《動(dòng)物全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)》

ICS11.220

B41

T/CVDA

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CVDAXX-202X

動(dòng)物全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)

Automaticnucleicacidanalysissystemforveterinarypurposes

202X-XX-XX發(fā)布202X-XX-XX實(shí)施

中國(guó)獸藥協(xié)會(huì)發(fā)布

動(dòng)物全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)（以下簡(jiǎn)稱“檢測(cè)系統(tǒng)”）的術(shù)語(yǔ)和定義，規(guī)定了要求、

標(biāo)識(shí)、標(biāo)簽和使用說(shuō)明書(shū)、包裝、運(yùn)輸和和儲(chǔ)存等內(nèi)容。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于集磁珠法或柱膜法等核酸的提取、純化技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)于一體的檢測(cè)系統(tǒng)，

實(shí)現(xiàn)對(duì)動(dòng)物核酸樣本的提取、擴(kuò)增、檢測(cè)、分析。

本標(biāo)準(zhǔn)不適用于“一步法注1”、“半自動(dòng)注2”的檢測(cè)系統(tǒng)。

注1：一步法是指，未經(jīng)過(guò)核酸的提取、純化，直接進(jìn)行核酸擴(kuò)增；

注2：半自動(dòng)是指，檢測(cè)系統(tǒng)的某些步驟實(shí)現(xiàn)了機(jī)械化，其他步驟仍需操作者參與。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件其最新版本（括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志

GB4793.1測(cè)量、控制和實(shí)驗(yàn)室用電氣設(shè)備的安全要求第1部分：通用要求

GB4793.6測(cè)量、控制和實(shí)驗(yàn)室用電氣設(shè)備的安全要求第6部分：實(shí)驗(yàn)室用材料加熱設(shè)備的特殊

要求

GB4793.9測(cè)量、控制和實(shí)驗(yàn)室用電氣設(shè)備的安全要求第9部分：實(shí)驗(yàn)室用分析和其他目的自動(dòng)

和半自動(dòng)設(shè)備的特殊要求

GB/T9969工業(yè)產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)總則

GB/T14710醫(yī)用電氣環(huán)境要求及試驗(yàn)方法

GB/T18268.1測(cè)量、控制和實(shí)驗(yàn)室用的電設(shè)備電磁兼容性要求第1部分：通用要求

YY/T0466.1醫(yī)療器械用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號(hào)第1部分：通用要求

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于文件。

1

3.1

全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)

實(shí)現(xiàn)核酸提取和純化、體系構(gòu)建、基因擴(kuò)增和檢測(cè)全流程自動(dòng)化的核酸檢測(cè)系統(tǒng)。

3.2

核酸提取和純化

包含樣本裂解釋放核酸核酸被結(jié)合進(jìn)行洗滌、純化和洗脫的過(guò)程。

3.3

聚合酶鏈反應(yīng)polymerasechainreaction，PCR

聚合酶鏈反應(yīng)或多聚酶鏈反應(yīng)是一種對(duì)特定的DNA或RNA片段在體外進(jìn)行擴(kuò)增的方法，由變性

一退火一延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。

3.4

等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)IsothermalAmplificationTechnology，ITA

等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，其反應(yīng)過(guò)程始終維持在恒定的溫度下，通過(guò)添加不同活性的酶和各自特異性引物

來(lái)達(dá)到快速核酸擴(kuò)增的目的。

3.5

表面磁通密度surfacemagneticflux-density

也稱磁感應(yīng)強(qiáng)度的，表示垂直穿過(guò)單位面積的磁力線的疏密程度。

3.6

提取模塊溫度均勻性u(píng)niformityofextractionmodule

特指，核酸提取溫控模塊對(duì)應(yīng)的樣本孔之間的溫度一致性。

3.7

平均升溫速率meanheatingrate

升溫過(guò)程中模塊單位時(shí)間內(nèi)上升的平均溫度度數(shù)。

3.8

擴(kuò)增模塊最大升溫速率maximumheatingrateofamplificationmodule

特指，在核酸擴(kuò)增升溫過(guò)程中，溫控模塊單位時(shí)間上升的最大溫度度數(shù)。

3.9

擴(kuò)增模塊最大降溫速率maximumcoolingrateofamplificationmodule

特指，在核酸擴(kuò)增降溫過(guò)程中，溫控模塊單位時(shí)間下降的最大溫度度數(shù)。

3.10

擴(kuò)增模塊平均降溫速率meancoolingrateofamplificationmodule

2

特指，在核酸擴(kuò)增降溫過(guò)程中，溫控模塊單位時(shí)間內(nèi)下降的平均溫度度數(shù)。

3.11

擴(kuò)增模塊模塊控溫精度consistencyofamplificationmodule

特指，在核酸擴(kuò)增，一個(gè)循環(huán)中，恒溫計(jì)時(shí)開(kāi)始10s內(nèi)到計(jì)時(shí)結(jié)束之間數(shù)據(jù)采集儀所記錄的最高

