紫外可見(jiàn)分光光度法

《儀器分析》課程紫外-可見(jiàn)吸收光譜法第一章第一章紫外-可見(jiàn)光光度法§1基本原理

§2化合物的紫外-可見(jiàn)吸收光譜

§3紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)與原理

§4應(yīng)用

§5實(shí)驗(yàn)技術(shù)§1基本原理

紫外-可見(jiàn)分光光度法是利用物質(zhì)對(duì)紫外-可見(jiàn)光的吸收特征和吸收強(qiáng)度進(jìn)行定性和定量的儀器分析方法。一、光的基本性質(zhì)

光是一種電磁波，具有波粒二象性。

(1).光的波動(dòng)性

可用波長(zhǎng)

、頻率

、光速c等參數(shù)來(lái)描述：

=c/

波譜區(qū)域的劃分微波可見(jiàn)光、紫外光的波長(zhǎng)范圍分別為多少？可見(jiàn)光：400-780nm紫外光：200-400nm(2).光的粒子性光是由光子組成，光子具有能量。光子的能量：

E=h=h·c/

（普朗克常數(shù)：h=6.626×10-34J·S)

光子能量與它的頻率成正比，與波長(zhǎng)成反比，與光強(qiáng)度無(wú)關(guān)。光的波長(zhǎng)越短（頻率越高），其能量越大。單色光：復(fù)合光：可見(jiàn)光：同一波長(zhǎng)的光稱為單色光；不同波長(zhǎng)的光組成的光稱為復(fù)合光；凡是被肉眼感受到的光稱為可見(jiàn)光；

波長(zhǎng)范圍為400-780nm復(fù)合光單色光吸收黃色光反射藍(lán)色光物質(zhì)顏色的產(chǎn)生吸收綠色光透過(guò)紫色光固體液體互補(bǔ)色二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收

E=E1-

E0=h=hc/λλ=hc/

EM+

h

M*基態(tài)激發(fā)態(tài)E0

（△E）E1E2E1E0基態(tài)激發(fā)態(tài)

E物質(zhì)對(duì)光選擇性吸收例題

某分子中兩個(gè)電子能級(jí)之間的能級(jí)差為1eV，若要電子在兩個(gè)能級(jí)之間發(fā)生躍遷，需要吸收光的波長(zhǎng)為多少納米？（1eV=1.602×10-19J）解：根據(jù)注意：統(tǒng)一單位?。。?！

用不同波長(zhǎng)的光依次透過(guò)待測(cè)物質(zhì)，并測(cè)量物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度（吸光度），以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到該物質(zhì)在測(cè)量波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收曲線。吸收曲線三、光譜的吸收曲線2.光譜的吸收曲線①同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)λmax②不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似，λmax不變。但在同一波長(zhǎng)處的吸光度隨溶液濃度增加而增大，定量分析依據(jù)。圖為KMnO4水溶液的吸收曲線③不同物質(zhì)吸收曲線特性（曲線形狀、峰的數(shù)目，位置，強(qiáng)度）不同?？勺鳛槲镔|(zhì)定性分析的依據(jù)。圖1為KMnO4水溶液的吸收曲線圖2為苯溶液的吸收曲線定量的依據(jù)是什么？？光強(qiáng)度：?jiǎn)挝粫r(shí)間（1s）內(nèi)照射在單位面積（1cm2）的上光能量。I表示。透射率：透過(guò)的光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0之比，表示為：吸光度：物質(zhì)對(duì)光的吸收程度

A

＝－lgT四、光的吸收定律四、光的吸收定律1.朗伯–比爾定律布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系：1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系:A=K1

b

A=K2

c二者的結(jié)合稱為朗伯-比耳定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：A=

kbc

朗伯－比爾定律：A：吸光度；K：比例常數(shù)；

b：吸收介質(zhì)的厚度，一般以cm為單位；

c：吸光物質(zhì)的濃度，單位可以是g/L或mol/L。A＝

kbc

k？k-吸光系數(shù)K—吸光系數(shù)，液層厚度為1cm的單位濃度溶液，對(duì)一定波長(zhǎng)光的吸光度k越大，表示該物質(zhì)對(duì)光的吸收能力越強(qiáng)k

