DB21T 3711-2023 桓仁山參粉鑒定技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.01CCSB3821IDB21/T3711—2023前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4技術(shù)要求 5檢驗方法 26結(jié)果判定 2附錄A（規(guī)范性）顯微鑒別檢驗方法 3附錄B（規(guī)范性）薄層色譜鑒別檢驗方法 4附錄C（規(guī)范性）人參皂苷含量測定方法 5DB21/T3711—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省林業(yè)和草原局提出并歸口。本文件起草單位：沈陽藥科大學(xué)、遼寧省參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心、龍寶參茸股份有限公司、遼寧上藥好護(hù)士藥業(yè)(集團(tuán))有限公司、本溪國家中成藥工程技術(shù)研究中心有限公司、遼寧省經(jīng)濟(jì)作物研究所、遼寧恒源堂藥業(yè)有限公司。本文件主要起草人：路金才、呂重寧、王輝、劉立鳳、鄭繼宇、孫立夫、韓凌、邵平、孫文松、武梅福。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省林業(yè)和草原局（遼寧省沈陽市太原街2號聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：沈陽藥科大學(xué)（遼寧省沈河區(qū)文化路103號聯(lián)系電話1DB21/T3711—2023桓仁山參粉鑒定技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了桓仁山參粉鑒定的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、檢驗方法和結(jié)果判定等要求。本文件適用于桓仁山參粉的鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國藥典》（2020版）一部3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1人參ginsengradixetrhizome五加科植物人參屬多年生草本植物人參（PanaxginsengC.A.Mey.）的干燥根及根莖。3.2桓仁山參Huanrenmountainginseng系指產(chǎn)于遼寧省桓仁滿族自治縣，通過人為播種方式將人參籽播種在適宜的森林環(huán)境條件下，自然生長15年及以上的人參。3.3桓仁山參粉powderofHuanrenmountainginseng將桓仁山參粉碎至65目以上得到的粉末。4技術(shù)要求4.1基本要求4.1.1本文件中的儀器設(shè)備詳見附錄。4.1.2本文件中所用的水，色譜分析試驗用水為GB/T6682規(guī)定的二級水或二級以上水，在未注明其他要求時，應(yīng)符合GB/T6682中三級以上（含三級）水的規(guī)格。所用試劑，在未注明其他規(guī)格時，均指分析純（A.R.）。4.2質(zhì)量要求4.2.1性狀桓仁山參粉應(yīng)為香氣特異，味微苦、甘的淡黃白色粉末。2DB21/T3711—20234.2.2顯微特征及指標(biāo)桓仁山參粉的顯微特征應(yīng)符合下列要求：a)草酸鈣簇晶棱角銳尖，數(shù)量不低于160個/毫克；b)樹脂道碎片易見，含黃色塊狀分泌物；c)木栓細(xì)胞表面觀類方形或多角形，壁細(xì)波狀彎曲；d)網(wǎng)紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管。4.2.3薄層鑒別特征及指標(biāo)桓仁山參粉末樣品薄層色譜圖中，在與人參對照藥材色譜和人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rf對照品及人參皂苷Rg1對照品色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)。4.2.4人參皂苷含量及組分特征指標(biāo)桓仁山參粉的人參皂苷含量及組分特征指標(biāo)應(yīng)符合表1的要求（按照干燥品計算）。表1桓仁山參粉人參皂苷含量指標(biāo)1人參皂苷含量(%)25檢驗方法5.1取樣待檢驗樣品逐批取樣，每一批按隨機(jī)方法使用采樣器（探子）抽取樣品，每次取樣量不得少于檢驗所需用量的3倍，其中1/3供分析檢測用，1/3供復(fù)核用，其余1/3留樣保存。5.2性狀鑒別在自然光線下，將待測樣品放置白色搪瓷盤中，在室內(nèi)自然光線下，無陽光直射處觀察，并通過鼻、口等感覺器官，對待測樣品的形、色、氣、味進(jìn)行評價。5.3顯微鑒別按附錄A描述的方法執(zhí)行。5.4薄層鑒別按附錄B描述的方法執(zhí)行。5.5人參皂苷含量測定按附錄C描述的方法執(zhí)行。6結(jié)果判定待檢驗樣品全部符合4.2.1、4.2.2、4.2.3、4.2.4項規(guī)定的，判定為桓仁山參粉。DB21/T3711—2023（規(guī)范性）顯微鑒別檢驗方法A.1原理顯微鑒別法系指用顯微鏡對藥材（飲片）切片、粉末、解離組織或表面制片及含飲片粉末的制劑中飲片的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別的一種方法。