溫度，與數(shù)據(jù)采集儀所記錄的最低溫度差值的一半。

3.12

擴(kuò)增模塊溫度準(zhǔn)確度accuracyofamplificationmodule

特指，在核酸擴(kuò)增，一個(gè)循環(huán)中，恒溫計(jì)時(shí)開(kāi)始10s內(nèi)到計(jì)時(shí)結(jié)束之間，每間隔一定的時(shí)間數(shù)據(jù)

采集儀所記錄溫度的平均值與模塊設(shè)置溫度差值的絕對(duì)值。

3.13

擴(kuò)增模塊溫度均勻性u(píng)niformityofamplificationmodule

特指，核酸擴(kuò)增溫控模塊對(duì)應(yīng)的樣本孔之間的溫度一致性。

3.14

擴(kuò)增模塊溫度持續(xù)時(shí)間準(zhǔn)確度durationaccuracyofamplificationmodule

特指，核酸擴(kuò)增溫控模塊設(shè)定恒溫時(shí)間與數(shù)據(jù)采集儀所記錄恒溫（符合溫度顯示準(zhǔn)確度要求時(shí)即

認(rèn)為恒溫）時(shí)間差值的絕對(duì)值。

3.15

熒光素fluorochrome

由短波長(zhǎng)激發(fā)光激發(fā)，釋放出可見(jiàn)光的試劑。

示例：常見(jiàn)的熒光素有SYBRGreen、FAM、HEX、TexasRed、VIC、Cy3、ROX、Cy5等。

3.16

熒光強(qiáng)度檢測(cè)重復(fù)性repeatibilityoffluorescentintensity

對(duì)同一檢測(cè)孔在同一熒光條件下重復(fù)熒光強(qiáng)度檢測(cè)，其檢測(cè)值的一致性。

3.17

熒光強(qiáng)度檢測(cè)精密度precisionoffluorescentintensity

對(duì)多個(gè)檢測(cè)孔在同一熒光條件下重復(fù)熒光強(qiáng)度檢測(cè)，其檢測(cè)值的一致性。

3.18

閾值循環(huán)數(shù)Ct（Cp）cyclethreshold，crossingpoint

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中，反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)指數(shù)擴(kuò)增時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)周期數(shù)。主要的計(jì)算方式

是以擴(kuò)增過(guò)程前3~15個(gè)循的熒光值的10倍標(biāo)準(zhǔn)差為閾值，當(dāng)熒光值超過(guò)閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)則為閾值循

3

環(huán)數(shù)（Ct）。

4技術(shù)要求

4.1外觀

4.1.1儀器表面應(yīng)整潔，不應(yīng)有明顯劃痕、銹蝕、及機(jī)械損傷；

4.1.2開(kāi)關(guān)、按鍵應(yīng)靈活、可靠，緊固件應(yīng)牢固可靠，不得有松動(dòng)；

4.1.3運(yùn)動(dòng)部件應(yīng)平穩(wěn)，不應(yīng)卡住、突跳及顯著空回，鍵組回跳應(yīng)靈活；

4.1.4圖形符號(hào)和文字應(yīng)準(zhǔn)確、清晰均不得有劃痕，應(yīng)注明危險(xiǎn)提示標(biāo)示，如紫外、加熱、生物危

害、機(jī)械傷害等；

4.2核酸提取

4.2.1加樣準(zhǔn)確性及重復(fù)性

對(duì)具有加樣功能的核酸提取模塊進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)表1選擇不少于3種體積的加樣量，應(yīng)符合準(zhǔn)

確性和重復(fù)性要求。

表1加樣準(zhǔn)確性及重復(fù)性要求

加樣范圍準(zhǔn)確性E，重復(fù)性CV，

μL%%

≤10≤±10≤5

11～50≤±8≤5

51～200≤±5≤2

＞200≤±2≤1

注：參照附錄A轉(zhuǎn)換純水體積和質(zhì)量數(shù)據(jù)。

4.2.2提取模塊溫度控制

具有溫度控制功能的核酸提取模塊的溫度準(zhǔn)確性、溫度均勻性和平均升溫速率均應(yīng)符合如下要求：

a)溫度準(zhǔn)確性不大于5℃；

b)溫度均勻性不大于6℃；

c)制造商應(yīng)規(guī)定平均升溫速率的要求。

4.2.3表面磁通密度

檢測(cè)系統(tǒng)的核酸提取模塊配備有磁吸裝置的，制造商應(yīng)規(guī)定磁棒或磁力架的表面磁通密度要求。

4.2.4磁珠殘留

4

采用磁珠法核酸提取程序的，磁珠在不同試劑孔位移動(dòng)后，孔位中不應(yīng)有明顯可見(jiàn)的殘留。

4.2.5核酸污染率

陰性樣品的提取檢測(cè)結(jié)果不得出現(xiàn)陽(yáng)性。

4.2.6核酸提取的一致性

選用同一均勻的高、中、低三種濃度陽(yáng)性樣本的提取結(jié)果應(yīng)符合CV值不大于15%。樣本濃度應(yīng)

