HJ784-2016土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測定高效液相色譜法方法驗證報告

檢測分析方法驗證報告（驗）字〔2022〕第 號方法名稱：土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測定液相色譜法 HJ784-2016 項目主編單位： 驗證單位： 項目負責人及職稱： （檢測員） 通訊地址： 聯(lián)系方式： 報告日期： 2022年03月17日

土壤和沉積物多環(huán)芳烴的測定高效液相色譜法一、適用范圍標準HJ784-2016測定土壤和沉積物中十六種多環(huán)芳烴的液液萃取高效液相色譜法。適用于土壤和沉積物中十六種多環(huán)芳烴的測定。十六種多環(huán)芳烴（PAHs）包括：萘、苊、二氫苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[ghi]苝。當取樣量為10.0g，定容體積為1.0ml時，用紫外檢測器測定16種多環(huán)芳烴的方法檢出限為3μg/kg～5μg/kg，測定下限為12μg/kg～20μg/kg。二、方法原理土壤和沉積物樣品中的多環(huán)芳烴用合適的萃取方法（索氏提取、加壓流體萃取等）提取，根據樣品基體干擾情況采取合適的凈化方法（硅膠層析柱、硅膠或硅酸鎂固相萃取柱等）對萃取液進行凈化、濃縮、定容，用配備紫外/熒光檢測器的高效液相色譜儀分離檢測，以保留時間定性，外標法定量。三、試劑和材料3.1乙腈（CH3CN）：HPLC級。3.2正己烷（C6H14）：HPLC級。3.3二氯甲烷（CH2Cl2）：HPLC級。3.4丙酮（CH3COCH3）：HPLC級。3.5丙酮-正己烷混合溶液：1+1。用丙酮和正己烷按1:1的體積比混合。3.6二氯甲烷-正己烷混合溶液：2+3。用二氯甲烷和正己烷按2:3的體積比混合。3.7二氯甲烷-正己烷混合溶液：1+1。用二氯甲烷和正己烷按1:1的體積比混合。3.8干燥劑：無水硫酸鈉（Na2SO4）或粒狀硅藻土置于馬弗爐中400℃烘4h，冷卻后置于磨口玻璃瓶中密封保存。3.9硅膠：粒徑75μm～150μm（200目～100目）。使用前，應置于平底托盤中，以鋁箔松覆，130℃活化至少16h。3.10玻璃層析柱：內徑約20mm，長10cm～20cm，帶聚四氟乙烯活塞。3.11硅膠固相萃取柱：1000mg/6ml。3.12硅酸鎂固相萃取柱：1000mg/6ml。3.13石英砂：粒徑150μm～830μm（100目～20目），使用檢驗，確認無干擾。3.14玻璃棉或玻璃纖維濾膜：在馬弗爐中400℃烘1h，冷卻后置于磨口玻璃瓶中密封保存。3.15氮氣：純度≥99.999%。3.16試劑信息一覽表序號試劑內部編號生產廠家純度1乙腈（CH3CN）歐普森色譜純2甲醇（CH3OH）歐普森色譜純3二氯甲烷（CH2Cl2）科密歐色譜純4正己烷（C6H14）科密歐色譜純5硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O）分析純6無水硫酸鈉（Na2SO4）分析純7氯化鈉（NaCl）分析純8丙酮科密歐色譜純3.17標準溶液信息一覽表名稱內部編號濃度多環(huán)芳烴標準貯備液200mg/L十氟聯(lián)苯標準貯備溶液1000ug/mL多環(huán)芳烴標準使用液/20.0mg/L十氟聯(lián)苯標準使用溶液/40μg/ml四、儀器設備、人員、環(huán)境4.1儀器與設備儀器設備名稱型號編號檢定日期檢定有效期液相色譜儀（HPLC）1260infinityⅡ色譜柱5μm×25cm×4.6mm/索氏提取器K-D濃縮器//干燥柱長250mm，內徑10mm/硅膠柱1000mg/6.0ml/C18固相萃取柱1000mg/6.0ml/弗羅里硅土柱1000mg/6.0ml/4.2人員信息姓名學歷專業(yè)從事相關工作年限持證上崗情況人員能力確認4.3環(huán)境信息檢測日期實驗地點環(huán)境溫度（℃）相對濕度（%RH）2022.3.17色譜二室25542022.3.17色譜二室24602022.3.17色譜二室2562四、分析步驟4.1除去樣品中的枝棒、葉片、石子等異物，稱取樣品10g（精確到0.01g），加入適量無水硫酸鈉，研磨均化成流沙狀。