的兩種表示方式：摩爾吸光系數(shù)質(zhì)量吸光系數(shù)溶液以mol/L

為單位，K為摩爾吸光系數(shù)（ε），單位L·mol-1·cm-1，A=εbc例題某化合物的λmax=280nm，光線通過(guò)該化合物的1.0×10-5mol·L-1溶液時(shí)，透射率為50%（用2cm吸收池），求該化合物在280nm處的摩爾吸光系數(shù)。解：已知，

λmax=280nm，c=1.0×10-5mol·L-1，

T=50%，b=2cm則

A=-lgT=-lg0.5=0.301根據(jù)朗伯-比爾定律

A=ε·b·c

ε==0.301/（2×1.0×10-5

）

=1.51×104（L·mol-1·cm-1）Abc

多組分混合體系中，如果各組分分子之間不存在離解、聚合、化學(xué)反應(yīng)等化學(xué)平衡時(shí)，其吸光度具有加合性，即：2.朗伯-比爾定律的應(yīng)用---吸光度的加合性A總λ=A1λ+A2λ+…Anλ3.朗伯—比耳定律偏離的原因這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯—比耳定律的偏離。1.00.50AC正偏離負(fù)偏離A=

kbc

（1）.濃度的限制稀溶液Beer定律的假定：只有在稀溶液時(shí)才基本符合。當(dāng)溶液濃度C>0.01mol/L

時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對(duì)光的吸收。引起這種偏離的因素（2）.非單色入射光引起偏離Lambert–Beer定律的前提條件之一是入射光為單色光。但實(shí)際上難以獲得真正意義上的純單色光。分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光普通帶。復(fù)合光可導(dǎo)致對(duì)朗伯-比耳定律的正或負(fù)偏離。e.g.鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列平衡：CrＯ42-＋2H＋

=Cr2Ｏ72-＋H2Ｏ

CrＯ42-、Cr2Ｏ72-的吸光性質(zhì)不同，即ε(λ)不同。此時(shí)溶液pH對(duì)測(cè)定有重要影響。（３）.溶液發(fā)生化學(xué)變化引起偏離作業(yè)P262-5,14§1.2化合物的紫外-可見(jiàn)吸收光譜一、有機(jī)化合物的紫外—可見(jiàn)吸收光譜1、有機(jī)化合物的電子躍遷有機(jī)化合物的紫外吸收光譜，取決于分子中外層電子的性質(zhì)。有機(jī)化合物分子中通常有三類電子：σ電子、π電子、n電子一、有機(jī)化合物的紫外一可見(jiàn)吸收光譜1.躍遷類型分子軌道理論：?jiǎn)捂Iσ電子雙鍵π電子未成鍵n電子吸收△E躍遷σ*反鍵軌道π*反鍵軌道成鍵軌道電子能級(jí)及電子躍遷sp

*s*RKE,Bnp

ECOHnpsH電子躍遷的類型σ→σ*n→σ*π→π*n→π*四種躍遷的能量大小順序?yàn)椋骸鱁σ→σ*>△E

n→σ*>△E

π→π*>△E

n→π*

（1）σ→σ*躍遷：這是一切飽和有機(jī)化合物都可能產(chǎn)生的電子躍遷類型，躍遷需要能量大，吸收短波長(zhǎng)的輻射,<200nm，如甲烷的λmax為125nm,乙烷λmax為135nm。因此可以作為分光光度法的溶劑。（2）n→σ*躍遷：含有雜原子（如N、O、S等）的飽和烴衍生物都可發(fā)生這種躍遷。所需能量較大。吸收波長(zhǎng)為150～250nm，大部分在遠(yuǎn)紫外區(qū)，近紫外區(qū)仍不易觀察到。如一氯甲烷、甲醇n→σ*躍遷的λmax分別為173nm、183nm。（3）π→π*躍遷：不飽和烴、共軛烯烴和芳香烴類均可發(fā)生該類躍遷，如乙烯π→π*躍遷的λmax為170nm。（4）n→π*躍遷：分子中孤對(duì)電子和π鍵同時(shí)存在時(shí)發(fā)生n→π＊躍遷。丙酮n→π＊躍遷的λmax為275nm。（5）電荷遷移躍遷：分子本身具有電子給予體和電子接受部分，外來(lái)輻射照射，電子從具有給予體特性的部分轉(zhuǎn)移到具有電子接受體特性的部分所發(fā)生的躍遷。其譜帶較寬，吸收強(qiáng)度大。例：NCH3CH3－+hv電子接受體電子給予體A.生色團(tuán)2.紫外光譜常用術(shù)語(yǔ)是指分子中產(chǎn)生吸收帶的主要官能團(tuán)（通常含有π鍵）；吸收帶的λmax＞210nm,屬于π→π*