符合如下要求：

4.2.6.1高濃度不低于中濃度10倍；

4.2.6.2中濃度不低于低濃度10倍。

4.3核酸擴(kuò)增

4.3.1擴(kuò)增模塊升溫速率

應(yīng)符合a)和b)的要求：

a)平均升溫速率，從50℃~90℃，應(yīng)不小于1.5℃/s；

b)最大升溫速率，從50℃~90℃，應(yīng)不小于2.5℃/s。

4.3.2擴(kuò)增模塊降溫速率

應(yīng)符合a)和b)的要求：

a)平均降溫速率，從90℃~50℃，應(yīng)不小于1.5℃/s；

b)最大降溫速率，從90℃~50℃，應(yīng)不小于2.0℃/s。

4.3.3擴(kuò)增模塊控溫精度

應(yīng)不大于0.5℃。

4.3.4擴(kuò)增模塊溫度準(zhǔn)確度

測(cè)定值與設(shè)置溫度差值應(yīng)不大于±0.5℃。

4.3.5擴(kuò)增模塊溫度均勻性

溫度差值應(yīng)在1℃范圍內(nèi)。

4.3.6擴(kuò)增模塊溫度持續(xù)時(shí)間準(zhǔn)確度

溫度持續(xù)時(shí)間與編制溫度時(shí)間的相對(duì)偏差在±5%范圍內(nèi)。

4.4熒光強(qiáng)度檢測(cè)

4.4.1熒光強(qiáng)度檢測(cè)重復(fù)性

5

在儀器測(cè)定范圍內(nèi)，用高、中、低濃度每種校準(zhǔn)染料重復(fù)檢測(cè)，其變異系數(shù)（CV，%）應(yīng)不大3%。

4.4.2熒光強(qiáng)度檢測(cè)精密度

在儀器測(cè)定范圍內(nèi)，用高、中、低濃度每種校準(zhǔn)染料進(jìn)行檢測(cè)，其變異系數(shù)（CV，%）應(yīng)不大于

5%。

4.5不同通道熒光干擾

其他通道熒光檢測(cè)強(qiáng)度不高于目標(biāo)通道熒光閾值。

4.6樣本檢測(cè)重復(fù)性

對(duì)高、中、低濃度樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)所得Ct值（或者濃度對(duì)數(shù)值）的CV不大于3%。

4.7線性

4.7.1樣本線性

對(duì)系列稀釋梯度濃度的樣本（不少于5個(gè)濃度梯度）進(jìn)行檢測(cè)，各濃度Ct值與濃度對(duì)數(shù)值的線性

回歸系數(shù)r絕對(duì)值應(yīng)不低于0.980。

4.7.2熒光線性

對(duì)系列稀釋熒光染料物質(zhì)的樣本（不少于5個(gè)濃度梯度）進(jìn)行檢測(cè)，各濃度熒光測(cè)定值與稀釋比

例的線性回歸系數(shù)r應(yīng)不低于0.990。

4.8電氣安全要求

應(yīng)符合GB4793.1、GB4793.6、GB4793.9中相關(guān)規(guī)定。

4.9電磁兼容性要求

應(yīng)符合GB/T18268.1和GB/T18268.26中相關(guān)規(guī)定。

4.10環(huán)境試驗(yàn)要求

應(yīng)符合GB/T14710-2009中氣候環(huán)境試驗(yàn)Ⅱ組，機(jī)械環(huán)境試驗(yàn)Ⅱ組的要求；運(yùn)輸試驗(yàn)、電源電壓適

應(yīng)能力試驗(yàn)應(yīng)分別符合GB/T14710-2009中第4章、第5章的要求。

5試驗(yàn)方法

5.1正常工作條件

a)電源電壓：220V士22V，50Hz士1Hz。

b)環(huán)境溫度：10℃~30℃

6

c)相對(duì)濕度：20%ＲＨ~80%ＲＨ

d)大氣壓力：85.0kPa~106.0kPa。

注：a)～d)中的條件與生產(chǎn)那企業(yè)標(biāo)稱不一致時(shí)，以產(chǎn)品標(biāo)稱為準(zhǔn)，但需經(jīng)相應(yīng)環(huán)境試驗(yàn)驗(yàn)證。

5.2外觀

在自然光下，觀察設(shè)備外觀，應(yīng)符合4.1的要求。

5.3核酸提取

5.3.1加樣準(zhǔn)確性及重復(fù)性

采用稱重法進(jìn)行檢測(cè)，操作方法如下：

a）使用脫氣純水進(jìn)行試驗(yàn)；

b）將儀器、純水等置于恒溫、恒濕的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)平衡2小時(shí)后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)備與儀器適配的容器，