A.2儀器光學(xué)顯微鏡A.3試劑水合氯醛、丙三醇（甘油）A.4其他材料載玻片、蓋玻片、解剖針、酒精燈A.5溶液配制水合氯醛溶液的配制：取水合氯醛50g，加蒸餾水15ml與甘油10ml，使溶解，即得。稀甘油溶液的配制：取甘油33ml，加蒸餾水100ml，即得。A.6鏡檢精密稱取待檢驗樣品20mg，加入水合氯醛溶液1mL輕搖混勻，精密量取0.020mL上述混懸液置載玻片上，酒精燈加熱透化，再加0.010mL水合氯醛溶液透化，滴加0.015mL稀甘油溶液裝片于顯微鏡下觀察其顯微特征，同時觀察面積18mm×18mm（3.24cm2），并以草酸鈣簇晶為顯微特征物計數(shù)。4DB21/T3711—2023（規(guī)范性）薄層色譜鑒別檢驗方法B.1原理薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖對比，用于鑒別、檢查或含量測定。B.2儀器硅膠G薄層板、點(diǎn)樣器、展開缸、玻璃噴霧瓶、紫外燈、干燥箱。B.3試劑三氯甲烷、正丁醇、濃氨溶液、甲醇、乙酸乙酯、濃硫酸、乙醇。B.4其他材料人參粉、人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rf對照品及人參皂苷Rg1對照品。B.5操作方法B.5.1待檢驗樣品溶液的制備取待檢驗樣品粉末0.5g，加石油醚20mL，加熱回流1h，棄去石油醚液，藥渣揮干溶劑，加水飽和正丁醇10mL，超聲處理30min，吸取上清液6mL，加18mL氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，即得待檢驗樣品溶液。B.5.2對照藥材溶液的制備取對照人參藥材0.5g，按“待檢驗樣品溶液的制備”方法制成對照藥材溶液。B.5.3對照品溶液的制備取人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rf對照品及人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。B.5.4點(diǎn)樣與展開吸取上述三種溶液各1μl～2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲40：22：10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，待檢測。B.5.5展色與檢視晾干的薄層板噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（254nm）下檢視。5DB21/T3711—2023（規(guī)范性）人參皂苷含量測定方法C.1原理高效液相色譜法系采用高壓輸液泵，將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測器檢測，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。C.2儀器高效液相色譜儀、超聲提取器、萬分之一天平、十萬分之一天平。C.3試劑色譜甲醇、色譜乙腈、分析純磷酸。C.4其他材料人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rg1對照品及人參皂苷Ro對照品。C.5色譜參考條件十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（250×4.6mm，5μm流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水（B檢測波長：203nm；進(jìn)樣量：10μL；流速：1.3ml/min；梯度洗脫程序見表C.1。理論塔板數(shù)按Re計算不低于6000，人參皂苷Rb1與R0分離度不低于1.5，計算方法見C.6.4。表C.1梯度洗脫程序0C.6操作方法C.6.1對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Ro對照品適量，加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液，搖勻，作為對照品溶液。C.6.2待檢驗樣品溶液的制備6DB21/T3711—2023取待檢驗樣品約0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入10mL70%的甲醇，稱重，超聲（功率250W，頻率50kHz）提取30min，冷卻至室溫后，用70%的甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過，取續(xù)濾液，作為待檢驗樣品溶液。C.6.3測定分別精密吸取對照品溶液與待檢驗樣品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定,外標(biāo)一點(diǎn)法計算待檢驗樣品中人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Ro的含量。C.6.4計算公式C.6.4.1理論塔板數(shù)：式中：n——理論塔板數(shù)tR——色譜峰的保留時間，單位為分鐘（min）或長度（cmw——色譜峰的峰寬，單位為分鐘（min）或長度（cm）；w?/2——色譜峰的半高峰寬，單位為分鐘（min）或長度（cm計算時保留時間與峰寬或保留時間與半高峰寬單位需保持一致。C.6.4.2分離度：式中：R——分離度；tR2——相鄰兩色譜峰中后一峰的保留時間，單位為分鐘（min）或長度（cm）；tR1——相鄰兩色譜峰中前一峰的保留時間，單位為分鐘（min）或長度（cm）；W2——相鄰兩色譜峰中后一峰的峰