或n→π*

等躍遷類型。生色團(tuán)為不飽和基團(tuán)：C=C、N=O、C=O、C=S等；B.助色團(tuán)是指分子中的一些帶有非成鍵電子對(duì)的基團(tuán)本身在紫外-可見(jiàn)光區(qū)不產(chǎn)生吸收，但是當(dāng)它與生色團(tuán)連接后，增強(qiáng)生色團(tuán)的生色能力，使生色團(tuán)的吸收帶向長(zhǎng)波移動(dòng)，且吸收強(qiáng)度增大。助色團(tuán)為含有未共用電子對(duì)的雜原子基團(tuán)：-OH、-Cl、-BrC.紅移與藍(lán)移

有機(jī)化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩL(zhǎng)λmax和吸收強(qiáng)度發(fā)生變化:

λmax向長(zhǎng)波方向移動(dòng)稱為紅移，向短波方向移動(dòng)稱為藍(lán)移(或紫移)。D.增色效應(yīng)和減色效應(yīng)吸收強(qiáng)度即摩爾吸光系數(shù)ε增大或減小的現(xiàn)象分別稱為增色效應(yīng)或減色效應(yīng)，如圖所示。3.影響紫外-可見(jiàn)吸收光譜的因素（1）共軛效應(yīng)

共軛體系的形成使λmax紅移，并且共軛體系越長(zhǎng)，紫外光譜的最大吸收越移向長(zhǎng)波方向。CH2＝CH2

λmax為170nm左右，ε＝1×104L·mol-1·cm-1

CH2＝CH－CH＝CH2

λmax為210nm，ε＝2.1×104L·mol-1·cm-1

（2）溶劑效應(yīng)物質(zhì)在溶液中測(cè)定，因使用溶劑不同而產(chǎn)生不同的吸收光譜。溶劑的影響1：乙醚2：水12250300亞異丙基丙酮非極性→極性n

→

*躍遷：藍(lán)移；；

→*躍遷：紅移；；CH3COCHC(CH3)2n

→

*躍遷

→*躍遷n

→

*躍遷

→*躍遷

→*躍遷n

→

*躍遷（1）π→π*躍遷所產(chǎn)生的吸收峰隨著溶劑極性的增加而向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)（紅移）。（2）n→π*躍遷所產(chǎn)生的吸收峰隨溶劑極性的增加而向短波長(zhǎng)方向移動(dòng)（藍(lán)移）。（3）溶劑pH值對(duì)光譜的影響如Fe3+與水楊酸在不同pH條件下的配合物（a）苯酚的UV光譜圖（b）苯胺的UV光譜圖溶液酸堿性對(duì)紫外光譜的影響4、常見(jiàn)有機(jī)化合物的紫外-可見(jiàn)吸收光譜（1）飽和烴及其取代衍生物烷烴

C—C，C—H只產(chǎn)生σ→σ*

躍遷，λmax＜150nm，在近紫外區(qū)無(wú)吸收。因而飽和烷烴可用作紫外吸收測(cè)定的溶劑。如，CH4λmax=125nm；

CH3CH3λmax=135nm飽和烴上H被雜原子取代σ→σ*紅移，并產(chǎn)生n→σ*

躍遷。

n→σ*仍在遠(yuǎn)紫外區(qū)；如：

CH4:σ→σ*125nm，

CH3cl:n→σ*173

nm（2）不飽和烴及共軛烯烴σ、π：σ→σ*躍遷、π→π*躍遷單個(gè)雙鍵，隔離雙鍵：π→π*躍遷，吸收峰在遠(yuǎn)紫外區(qū)，乙烯170nm，1,5-己二烯185nm共軛雙鍵：

π→π*躍遷紅移，增色，

共軛雙鍵中π→π*躍遷所產(chǎn)生的吸收帶稱為K帶，其特點(diǎn)是強(qiáng)度大（ε＞104），λmax≥217nm，K帶的λmax、εmax與共軛體系的數(shù)目、位置、取代基的種類有關(guān)。（3）芳香族化合物