在分度值為0.1mg的電子天平上調(diào)零，去除容器空白質(zhì)量；

c）將容器放置于儀器的移液目標(biāo)位置，控制移液器向容器內(nèi)移取規(guī)定量純水，在電子天平上稱

量其質(zhì)量M測(cè)試.i；

d）每種規(guī)定移液量，重復(fù)稱量10次。按公式（1）計(jì)算每次的實(shí)際加入量V測(cè)試.i，按公式

（2）計(jì)算每種加入量的移液相對(duì)偏差E，按公式（3）計(jì)算每種規(guī)定量移液的變異系數(shù)CV，結(jié)果應(yīng)

符合4.2.1的要求。

M測(cè)試i（1）

V測(cè)試i

式中：

V測(cè)試.i——實(shí)際加入量；

M測(cè)試.i——實(shí)際測(cè)定質(zhì)量；

ρ——測(cè)定溫度條件下的脫氣純水密度，見(jiàn)附錄A。

V測(cè)試V規(guī)定

E100%

V規(guī)定（2）

式中：

E——移液相對(duì)偏差；

V測(cè)試——實(shí)際加樣量的算數(shù)平均值；

V規(guī)定——加樣量設(shè)定值。

7

n2

i1(V測(cè)試iV測(cè)試)

n1（3）

CV

V測(cè)試

式中：

CV——變異系數(shù)；

n——加樣量測(cè)試重復(fù)次數(shù)；

i——測(cè)定次數(shù)編號(hào)，i=1，2，…10；

V測(cè)試.i——實(shí)際加入量；

V測(cè)試——實(shí)際加樣量的算數(shù)平均值。

5.3.2提取模塊溫度控制

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)溫度循環(huán)的文件。將溫度傳感器的感溫頭外涂上

適量導(dǎo)熱介質(zhì)（例：礦物油或?qū)峁柚龋?，將溫度傳感器的感溫頭放入模塊的測(cè)試孔中，另一端連

接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)啟數(shù)據(jù)采集儀，將核酸提取溫控模塊溫度設(shè)定在目標(biāo)溫度，待顯示溫度達(dá)到設(shè)定溫

度值恒溫10s后，采集數(shù)據(jù)。檢測(cè)孔應(yīng)在儀器中均勻分布，當(dāng)核酸提取溫控模塊少于8孔，至少布置2

個(gè)測(cè)試點(diǎn)；當(dāng)儀器有8孔或以上，至少布置5個(gè)測(cè)試點(diǎn)。

運(yùn)行編輯的文件，顯示溫度到達(dá)設(shè)定溫度，恒溫10s后，計(jì)時(shí)60s，每10s記錄一次溫度為T(mén)（ii=1，

2…6），按照公式（4）計(jì)算溫度準(zhǔn)確性，結(jié)果應(yīng)符合4.2.2a)的要求；記錄測(cè)試點(diǎn)的最高溫度和最低

溫度，按照公式（5）計(jì)算溫度均勻性，結(jié)果應(yīng)符合4.2.2b)的要求；設(shè)置溫控模塊從設(shè)定溫度T1升高

至T2目標(biāo)溫度，測(cè)試記錄溫控模塊從T1升至T2±0.5℃的時(shí)間t，按照公式（6）計(jì)算平均升溫速率，結(jié)

果應(yīng)符合4.2.2c)的要求。

（）

△T準(zhǔn)確性=Ti-Ts4

式中：

△T準(zhǔn)確性——Ti值與設(shè)定溫度Ts的差值；

Ti——每10s記錄一次的溫度（i=1，2…6）；

Ts——設(shè)定的溫度。

（）

△T均勻性=Tmax-Tmin5

式中：

△T均勻性——測(cè)試點(diǎn)的最高溫度和最低溫度的差值；

Tmax——每10s記錄一次的溫度（i=1，2…6）中的最高溫度；

8

Tmin——每10s記錄一次的溫度（i=1，2…6）中的最低溫度。

TBTA

V升M（）

t6

式中：

V升M——平均升溫速率；

TA——設(shè)定溫度；

TB——目標(biāo)溫度；

t——從TA到達(dá)TB的時(shí)間。

5.3.3表面磁通密度

若適用，測(cè)量工作磁極的表面磁通密度，判定結(jié)果是否符合4.2.3的要求.

