莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的分析-20200217

第十三章莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的分析沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院80K藥物分析莨菪烷類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1鑒別試驗(yàn)2特殊雜質(zhì)與檢查3含量測(cè)定4目錄CONTENTS第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析莨菪烷類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1第一節(jié)CONTENTS第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、典型藥物莨菪烷生物堿是從茄科植物如顛茄、莨菪和白曼陀羅等中提取的具有對(duì)M受體阻斷作用的生物堿。這類(lèi)生物堿都是由莨菪醇與不同有機(jī)酸所成的酯。典型藥物結(jié)構(gòu)：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析硫酸阿托品（AtropineSulfate）一、典型藥物典型藥物結(jié)構(gòu)：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析氫溴酸后馬托品（Homatropine

Hydrobromide）硫酸莨菪堿（Hyoscyaminesulfate）一、典型藥物典型藥物結(jié)構(gòu)：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析氫溴酸山莨菪堿（Anisodamine

Hydrobromide）氫溴酸東莨菪堿（Scopolamine

Hydrobromide）一、典型藥物典型藥物結(jié)構(gòu)：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析甲溴東莨菪堿（Methscopolamin

Bromide）丁溴東莨菪堿（Scopolamin

Butylbromide）二、主要理化性質(zhì)第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析水解性

本類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)，反應(yīng)式如下：阿托品莨菪醇莨菪酸二、主要理化性質(zhì)堿性阿托品和東莨菪堿的結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強(qiáng)的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。旋光性氫溴酸東莨菪堿結(jié)構(gòu)中含有不對(duì)稱碳原子，呈左旋體，比旋度為-24ο至-27ο，而阿托品結(jié)構(gòu)中雖然也含有不對(duì)稱碳原子，但因外消旋化而為外消旋體，無(wú)旋光性。利用此性質(zhì)可區(qū)別阿托品與東莨菪堿。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析鑒別試驗(yàn)2第二節(jié)CONTENTS第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、Vitali鑒別反應(yīng)Vitali鑒別反應(yīng)系托烷生物堿類(lèi)的特征反應(yīng)。原理：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、Vitali鑒別反應(yīng)Vitali鑒別反應(yīng)系托烷生物堿類(lèi)的特征反應(yīng)。原理：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析托烷生物堿水解莨菪酸發(fā)煙硝酸

三硝基衍生物KOHaq（C2H5OH）固體KOH有色的醌型產(chǎn)物（深紫色）ChP氫溴酸山莨菪堿的鑒別：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘?jiān)爬?，加乙?～3滴，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。二、與硫酸-重鉻酸鉀反應(yīng)藥物水解后生成莨菪酸，可與硫酸-重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛而逸出苦杏仁的臭味。反應(yīng)式如下：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析三、與生物堿顯色劑或沉淀劑反應(yīng)生物堿在酸性溶液中與重金屬鹽或大分子酸生成難溶性鹽、復(fù)鹽或配合物沉淀。不同沉淀劑與生物堿反應(yīng)的靈敏度不同。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析生物堿沉淀試劑反應(yīng)條件及結(jié)果碘化鉍鉀試液橙色或棕紅色沉淀碘化鉀碘試液棕色或棕褐色沉淀碘化汞鉀試液白色或淡黃色沉淀三硝基苯酚試液結(jié)晶性沉淀并有特定熔點(diǎn)硅烏酸試液白色或淡黃色或黃棕色沉淀磷烏酸試液淡黃色沉淀三、與生物堿顯色劑或沉淀劑反應(yīng)生物堿在酸性溶液中與重金屬鹽或大分子酸生成難溶性鹽、復(fù)鹽或配合物沉淀。不同沉淀劑與生物堿反應(yīng)的靈敏度不同。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析ChP氫溴酸東莨菪堿的鑒別：取本品約10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中，加氨試液使成堿性后，加氯仿5ml，搖勻，分取氯仿液，置水浴上蒸干，殘?jiān)佣然囊掖既芤海ㄈ《然?g，加60%乙醇使成100ml）1.5ml，即生成白色沉淀（與阿托品及后馬托品的區(qū)別）。三、光譜鑒別法紫外光譜法