苯：具有環(huán)狀共軛體系，由π→π*產(chǎn)生三個(gè)吸收帶：

E1184nm4.7×104E2203nm7.9×103B255-230nmB帶是由于π→π*躍遷和苯環(huán)的振動(dòng)重疊引起，也稱為精細(xì)結(jié)構(gòu)吸收帶。B帶是芳香族化合物的重要特征吸收帶。思考1、庚烷、環(huán)己烷等烷烴在200-400nm內(nèi)有無(wú)吸收？2、甲苯、丁二烯在200-400nm內(nèi)有無(wú)吸收？3、如果環(huán)己烷中含有少量的雜質(zhì)苯，其紫外吸收曲線會(huì)怎樣?

作業(yè)P2617第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)與原理一、基本組成光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示系統(tǒng)1.光源作用：供給符合要求的入射光。要求：具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。

可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈、碘鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在320～2500nm。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射160～375nm的連續(xù)光譜。氘燈鎢燈

作用：將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。①入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；②準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；③色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；④聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。2.單色器心臟3.吸收池（比色皿）（1）吸收池作用：盛放液態(tài)樣品的器皿（3）規(guī)格：幾mm-幾cm，1cm（2）吸收池種類：玻璃，對(duì)紫外有吸收，可見(jiàn)光區(qū)

石英，可見(jiàn)及紫外光區(qū)（4）材料、光學(xué)特性、光程長(zhǎng)度影響測(cè)量結(jié)果

吸收池要挑選配對(duì)，使它們的性能基本一致（5）吸收池的形狀可拆卸圓形測(cè)量池兩面透光圓形測(cè)量池兩面透光1cm長(zhǎng)方形測(cè)量池兩面透光氣體測(cè)量池兩面透光微量測(cè)量池兩面透光流動(dòng)測(cè)量池兩面透光（6）使用比色皿的注意事項(xiàng)1.拿取比色皿時(shí)，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，不可接觸光學(xué)面。毛面光面2.裝溶液時(shí)，最好為比色皿的2/3高度處，不可太滿（溢出）。4.凡含有腐蝕玻璃的物質(zhì)溶液，不能長(zhǎng)時(shí)間盛放在比色皿中。5.使用后立即用水沖洗干凈。3.測(cè)量前，必須擦干比色皿外壁溶液，只能用擦鏡紙或絲綢擦拭光學(xué)面。4.檢測(cè)器（1）作用：光電轉(zhuǎn)換元件

檢測(cè)單色光通過(guò)溶液被吸收后透射光強(qiáng)度光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)

（2）種類：光電池、光電管和光電倍增管應(yīng)用廣泛硒電池、少用5.信號(hào)處理及顯示系統(tǒng)作用：放大信號(hào)并以適當(dāng)?shù)姆绞街甘净蛴涗洐z流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理。二、紫外-分光光度計(jì)的類型波長(zhǎng)范圍紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（751型分光光度計(jì)）可見(jiàn)分光光度計(jì)（721，722型分光光度計(jì)）光路結(jié)構(gòu)單光束分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)721型分光光度計(jì)1801型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)1.單光束分光光度計(jì)優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉．缺點(diǎn)：受光源、檢測(cè)器的波動(dòng)影響：不能自動(dòng)記錄吸收光譜。國(guó)產(chǎn)721型、722型、751型、724型

0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示二.紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器的類型2.雙光束分光光度計(jì)斬光器優(yōu)點(diǎn)：能自動(dòng)記錄吸收光譜（自動(dòng)掃描）；自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化引起的誤差；是目前用得最多的分光光度計(jì)．光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射率，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長(zhǎng)的函數(shù)記錄下來(lái)3.雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)切光器將兩束光以一定頻率交替照射同一吸收池顯示器顯示兩個(gè)波長(zhǎng)吸光度差值適用于：多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)分析，存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下任務(wù)：掌握儀器的基本操作第四節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的應(yīng)用

紫外-可見(jiàn)分光光度法可用于有機(jī)化合物的定性鑒定、結(jié)構(gòu)推斷和純度檢驗(yàn)。1.未知化合物的定性鑒定

定性依據(jù)：吸收光譜的形狀、吸收峰位置、吸收峰的數(shù)目等。

方法：相同條件下，測(cè)定未知物和已知標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜，對(duì)比圖譜。