注：使用高斯計(jì)或特斯拉計(jì)，對(duì)磁棒端面或磁力架表面進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量時(shí)，合理放置特斯拉計(jì)的

傳感器前端的霍爾元件，令傳感器緊貼被測(cè)表面，同時(shí)被測(cè)磁場(chǎng)的磁力線垂直穿過(guò)霍爾元件。

5.3.4磁珠殘留

準(zhǔn)備檢測(cè)系統(tǒng)配套核酸提取或純化試劑盒及相應(yīng)的耗材，按照試劑盒配套程序運(yùn)行，磁珠在洗脫

步驟后，取出適配耗材，離心或磁吸附后，目視適配耗材中，應(yīng)符合4.2.4要求。

5.3.5核酸污染率

準(zhǔn)備檢測(cè)系統(tǒng)配套核酸提取或純化試劑盒及相應(yīng)的耗材，將高濃度陽(yáng)性樣本和陰性樣本進(jìn)行間隔

排列加入適配耗材中，按照試劑盒配套程序運(yùn)行。將提取完成的陰性樣本核酸溶液使用適配的PCR檢

測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果符合4.2.5要求。

注：高濃度樣本為檢測(cè)靶標(biāo)Ct值小于25的樣本。

5.3.6核酸提取的一致性

準(zhǔn)備檢測(cè)系統(tǒng)配套核酸提取或純化試劑盒及相應(yīng)的耗材，將同一高、中、低濃度陽(yáng)性樣本照試劑

盒配套程序運(yùn)行，若是單孔不少于3次重復(fù)，若是多孔不少于10次重復(fù)，完成核酸提取步驟，結(jié)果應(yīng)

符合4.2.6要求：

a)提取完成的核酸，若是動(dòng)物組織樣本，使用紫外分光光度計(jì)測(cè)量濃度；

b)提取完成的核酸，若是病原體，應(yīng)使用配套PCR試劑，計(jì)算Ct值；

5.4核酸擴(kuò)增

5.4.1擴(kuò)增模塊升溫速率

9

5.4.1.1測(cè)溫程序編輯

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)在45℃（恒溫2min）和95℃（恒溫2min）之間

循環(huán)的文件。將溫度傳感器的感溫頭外涂上適量導(dǎo)熱介質(zhì)（例：礦物油或?qū)峁柚龋湃肽K的

測(cè)試孔（該孔應(yīng)盡量靠近儀器內(nèi)部傳感器）中，另一端連接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)啟數(shù)據(jù)采集儀，確認(rèn)儀器

工作正常，運(yùn)行編輯的文件，用數(shù)據(jù)采集儀記錄儀器顯示溫度到達(dá)設(shè)定溫度，恒溫10s后至恒溫結(jié)束

這段時(shí)間內(nèi)的溫度變化。

5.4.1.2擴(kuò)增模塊平均升溫速率

取50℃±0.5℃范圍內(nèi)一溫度點(diǎn)，溫度記為T(mén)A，取90℃±0.5℃范圍內(nèi)一溫度點(diǎn)，溫度記為T(mén)B，從

TA到達(dá)TB的時(shí)間記為t，按照公式（7）計(jì)算平均升溫速率，結(jié)果應(yīng)符合4.3.1a)的要求。

TBTA（7）

V升M

t

式中：

V升M——平均升溫速率；

TB——90℃±0.5℃范圍內(nèi)任一溫度點(diǎn)；

TA——50℃±0.5℃范圍內(nèi)任一溫度點(diǎn)；

t——TA到達(dá)TB的時(shí)間。

注：當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的，則此指標(biāo)不適用。

5.4.1.3擴(kuò)增模塊最大升溫速率

設(shè)置溫度采集時(shí)間間隔為△t，△t≤1s并盡可能足夠小，掃描溫度從50℃±0.5℃升至90℃±0.5℃過(guò)

程中的瞬時(shí)最大溫度變化（△Tmax），按照公式（8）計(jì)算最大升溫速率，結(jié)果應(yīng)符合4.3.1b)的要求。

??

?=???（8）

升?????

式中：

V升max——最大升溫速率；

△Tmax——溫度從50℃±0.5℃升至90℃±0.5℃過(guò)程中的瞬時(shí)最大溫度變化；

△t——溫度采集時(shí)間間隔。

注：當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的，則此指標(biāo)不適用。

5.4.2擴(kuò)增模塊降溫速率

5.4.2.1測(cè)溫程序編輯

10

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)在45℃（恒溫2min）和95℃（恒溫2min）之間

循環(huán)的文件。將溫度傳感器的感溫頭外涂上適量導(dǎo)熱介質(zhì)（例：礦物油或?qū)峁柚龋?，放入模塊的

測(cè)試孔（該孔應(yīng)盡量靠近儀器內(nèi)部傳感器）中，另一端連接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)啟數(shù)據(jù)采集儀，確認(rèn)儀器

工作正常，運(yùn)行編輯的文件，用數(shù)據(jù)采集儀記錄儀器顯示溫度到達(dá)設(shè)定溫度，恒溫10s后至恒溫結(jié)束

這段時(shí)間內(nèi)的溫度變化。

5.4.2.2擴(kuò)增模塊平均降溫速率

取90℃±0.5℃范圍內(nèi)一溫度點(diǎn)，溫度記為T(mén)A，取50℃±0.5℃范圍內(nèi)一溫度點(diǎn)，溫度記為T(mén)B，從

