食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)和菌落總數(shù)的測定

食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)和菌落總數(shù)的測定食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)和菌落總數(shù)的測定摘要：菌落綜述和大腸菌群超標(biāo)是食品產(chǎn)品衛(wèi)生指標(biāo)中常見的質(zhì)量問題，國家絕大多數(shù)食品都制訂了菌落總數(shù)和大腸菌群的指標(biāo)，并對其數(shù)量做了詳細(xì)的規(guī)定。菌落總數(shù)和大腸菌群是食品中的安全性指標(biāo)，是影響產(chǎn)品質(zhì)量問題的常見指標(biāo)，在對食物進(jìn)行檢測的時候菌落總數(shù)以及大腸菌兩項指標(biāo)容易出現(xiàn)相應(yīng)的檢測問題{1】，為了熟悉和掌握大腸菌計數(shù)和菌落總數(shù)的測定的方法和技術(shù)，本次實驗以未清洗的生菜為實驗對象，用MPN計數(shù)法對大腸菌群進(jìn)行計數(shù)，用平板傾注的方法培養(yǎng)微生物后觀察獲得的單菌落來測定菌落總數(shù)。關(guān)鍵詞：生菜；大腸菌MPN計數(shù)法；菌落總數(shù)；平板傾注一、前言：食品中菌落總數(shù)是指食品樣檢經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時間、PH值、需氧性質(zhì)等）培養(yǎng)后，所得1mL（或1g）檢樣中形成菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)測定通常是用來判定食品被微生物污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量，測定結(jié)果反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生評價。大腸菌群是需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胚桿菌。該菌群主要來自于人和溫血動物的腸道，需氧與兼性厭氧，不形成芽孢;在35~37℃條件下，48小時內(nèi)能發(fā)酵乳糖聲酸產(chǎn)氣，食品中大腸菌群數(shù)以每1mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)（themostprobablenumber,MPN）表示。[2]二、實驗材料與方法（一）實驗材料1、實驗器材高壓滅局鍋恒溫培養(yǎng)箱電子天平2、實驗材料及試劑未經(jīng)清洗的生菜無菌生理鹽水3、菌落總數(shù)的測定所用培養(yǎng)基及其配方平板計數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000mLPH1.0±0.24、大腸菌群計數(shù)所用培養(yǎng)基及其配方越貴基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯，結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA），磷酸鹽緩沖液，無菌生理鹽水，無菌1mol/L氫氧化鈉溶液，無菌1mol/L鹽酸溶液。（二）實驗方法（1）培養(yǎng)基、生理鹽水的配制及滅菌1、生理鹽水稱取氯化鈉8g溶于1000mL蒸餾水中，配成0.8%的生理鹽水氯化鈉溶解完全后，取90ml分裝到250ml帶玻璃珠的三角瓶中，其余分裝到10支試管，每支9ml，包裝好用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌20min后備用。2、平板計數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基稱取胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、瓊脂溶于1000ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)PH為7.0±0.2，待溶質(zhì)溶解完全后分裝到三個250ml三角瓶中，包裝好置于高壓滅菌鍋中滅菌20min。滅菌備用。3、月規(guī)矩硫酸鹽胰蛋白胨（lST)r肉湯稱取胰蛋白胨12.0g、氯化鈉3.0g、乳糖5.0g、磷酸氫二鉀1.65g，月桂基硫酸鈉0.06g溶于蒸餾水600ml中，調(diào)節(jié)PH6.8±0.2，待溶質(zhì)溶解完全后取200ml培養(yǎng)基分裝到20根試管中，每根試管10ml，每根試管放入倒置的小導(dǎo)管，包裝好后，置于高壓滅菌鍋中滅菌15min。滅菌備用。4、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯配制BGLB肉湯600ml,待溶質(zhì)溶解完全