目前最常用的標(biāo)準(zhǔn)圖譜：薩特勒標(biāo)準(zhǔn)圖譜庫(kù)一、定性分析一、定性分析與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照1.未知化合物的鑒定與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖對(duì)照最常用：薩特勒標(biāo)準(zhǔn)圖譜共收集46000種化合物的紫外吸收光譜，查找方便2.有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)推斷

有機(jī)物不少基團(tuán)(生色團(tuán))，如羰基、苯環(huán)、硝基、共軛體系等，都有其特征的紫外或可見(jiàn)吸收帶，某些特征基團(tuán)的判別

在204nm附近有中強(qiáng)吸收帶，在260nm附近有弱吸收帶且有精細(xì)結(jié)構(gòu)，是苯環(huán)的特征吸收

200-750nm無(wú)吸收峰，烷烴、飽和脂肪族3.化合物純度檢驗(yàn)化合物在紫外區(qū)沒(méi)有明顯的吸收峰，而雜質(zhì)在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，就可以紫外吸收曲線檢測(cè)出該化合物所含的雜質(zhì)。如乙醇中雜質(zhì)苯測(cè)定檢查(實(shí)驗(yàn)三)二、定量分析定量分析可見(jiàn)分光光度定量分析紫外分光光度定量分析用于有色物質(zhì)的測(cè)定用于有紫外吸收的物質(zhì)的測(cè)定單組分的定量分析A.吸光系數(shù)法方法：已知待測(cè)組分吸光系數(shù)，測(cè)定溶液吸光度，代入朗伯-比爾定律公式計(jì)算含量。A=kbc

單組分的定量分析：只要求測(cè)定某一個(gè)樣品中一種組分，且在選定的測(cè)量波長(zhǎng)下，其他組分沒(méi)有吸收即對(duì)該組分不干擾。定量分析方法例：以鄰二氮菲光度法測(cè)定Fe(Ⅱ)，稱取樣品0.500g，經(jīng)處理后，加入顯色劑，最后定容為50.0mL。用1.0cm的吸收池，在510nm波長(zhǎng)下測(cè)得吸光度A=0.430。計(jì)算樣品中鐵的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。(ε510nm=1.1×104L·mol-1·cm-1)解：根據(jù)朗伯-比爾定律，A=kbc，則c=A/kb=0.430/(1.1×104×1)=3.91×10-5mol/L=2.19×10-6g/mL∴m(%)=2.19×10-6×50×100/0.500=0.0219B.標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法濃度已知標(biāo)液Cs，在一定條件下測(cè)得吸光度As待測(cè)液Cx（濃度相近），在相同條件下測(cè)得吸光度為Ax

根據(jù)朗伯-比爾定律：

As=kbcsAx=kbcx

cx=（Ax/As）·cs

引起誤差的偶然因素較多!

不可靠?。?/p>

C.標(biāo)準(zhǔn)曲線法方法：1.配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含被測(cè)組分空白為參比溶液，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=a+bC。

2.在相同條件下測(cè)定樣品溶液的吸光度，從上述標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的回歸方程計(jì)算出濃度。例題

以鄰二氮菲為顯色劑，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定微量Fe2+，實(shí)驗(yàn)得到標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品的吸光度數(shù)據(jù)（見(jiàn)下表），試確定樣品的濃度。溶液標(biāo)準(zhǔn)1標(biāo)準(zhǔn)2標(biāo)準(zhǔn)3標(biāo)準(zhǔn)4標(biāo)準(zhǔn)5標(biāo)準(zhǔn)6樣品濃度C/(10-5mol·L-1）1.002.003.004.006.008.00Cx吸光度A0.1130.2120.3360.4340.6690.8680.712解：以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用線性處理程序進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程為：A=0.109×105C+0.0073,相關(guān)系數(shù)r2=0.9994標(biāo)準(zhǔn)曲線符合要求，將待測(cè)溶液吸光度代入回歸方程，的試樣濃度為:a，截距b，斜率相關(guān)系數(shù)，接近1線性好，>0.999Cx=(A-0.0073)/0.109×105

=(0.712-0.0073)/0.109×105

〓6.51×10-5mol·L-1在456nm處，用1cm比色皿測(cè)定鋅，數(shù)據(jù)如下：C：2.004.006.008.0010.00A：0.1050.2050.3100.4150.515求：1.繪制吸收曲線