TA到達(dá)TB的時(shí)間記為t，按照公式（9）計(jì)算平均升溫速率，結(jié)果應(yīng)符合4.3.2a)的要求。

TBTA（9）

V降M

t

式中：

V降M——平均降溫速率；

TB——50℃±0.5℃范圍內(nèi)任一溫度點(diǎn)；

TA——90℃±0.5℃范圍內(nèi)任一溫度點(diǎn)；

t——TA到達(dá)TB的時(shí)間。

注：當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的，則此指標(biāo)不適用。

5.4.2.3擴(kuò)增模塊最大降溫速率

設(shè)置溫度采集時(shí)間間隔為△t，△t≤1s并盡可能足夠小，掃描溫度從90℃±0.5℃升至50℃±0.5℃

過(guò)程中的瞬時(shí)最大溫度變化（△Tmax），按照公式（10）計(jì)算最大升溫速率，結(jié)果應(yīng)符合4.3.2b)的要求。

???

?=??（10）

降??

式中：

V降max——最大降溫速率；

△Tmax——溫度從90℃±0.5℃升至50℃±0.5℃過(guò)程中的瞬時(shí)最大溫度變化；

△t——溫度采集時(shí)間間隔。

注：當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的，則此指標(biāo)不適用。

5.4.3擴(kuò)增模塊控溫精度

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)溫度循環(huán)文件，在55℃±5℃、72℃±5℃、95℃±5℃

11

范圍內(nèi)各取一個(gè)溫度點(diǎn)，設(shè)置恒溫2min，循環(huán)次數(shù)為5次。將溫度傳感器的感溫頭外涂上適量導(dǎo)熱介

質(zhì)（例：礦物油或?qū)峁柚龋湃肽K的測(cè)試孔（該孔應(yīng)盡量靠近儀器內(nèi)部傳感器）中，另一端

連接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)啟數(shù)據(jù)采集儀，確認(rèn)儀器工作正常，運(yùn)行編輯的文件，顯示溫度到達(dá)設(shè)定溫度恒

溫10s后，計(jì)時(shí)30s，記錄最高溫度和最低溫度，二者的差值的一半為ΔTi。連續(xù)記錄5個(gè)循環(huán)，ΔTi

（i=1，2…5）的最大值應(yīng)符合4.3.3的要求。

5.4.4擴(kuò)增模塊溫度準(zhǔn)確度

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)溫度循環(huán)文件，在55℃±5℃、72℃±5℃、95℃±5℃

范圍內(nèi)各取一個(gè)溫度點(diǎn)，設(shè)置恒溫2min，循環(huán)次數(shù)為5次。將溫度傳感器的感溫頭外涂上適量導(dǎo)熱介

質(zhì)（例：礦物油或?qū)峁柚龋?，放入模塊的測(cè)試孔（該孔應(yīng)盡量靠近儀器內(nèi)部傳感器）中，另一端

連接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)啟數(shù)據(jù)采集儀，確認(rèn)儀器工作正常，運(yùn)行編輯的文件，顯示溫度到達(dá)設(shè)定溫度恒

溫10s后，計(jì)時(shí)60s，每10s記錄一次溫度為T(mén)i（i=1，2，…6），其平均值Tm與設(shè)定溫度的差值應(yīng)符

合4.3.4的要求。

5.4.5擴(kuò)增模塊溫度均勻性

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)溫度循環(huán)文件，在55℃±5℃、72℃±5℃、95℃±5℃

范圍內(nèi)各取一個(gè)溫度點(diǎn)，設(shè)置恒溫2min，循環(huán)次數(shù)為5次。將溫度傳感器的感溫頭外涂上適量

導(dǎo)熱介質(zhì)（例：礦物油或?qū)峁柚龋?，放入模塊的測(cè)試孔（該孔應(yīng)盡量靠近儀器內(nèi)部傳感器）中，

另一端連接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)啟數(shù)據(jù)采集儀，確認(rèn)儀器工作正常，運(yùn)行編輯的文件，顯示溫度到達(dá)設(shè)定

溫度恒溫10s后，計(jì)時(shí)60s，記錄溫度為T(mén)i（i=1，2，…n），在模塊上隨機(jī)或者均勻選取n個(gè)孔位，

取Ti最大值與最小值，計(jì)算各孔位的溫度差值ΔT，結(jié)果應(yīng)符合4.3.5的要求。

a)當(dāng)核酸擴(kuò)增溫控模塊僅1個(gè)孔位，則此指標(biāo)不適用；

b)當(dāng)核酸擴(kuò)增溫控模塊孔位n（n＜6）個(gè)孔位，則至少選擇2個(gè)孔位；

c)當(dāng)核酸擴(kuò)增溫控模塊孔位n（n≥6）個(gè)孔位，則至少選擇6個(gè)孔位。

5.4.6擴(kuò)增模塊溫度持續(xù)時(shí)間準(zhǔn)確度

根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供的操作方法，編輯并運(yùn)行一個(gè)在45℃（恒溫時(shí)間記為t，t≥60s）和95℃（恒