如果使用加壓流體提取，則用粒狀硅藻土脫水。4.2提?。簩⒅苽浜玫脑嚇臃湃氩Ａ坠芑蚣堎|套管內，加入50.0μl十氟聯(lián)苯使用液，將套管放入索氏提取器中。加入100ml丙酮-正己烷混合溶液，以每小時不小于4次的回流速度提取16h~18h。4.3過濾和脫水：在玻璃漏斗上墊一層玻璃棉或玻璃纖維濾膜，加入約5g無水硫酸鈉，將提取液過濾到濃縮器皿中。用適量丙酮-正己烷混合溶液洗滌提取容器3次，再用適量丙酮-正己烷混合溶液沖洗漏斗，洗液并入濃縮器皿。4.4濃縮：用濃縮裝置濃縮至1mL。如不需凈化，加入約3mL乙腈，再濃縮至約1mL，將溶劑完全轉化為乙腈。如需凈化，加入約5mL正己烷并濃縮至約1mL，重復此濃縮過程3次，將溶劑完全轉化為正己烷，再濃縮至約1ml，待凈化。4.5凈化用40ml正己烷預淋洗層析柱，淋洗速度控制在2ml/min，在頂端無水硫酸鈉暴露于空氣之前，關閉層析柱底端聚四氟乙烯活塞，棄去流出液。將濃縮后的約1ml提取液移入層析柱，用2ml正己烷分3次洗滌濃縮器皿，洗液全部移入層析柱，在頂端無水硫酸鈉曝露于空氣之前，加入25ml正己烷繼續(xù)淋洗，棄去流出液。用25ml二氯甲烷-正己烷混合溶液洗脫，洗脫液收集于濃縮器皿中，用氮吹濃縮法（或其他濃縮方式）將洗脫液濃縮至約1ml，加入約3ml乙腈，再濃縮至1ml以下，將溶劑完全轉換為乙腈，并準確定容至1.0ml待測。凈化后的待測試樣如不能及時分析，應于4℃下冷藏、避光、密封保存，30d內完成分析。五、分析步驟5.1儀器條件紫外檢測器的波長：254nm、220nm；進樣量：10μL；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min;梯度洗脫程序：時間（min）乙腈%水%060408604018100028100028.560403560405.2標準曲線的繪制取一定量多環(huán)芳烴標準使用液于乙腈中，制備6個濃度點的標準系列，多環(huán)芳烴質量濃度分別為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μg/ml。按照色譜參考條件，由低濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以多環(huán)芳烴類化合物的質量濃度（μg/mL）為橫坐標，對應的色譜峰面積為縱坐標，建立校準曲線。標準曲線數據見附件。5.3樣品的測定取10μl待測樣品注入高效液相色譜儀中。記錄色譜峰的保留時間和峰面積。5.4空白試驗在分析樣品的同時，應做空白試驗，即用蒸餾水代替水樣，按與樣品測定相同步驟分析，檢查分析過程中是否有污染。六、結果計算與表示6.1土壤樣品中多環(huán)芳烴的含量（μg/kg），按照以下公式進行計算。P式中： Pi ——樣品中組分i的質量濃度，μg/kgPxi ——從標準曲線中查得組分i的質量濃度，mg/LV ——萃取液濃縮后的體積，ml；m ——樣品量（濕重），g；Wdm——6.2沉積物樣品中多環(huán)芳烴的含量（μg/kg），按照以下公式進行計算。P式中： Pi ——樣品中組分i的質量濃度，μg/kgPxi ——從標準曲線中查得組分i的質量濃度，mg/LV ——萃取液濃縮后的體積，ml；m ——樣品量（濕重），g；W ——沉積物樣品含水率，%。七、方法檢出限的計算向空白土壤（硅藻土）中加入100μL多環(huán)芳烴類化合物標準溶液（1μg/mL），配置成含各目標化合物濃度為0.1ug/L標準溶液，按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定7次，將各測定結果換算為樣品中的濃度，計算7次平行測定的標準偏差，按下式計算方法檢出限。MDL=t(n-1,0.99)×S式中：MDL——方法檢出限；n——樣品的平行測定次數；t——自由度為n-1，置信度為99%時的t分布（單側）；S——n次平行測定的標準偏差。其中，當自由度為n-1=6時，置信度為99%時的t值為3.143。檢出限數據見附件。八、精密度測定結果精密度是指在規(guī)定的條件下，用同一方法對一均勻試樣進行重復分析時，所得分析結果之間的一致性程度，精密度用標準偏差或相對標準偏差(又叫變異系數)表示，通常與被測物的含量水平有關。