2.K3.A=0.260時(shí)C=？依據(jù)：吸光度具有加和性，同時(shí)測(cè)定兩個(gè)或兩個(gè)以上組分前提：繪制兩種純物質(zhì)（x、y）的吸收光譜，三種情況2.多組分的定量分析

不重疊部分重疊相互重疊xyxyxy考核：

石灰石中微量鐵的測(cè)定83第五節(jié)實(shí)驗(yàn)技術(shù)第一章紫外-可見(jiàn)分光光度法84內(nèi)容概要一、樣品的制備二、儀器測(cè)量條件的選擇三、顯色反應(yīng)條件的選擇85一、樣品的制備

樣品在溶液中測(cè)定，固體轉(zhuǎn)換為溶液溶劑要求：1.對(duì)被測(cè)組分有良好的溶解能力

2.在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)沒(méi)有吸收3.無(wú)毒，不易揮發(fā)，價(jià)格便宜

86二、儀器測(cè)量條件的選擇1.波長(zhǎng)選擇

選最大吸收波長(zhǎng)λmax為測(cè)定波長(zhǎng)

問(wèn)題：如何繪制吸收曲線？選擇原則：最強(qiáng)吸收帶的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng)吸收峰太尖銳，可選用靈敏度低一些的波長(zhǎng)測(cè)量，減少偏差87(1).手動(dòng)繪制原則：先粗測(cè)再細(xì)測(cè)例：鄰菲啰啉分光光度法測(cè)定鐵含量最大吸收波長(zhǎng)的選擇

1.粗測(cè)：在440~560nm范圍內(nèi)，間隔20nm測(cè)一個(gè)點(diǎn)，繪制吸收曲線

選擇500~520nm作為細(xì)測(cè)范圍2.細(xì)測(cè)：在500~520nm范圍內(nèi)，間隔2nm測(cè)一個(gè)點(diǎn)，繪制吸收曲線510nm為最大吸收波長(zhǎng)繪制吸收曲線的方法88(2).自動(dòng)掃描法892.吸光度范圍的選擇光源不穩(wěn)定、讀數(shù)不準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)條件偶然變動(dòng)測(cè)量誤差實(shí)踐證明，只有待測(cè)溶液吸光度A控制在適當(dāng)范圍內(nèi)，儀器測(cè)量誤差才比較小。選擇A的測(cè)定范圍為0.2～0.8相對(duì)誤差

問(wèn)題：如果測(cè)定吸光度過(guò)大或過(guò)小應(yīng)如何處理？朗伯-比耳定律A=kbc

903.儀器狹縫寬度的選擇原則：在不引起吸光度減小的情況下，選取最大的狹縫寬度。一般使用2nm縫寬?。?1三、顯色反應(yīng)條件的選擇1.顯色劑及其用量的選擇顯色反應(yīng)：將待測(cè)組分轉(zhuǎn)化為有色物質(zhì)顯色劑：與待測(cè)組分形成有色物質(zhì)的試劑a.顯色劑的選擇要求：（1）與待測(cè)離子顯色反應(yīng)的產(chǎn)物組成恒定、穩(wěn)定性好、顯色條件易于控制；

（2）產(chǎn)物有較強(qiáng)的吸收能力，即ε大；92

b.顯色劑用量的選擇固定被測(cè)組分濃度和其他條件，加入不同量的顯色劑，分別測(cè)定吸光度A；

繪制吸光度A與顯色劑用量CR的關(guān)系曲線：CRabab×√√932.反應(yīng)的pH（顯色反應(yīng)的重要條件）同種金屬離子與同種顯色劑反應(yīng)，生成的配合物配位數(shù)不同、顏色不同。如Fe3+與磺基水楊酸在不同pH條件下的配合物。pH對(duì)顯色反應(yīng)的影響：介質(zhì)酸度解離程度顯色反應(yīng)完全程度94確定pH的方法：固定溶液中待測(cè)組分和顯色劑濃度，改變?nèi)芤?緩沖溶液控制)的酸度(pH)繪制A～pH曲線，從中找出為pH范圍。

ab平坦部分95小結(jié)5.pH值的選擇1.測(cè)量波長(zhǎng)的選擇3.狹縫寬度的選擇4.顯色劑用量的選擇2.吸光度范圍的選擇最大吸收波長(zhǎng)A在0.2~0.8之間一般2nm縫寬曲線平坦部分曲線平坦部分96課后思考題

在