溫時(shí)間記為t，t≥60s）之間循環(huán)的文件。將溫度傳感器的感溫頭外涂上適量導(dǎo)熱介質(zhì)（例：礦物油或?qū)В?1）

熱硅脂等），放入模塊的測(cè)試孔（該孔應(yīng)盡量靠近儀器內(nèi)部傳感器）中，另一端連接數(shù)據(jù)采集儀。開(kāi)

啟數(shù)據(jù)采集儀，確認(rèn)儀器工作正常，運(yùn)行編輯的文件，以95℃±0.5℃為計(jì)時(shí)參考點(diǎn)，自顯示溫度首次

到達(dá)計(jì)時(shí)參考點(diǎn)，計(jì)時(shí)開(kāi)始，至末次到達(dá)計(jì)時(shí)參考點(diǎn)結(jié)束，記錄時(shí)間為ti（i=1，2，…5），連續(xù)記錄

5個(gè)循環(huán)，按公式（11）計(jì)算相對(duì)偏差，結(jié)果應(yīng)符合4.3.6的要求。

12

相對(duì)偏差=（tm-t）/t×100%

式中：

tm——5個(gè)循環(huán)記錄時(shí)間的平均值；

t——編制的恒溫時(shí)間。

5.5熒光強(qiáng)度檢測(cè)

5.5.1熒光強(qiáng)度檢測(cè)重復(fù)性

在儀器測(cè)定范圍內(nèi)，隨機(jī)選取n（n≥1）個(gè)通道，分別加入配置好的高，中，低濃度的熒光染料（熒

光素25μL，液面最上層加入20μL石蠟油），重復(fù)檢測(cè)10次，光學(xué)采集目標(biāo)通道的熒光值。

分別計(jì)算高、中、低各濃度熒光染料測(cè)結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式（12）計(jì)算得出

變異系數(shù)CV，結(jié)果均應(yīng)符合4.4.1的要求。

CV=SD/M×100%（12）

式中：

CV——變異系數(shù)；

SD——標(biāo)準(zhǔn)差；

M——測(cè)量結(jié)果的平均值。

5.5.2熒光強(qiáng)度檢測(cè)精密度

在儀器測(cè)定范圍內(nèi)，隨機(jī)選取n（n≥1）個(gè)通道，隨機(jī)選取m個(gè)檢測(cè)孔。分別配制各通道的校準(zhǔn)熒

光染料溶液進(jìn)行檢測(cè)，高，中，低濃度每種校準(zhǔn)染料檢測(cè)1次，光學(xué)系統(tǒng)收集目標(biāo)通道的數(shù)據(jù)。分別

計(jì)算各濃度校準(zhǔn)染料測(cè)量結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式（12）計(jì)算得出變異系數(shù)CV，結(jié)果

均應(yīng)符合4.4.2的要求。

a)當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊僅1個(gè)孔位，則此指標(biāo)不適用；

b)當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊孔位n（n＜10）個(gè)孔位，則至少選擇2個(gè)孔位；

c)當(dāng)核酸擴(kuò)增模塊孔位n（n≥10）個(gè)孔位，則至少選擇10個(gè)孔位。

5.6不同通道熒光干擾

5.6.1隨機(jī)選取n（n≥2）個(gè)通道進(jìn)行檢測(cè)，分別配制非目標(biāo)通道的熒光染料溶液，光學(xué)系統(tǒng)收集所有

通道的數(shù)據(jù)，結(jié)果應(yīng)符合4.5的要求

5.6.2軟件具有通道熒光串?dāng)_修正功能或顏色補(bǔ)償功能的，在修正后或補(bǔ)償后，結(jié)果應(yīng)符合4.5的要

求。

13

5.7樣本檢測(cè)重復(fù)性

選用生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的試劑盒對(duì)高、中低濃度核樣本進(jìn)行檢測(cè)，每一濃度重復(fù)檢測(cè)10孔，計(jì)算其

Ct值（或濃度對(duì)數(shù)值）的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式（12）得出變異系數(shù)CV，結(jié)果均應(yīng)符合

4.6的要求。

5.8線性

5.8.1樣本線性

將已知濃度核酸樣本按照10倍或5倍數(shù)梯度稀釋后（至少稀釋5個(gè)梯度），按測(cè)試項(xiàng)目選用對(duì)應(yīng)

的試劑進(jìn)行檢測(cè)，每一濃度梯度平行測(cè)試3孔，取Ct均值與濃度對(duì)數(shù)值均值計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r，結(jié)