一般通過(guò)比較藥物的λmax、λmin或吸收光譜的一致性進(jìn)行鑒別，若不止一個(gè)峰（谷），也可比較其吸光度或吸光系數(shù)的比值來(lái)鑒別。ChP丁溴東莨菪堿的鑒別：取本品，加0.01M鹽酸溶液并稀釋制成每1ml中含1mg的溶液，測(cè)定其紫外吸收光譜，在252nm、257nm與264nm波長(zhǎng)處有最大吸收。紅外光譜法

CHP收載的原料藥一般都采用紅外光譜法進(jìn)行鑒別。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析五、色譜法一般用于已知生物堿的鑒別，主要有TLC、HPLC、GC、PC等，TLC法最為常用。注意：

1）用硅膠吸附劑時(shí)，需在流動(dòng)相或固定相中加堿，使生物堿游離或中和硅膠表面的弱酸性，以防拖尾。

2）單體生物堿可用其化學(xué)對(duì)照品為陽(yáng)性對(duì)照物；中藥中的生物堿宜用化學(xué)對(duì)照品和對(duì)照藥材同時(shí)對(duì)照。

3）用保留值或相對(duì)保留值定性，以供試品溶液與對(duì)照品溶液主峰保留時(shí)間的一致性作為鑒別依據(jù)。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析六、硫酸鹽和溴化物的反應(yīng)為了改善莨菪烷類(lèi)生物堿藥物的水溶性和穩(wěn)定性，它們大都制成硫酸鹽或氫溴酸鹽。所以，它們的水溶液則分別顯硫酸鹽或溴化物的鑒別反應(yīng)。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析ChP氫溴酸東莨菪堿的鑒別：

1）取供試品溶液，加稀硝酸使成酸性，滴加硝酸銀試液，即生成淡黃色凝乳狀沉淀，分離，沉淀能在氨試液中微溶，但在硝酸中幾乎不溶；

2）取供試品溶液，滴加氯試液，溴即游離，加氯仿振搖，氯仿層顯黃色或紅棕色。特殊雜質(zhì)與檢查3第三節(jié)CONTENTS第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查氫溴酸東莨菪堿是從茄科植物顛茄、莨菪、白曼陀羅中提取得到的莨菪堿的氫溴酸鹽。我國(guó)是從茄科植物曼陀羅的干燥品（洋金花）中提取東莨菪堿后制成氫溴酸鹽。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取總生物堿Na2CO3,CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75%C2H5OH/精制成品生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中可能引入的有關(guān)物質(zhì)可通過(guò)酸度、其他生物堿和易氧化物檢查進(jìn)行控制。一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查酸度東莨菪堿的堿性很弱，對(duì)石蕊試紙幾乎不顯堿性反應(yīng)。氫溴酸東莨菪堿為強(qiáng)酸弱堿鹽，通過(guò)其5%的水溶液pH為4.0-5.5可控制酸性雜質(zhì)。易氧化物主要檢查生產(chǎn)過(guò)程中可能引入的雜質(zhì)阿撲東莨菪堿（脫水東莨菪堿）及其它含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)。它們的紫外吸收最大波長(zhǎng)紅移，可使高錳酸鉀溶液褪色。ChP氫溴酸東莨菪堿易氧化物的檢查：

取本品0.15g，加水5ml溶解后，在15-20℃加高錳酸鉀滴定液（0.02M）0.05ml，10min內(nèi)紅色不得完全消失。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、氫溴酸東莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查其他生物堿本品水溶液加入氨水試液不得發(fā)生混濁。當(dāng)有其它生物堿存在時(shí)，則易產(chǎn)生混濁。ChP氫溴酸東莨菪堿其他生物堿的檢查：

取本品0.10g，加水2ml溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液2-3d，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類(lèi)白色渾濁。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析存在其他生物堿合格本品水溶液+氨試液混濁不混濁二、硫酸阿托品中有關(guān)物質(zhì)的檢查硫酸阿托品為消旋體，無(wú)旋光性，而莨菪堿為左旋體，可以利用旋光性對(duì)莨菪堿雜質(zhì)進(jìn)行檢查。ChP用HPLC法檢查其中有關(guān)物質(zhì)，通過(guò)峰面積的比值及保留時(shí)間來(lái)控制雜質(zhì)限度。ChP硫酸阿托品中莨菪堿的檢查：