取編號為的土樣6份，向每份中加入30μL多環(huán)芳烴類化合物標準溶液（1μg/mL），配置成含目標化合物濃度為0.03μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定6次，將各測定結果換算為樣品中的濃度，計算6次平行測定的平均值、標準偏差和相對標準偏差。按照上述過程，分別取編號為002的土樣6份，配置成含目標化合物濃度為0.45μg/L、5.00μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定6次，將各測定結果換算為樣品中的濃度，計算6次平行測定的平均值、標準偏差和相對標準偏差。測定數據見附件。取編號為111的沉積物樣品6份，向每份中加入30μL多環(huán)芳烴類化合物標準溶液（1μg/mL），配置成含目標化合物濃度為0.03μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定6次，將各測定結果換算為樣品中的濃度，計算6次平行測定的平均值、標準偏差和相對標準偏差，測定數據見附件。按照上述過程，分別取編號為002的沉積物樣品6份，配置成含目標化合物濃度為0.45μg/L、5.00μg/L的樣品。按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定6次，將各測定結果換算為樣品中的濃度，計算6次平行測定的平均值、標準偏差和相對標準偏差。測定數據見附件。九、準確度測定結果向土樣中加入250μL多環(huán)芳烴類化合物標準溶液（1.0μg/mL），按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定7次，計算加標回收率，測定結果見附件。向沉積物中加入250μL多環(huán)芳烴類化合物標準溶液（10.0μg/mL），按照液液萃取方法萃取樣品，萃取液經脫水、濃縮、凈化、和定容后按照分析步驟全過程平行測定7次，計算加標回收率，測定結果見附件。十、實樣測試選擇編號為004的實際土壤樣品，按照樣品處理過程后按照分析步驟全過程進行測定，測定結果如下：名稱實樣測試數據測定濃度（μg/mL）樣品濃度（ug/L）萘0.00000.0000苊0.00000.0000芴0.03130.0157二氫苊0.00720.0036菲0.00000.0000蒽0.00000.0000熒蒽0.03350.0168芘0.03070.0154?0.00000.0000苯并[a]蒽0.00000.0000苯并[b]熒蒽0.00000.0000苯并[k]熒蒽0.02810.0141苯并[a]芘0.00000.0000二苯并[a,h]蒽0.03300.0165苯并[g,h,i]苝0.04050.0203茚并[1,2,3-cd]芘0.03680.0184選擇編號為004的實際沉積物樣品，按照樣品處理過程后按照分析步驟全過程進行測定，測定結果如下：名稱實樣測試數據測定濃度（μg/mL）樣品濃度（ug/L）萘0.00000.0000苊0.00000.0000芴0.03130.0157二氫苊0.00720.0036菲0.00000.0000蒽0.00000.0000熒蒽0.03350.0168芘0.03070.0154?0.00000.0000苯并[a]蒽0.00000.0000苯并[b]熒蒽0.00000.0000苯并[k]熒蒽0.02810.0141苯并[a]芘0.00000.0000二苯并[a,h]蒽0.03300.0165苯并[g,h,i]苝0.04050.0203茚并[1,2,3-cd]芘0.03680.0184十一、評價與驗證結論11.1方法檢出限評價標準方法中萃取樣品為1L時，方法檢出限為0.002-0.016ug/L，檢測下限為：0.008-0.064ug/L；本次實驗中16種多環(huán)芳烴的方法檢出限為0.0003-0.0052ug/L，檢測下限：0.0037-0.0206ug/L均小于標準方法檢出限及檢測下限。11.2精密度評價標準方法中相對標準偏差為±15.0%；本次實驗中低中高三種不同濃度的相對標準偏差分別為0.21%-2.51%、0.09-0.42%和0.06-