果應(yīng)符合4.7.1的要求。

5.8.2熒光線性

將已知濃度標(biāo)準(zhǔn)熒光染料梯度稀釋后（至少稀釋5個(gè)梯度），每一濃度梯度平行測(cè)試3孔，取稀

釋比例與熒光測(cè)定均值計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r，結(jié)果應(yīng)符合4.7.2的要求。

5.9電氣安全試驗(yàn)

按照GB4793.1、GB4793.6、GB4793.9標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果應(yīng)符合4.8的規(guī)定。

5.10電磁兼容性試驗(yàn)

按照GB/T18268.1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果應(yīng)符合4.9的規(guī)定。

5.11環(huán)境試驗(yàn)

按照GB/T14710標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果應(yīng)符合4.10的規(guī)定。

6標(biāo)識(shí)、標(biāo)簽和使用說(shuō)明書(shū)

6.1儀器銘牌

應(yīng)至少有下列內(nèi)容：

a)產(chǎn)品名稱、型號(hào)；

b)企業(yè)名稱、生產(chǎn)地址、聯(lián)系方式；

c)電源連接條件、輸入功率；

d)生產(chǎn)日期或產(chǎn)品序列號(hào)。

e)提供產(chǎn)品信息的標(biāo)簽符號(hào)，且標(biāo)簽符號(hào)應(yīng)符合YY/T0466.1的要求。

6.2包裝箱標(biāo)識(shí)、標(biāo)簽

14

應(yīng)至少有下列內(nèi)容：

a)產(chǎn)品名稱、型號(hào)；

b)企業(yè)名稱、生產(chǎn)地址、聯(lián)系方式；

c)電源連接條件、輸入功率；

d)生產(chǎn)日期或產(chǎn)品序列號(hào)；

e)凈重、毛重、體積（長(zhǎng)×寬×高）；

f)貯運(yùn)條件（如溫濕度）；

g)儲(chǔ)運(yùn)圖示符合GB/T191的規(guī)定。

6.3使用說(shuō)明書(shū)

儀器使用說(shuō)明書(shū)應(yīng)符合GB/T9969的要求。

7包裝、運(yùn)輸和貯存

7.1包裝

儀器包裝應(yīng)滿足以下要求：

a)外包裝（箱）上的標(biāo)識(shí)符號(hào)應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定；

b)包裝應(yīng)能保證產(chǎn)品免受自然和機(jī)械性損壞；

c)包裝（箱）內(nèi)應(yīng)附有使用說(shuō)明書(shū)、裝箱清單及產(chǎn)品檢驗(yàn)合格證。

7.2運(yùn)輸

按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的要求進(jìn)行運(yùn)輸。

7.3貯存

按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的要求。

15

附錄A

標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下不同溫度時(shí)純水的密度

單位為千克每立方米

℃0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.9

0999.840999.846999.853999.859999.865999.871999.877999.883999.888999.893

1999.898999.904999.908999.913999.917999.921999.925999.929999.933999.937

2999.940999.943999.946999.949999.952999.954999.956999.959999.961999.962

3999.964999.966999.967999.968999.969999.970999.971999.971999.972999.972

4999.972999.972999.972999.971999.971999.970999.969999.968999.967999.965

5999.964999.962999.960999.958999.956999.954999.951999.949999.946999.943

6999.940999.937999.934999.930999.926999.923999.919999.915999.910999.906

7999.901999.897999.892999.887999.882999.877999.871999.866999.880999.854

8999.848999.842999.836999.829999.823999.816999.809999.802999.795999.788

9999.781999.773999.765999.758999.750999.742999.734999.725999.717999.708

10999.699999.691999.682999.672999.663999.654999.644999.634999.625999.615

11999.605999.595999.584999.574999.563999.553999.542999.531999.520999.508

12999.497999.486999.474999.462999.450999.439999.426999.414999.402999.389

13999.377999.384999.351999.338999.325999.312999.299999.285999.271999.258

14999.244999.230999.216999.202999.187999.173999.158999.144999.129999.114

15999.099999.084999.069999.053999.038999.022999.006998.991998.975998.959

16998.943998.926998.910998.893998.876998.860998.843998.826998.809998.792

17998.774998.757998.739998.722998.704998.686998.668998.650998.632998.613

18998.595998.576998.557998.539998.520998.501998.482998.463998.443998.424

19998.404998.385998.365998.345998.325998.305998.285998.265998.244998.224

20998.203998.182998.162998.141998.120998.099998.077998.056998.035998.013

21997.991997.970997.948997.926997.904997.882997.859997.837997.815997.792

22997.769997.747997.724997.701997.678997.655997.631997.608997.584997.561

23997.537997.513997.490997.466997.442997.417997.393997.396997.344997.320

24997.295997.270997.246997.221997.195997.170997.145997.120997.094997.069

25997.043997.018996.992996.966996.940996.914996.888996.861996.835996.809

26996.782996.755996.729996.702996.675996.6