即豳含量的多少,用酶活力單位表示,即酶單位(U\酶單位的定義
是:在一定條件下,一定時(shí)間內(nèi)將一定量的底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量。
酶的比活力(specificactivity)
代表酶的純度,根據(jù)國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)的規(guī)定比活力用每mg蛋白質(zhì)所含的酶活力單位
數(shù)表示,對(duì)同一種酶來(lái)說(shuō),比活力愈大,表示酶的純度愈高。
自我剪接(self-splicing)
具有自我催化能力,將自身的某些部位切除的現(xiàn)象稱(chēng)為自我剪接。在酵母和真菌的線
粒體mRNA和tRNA前體加工、葉綠體的tRNA和rRNA前體加工、某些細(xì)菌病毒
的mRNA前體加工中都發(fā)現(xiàn)了自我剪接現(xiàn)象
核酶(ribozyme)
核酶是指具有催化功能的RNA,化學(xué)本質(zhì)是核糖核酸,卻具有酶的催化功能,其作用
底物通常是核酸。
抗體酶(abzyme)
具有催化能力的蛋白質(zhì),其本質(zhì)上是免疫球蛋白,但是在易變區(qū)被賦予了酶的屬性,
所以又稱(chēng)為“催化性抗體”。
酶工程(enzymeengineering)
酶工程主要研究酶的生產(chǎn)、純化、固定化技術(shù)、酶分子結(jié)構(gòu)的修飾和改造以及在工農(nóng)
?Km值
■
業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和理論研究等方面的應(yīng)用?;瘜W(xué)酶工程也可稱(chēng)為初級(jí)酶工程(primary
enzymeengineering)
是指天然酶、化學(xué)修飾酶、固定化酶及人工模擬酶的研究和應(yīng)用。
固定化酶(immobilizedenzyme)
通常酶催化反應(yīng)都是在水溶液中進(jìn)行的,而固定化酶是將水溶性酶用物理或化學(xué)
方法處理,使之成為不溶于水的,但仍具有酶活性的狀態(tài)。固定化的酶不僅仍具有高
的催化效率和高度專(zhuān)一性,且提高了對(duì)酸堿和溫度的穩(wěn)定性,增加了酶的使用壽命生
物酶工程
生物酶工程是酶學(xué)和以DNA重組技術(shù)為主的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)
物,因此,亦可稱(chēng)為高級(jí)酶工程(advancedenzymeengineering)
第九章:酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)
酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)(kineticsofenzyme-catalyzedreactions)是研究酶促反應(yīng)的速率
以及影響此速率的各種因素的科學(xué)。
酶底物中間絡(luò)合物學(xué)說(shuō)
該學(xué)說(shuō)認(rèn)為當(dāng)酶催化某一化學(xué)反應(yīng)時(shí),酶首先^底物結(jié)合生成中間復(fù)合物
(ES),然后生成產(chǎn)物(P),并釋放出酶
Km值是當(dāng)酶反應(yīng)速率達(dá)3大反應(yīng)速率一半時(shí)的底物濃度,單位是mol/L,
與底物濃度的單位一樣失活作用(inactivation)
酶是蛋白質(zhì),凡可使酶蛋白變性而引起酶活力喪失的作用稱(chēng)為失活作用
抑制作用(inhibition)
由于酶的必需基團(tuán)化學(xué)性質(zhì)的改變,但酶未變性,而引起酶活力的降低或喪失而
稱(chēng)為抑制作用。引起抑制作用的物質(zhì)稱(chēng)為抑制劑。變性劑對(duì)酶的變性作用無(wú)選擇
性,而一種抑制劑只能使一種酶或一類(lèi)酶產(chǎn)生抑制作用
不可逆抑制(irreversibleinhibition)
抑制劑與酶的必需基團(tuán)以共價(jià)鍵結(jié)合而引起酶活力喪失,不能用透析、超濾等物
理方法除去抑制劑而使酶復(fù)活,稱(chēng)為不可逆抑制
可逆抑制(reversibleinhibition)
抑制劑與酶以非共價(jià)鍵結(jié)合而引起酶活力降低或喪失,能用物理方法除去抑制劑
而使酶復(fù)活,這種抑制作用是可逆的,稱(chēng)為可逆抑制
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