取本品按干燥品計(jì)算，加水溶解并制成沒(méi)1ml中含0.5mg的溶液，照旋光度測(cè)定法測(cè)定，旋光度不得過(guò)-40°。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析含量測(cè)定4第三節(jié)CONTENTS第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析非水滴定法酸性染料比色法010203高效液相色譜法莨菪烷類(lèi)抗膽堿藥物的藥理活性均較強(qiáng)，臨床使用劑量較小，因此測(cè)定方法要專屬、靈敏。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、酸性染料比色法此法是針對(duì)生物堿藥物，在一定的pH條件下，可與某些酸性染料結(jié)合而呈色，進(jìn)而可用分光光度法進(jìn)行測(cè)量。此法樣品用量少，靈敏度高。特別適用于少量供試品、尤其是小劑量藥物制劑的定量分析。有一定專屬性和準(zhǔn)確度?；驹恚涸谶m當(dāng)pH的水溶液中，堿性藥物（B）可與氫離子結(jié)合成陽(yáng)離子（BH+），而一些酸性染料（如磺酸酞類(lèi)指示劑等），如溴甲酚綠、溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)等，可解離成陰離子（In-）；兩種離子定量地結(jié)合，即生成具有吸收光譜明顯紅移的有色離子對(duì)（BH+In-），且可以被有機(jī)溶劑定量萃取，通過(guò)測(cè)定有機(jī)相中有色離子對(duì)的特征波長(zhǎng)處的吸光度，即可進(jìn)行堿性藥物的含量測(cè)定。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析一、酸性染料比色法反應(yīng)示意式：第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析也可將呈色的有機(jī)相經(jīng)堿化（如加入醇制氫氧化鈉），使與有機(jī)堿結(jié)合的酸性染料釋放出來(lái)，測(cè)定其吸光度，在計(jì)算出堿性藥物的含量。一、酸性染料比色法影響因素：1）水相最佳pH的選擇只有選擇合適的pH，使有機(jī)堿性藥物均成陽(yáng)離子（BH+），而同一pH條件下酸性染料電離足夠的陰離子（In-），堿性藥物才能定量生成離子對(duì)，并完全溶于有機(jī)溶劑中，而過(guò)量的燃料完全保留在水相中，才能保證定量的測(cè)定。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析pH過(guò)低抑制酸性染料的解離、使酸性陰離子濃度過(guò)低影響離子對(duì)的形成；pH過(guò)高，有機(jī)藥物呈游離態(tài)，也抑制離子對(duì)的形成，因此須有一個(gè)最佳pH值存在，使離子對(duì)生成最有利。其選擇方法一般根據(jù)藥物與染料的pK值及水相與有機(jī)相的分配系數(shù)而定。一、酸性染料比色法影響因素：2）酸性染料及其濃度當(dāng)用的酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠、甲基橙等。第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析定量結(jié)合，產(chǎn)物溶解性好；可稍過(guò)量。一般認(rèn)為對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，只要量足夠大就可以；但濃度過(guò)高的話就會(huì)形成嚴(yán)重的乳化層，且不易于除去，往往影響測(cè)定結(jié)果。一、酸性染料比色法影響因素：3）有機(jī)溶劑的選擇當(dāng)用的酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠、甲基橙等。4）水分的影響

影響結(jié)果，脫水劑或?yàn)V紙除去水分5）酸性染料中的有色雜質(zhì)

影響結(jié)果，先用萃取溶劑萃取除去第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析提取效率高，氯仿最理想；一般應(yīng)選擇對(duì)有機(jī)堿藥物與酸性染料形成離子對(duì)萃取效率高、能與離子對(duì)形成氫鍵、不與或極少與水混溶的有機(jī)溶劑作為萃取溶劑。二、非水溶液滴定法第十三章莨菪烷類(lèi)抗瘧藥物的分析

非水溶液滴定法是在非水溶劑中進(jìn)行的酸堿滴定測(cè)定法。主要用來(lái)測(cè)定有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽以及有機(jī)酸堿金屬鹽類(lèi)的含量。

硫酸是二元酸，在水溶液中可以發(fā)生二級(jí)解離，生成SO42-。但是冰醋酸非水介質(zhì)中，只能發(fā)生一級(jí)解離，生成HSO4-,即只提供一個(gè)H+。所以硫酸鹽類(lèi)藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，可用高氯酸滴定液直接滴定。(BH+)2

?SO42-+HClO4

→(BH+)?ClO4+(BH+)?HSO42-

硫酸阿托品與高氯酸反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量摩爾比為1:1。三、高效液相色譜法第十